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质谱法分析烘焙对花生过敏原ara h 1潜在致敏性的影响

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食品科学 2021年第3期42卷 1-6页

作者：周红菲吴志华张英陈红兵南昌大学食品科学与技术国家重点实验室江西南昌330047 南昌大学食品学院江西南昌330031 南昌大学中德联合研究院江西南昌330047

为研究烘焙对花生过敏原ara h 1潜在致敏性的影响,采用高离液序列盐溶液从鲜花生和烘焙花生中提取总蛋白,通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析烘焙前后蛋白条带变化情况,并对其中的花生主要过敏蛋白ara h 1条带进行质谱和Swiss-M... 详细信息

为研究烘焙对花生过敏原ara h 1潜在致敏性的影响,采用高离液序列盐溶液从鲜花生和烘焙花生中提取总蛋白,通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析烘焙前后蛋白条带变化情况,并对其中的花生主要过敏蛋白ara h 1条带进行质谱和Swiss-Model模型分析。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳结果显示,烘焙花生蛋白出现了大分子聚合物条带以及较多弥散状蛋白条带,说明烘焙过程中蛋白质会发生聚集,同时也可能发生降解。对鲜花生ara h 1条带的质谱分析结果显示,检测出70条肽段,覆盖率达到79.2%;而烘焙后其中40条肽段未能检出,但新增1条肽段,且覆盖率降至43.9%。全部71个肽段涉及到ara h 1的18个过敏原线性表位,酶解后鲜花生中检出16个过敏原线性表位被破坏,烘焙花生中仅发现12个被破坏。结论:烘焙加工会破坏蛋白质高级结构,掩盖了部分酶切位点,减少了酶解对过敏原线性表位的破坏,这可能是导致烘焙加工后ara h 1致敏性强于未加工样品的原因。

关键词：烘焙花生 ara h 1 质谱结构致敏性

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花生致敏原ara h 1的重组表达与纯化

中国食品学报 2020年第8期20卷 20-28页

作者：田阳饶欢薛文通中国农业大学食品科学与营养工程学院北京100083

ara h 1是花生中含量最高的过敏原,也是致敏性较高的蛋白之一。目前提纯ara h 1的方法大多涉及2至3步柱层析,步骤繁琐且成本较高。本文中,将带有6×his标签的ara h 1基因与pET-32a表达载体融合,构建重组质粒并转化大肠杆菌BL21(DE3)pLy... 详细信息

ara h 1是花生中含量最高的过敏原,也是致敏性较高的蛋白之一。目前提纯ara h 1的方法大多涉及2至3步柱层析,步骤繁琐且成本较高。本文中,将带有6×his标签的ara h 1基因与pET-32a表达载体融合,构建重组质粒并转化大肠杆菌BL21(DE3)pLysS,诱导使其表达目标蛋白。菌体裂解后使用Ni-NTA吸附、梯度洗脱对ara h 1进行纯化。采用质谱及Western-blot鉴定纯化蛋白的种类及免疫活性。结果显示,质粒中目标基因的序列与NCBI数据库中ara h 1的基因数据相符;300 mmol/L异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷22℃诱导菌液22 h时蛋白表达量最高;添加15 mmol/L十二烷基磺酸钠可将蛋白释放到上清液中,使用含50,100 mmol/L咪唑的洗脱液分别洗脱2次和1次后得到纯度较高且免疫原性良好的重组ara h 1。

关键词：花生过敏原 ara h 1 重组蛋白蛋白纯化

低致敏蛋白ara h 1复合益生菌发酵花生乳制备工艺优化

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食品与机械 2023年第6期39卷 180-185,194页

作者：孙畅吕呈蔚李铁柱胡济美黄威吉林省农业科学院农产品加工研究所吉林长春130033 中国国际工程咨询有限公司北京100048

目的:研制低致敏复合乳酸菌发酵花生乳。方法:利用试剂盒测定不同品种花生中的粗蛋白含量及ara h 1含量,选取ara h 1含量最低的花生品种制作发酵乳;以接菌量、接菌种类、发酵时间及糖添加量为考察因素,ara h 1含量为测定结果,采用响应... 详细信息

目的:研制低致敏复合乳酸菌发酵花生乳。方法:利用试剂盒测定不同品种花生中的粗蛋白含量及ara h 1含量,选取ara h 1含量最低的花生品种制作发酵乳;以接菌量、接菌种类、发酵时间及糖添加量为考察因素,ara h 1含量为测定结果,采用响应面法优化致敏蛋白ara h 1含量下降最多的发酵花生乳制备工艺;制作复合益生菌发酵花生乳,并对产品的口感、组织状态和风味进行感官评价。结果:当接菌量为4%、接种嗜热链球菌和保加利亚乳杆菌、发酵4 h、糖添加量为6%时,发酵花生乳中的主要过敏原ara h 1减少70%,含量为48μg/g,且感官评分达到80分。结论:经工艺优化获得了致敏蛋白ara h 1含量低,凝乳效果好,口味怡人的复合益生菌发酵花生制品。

关键词：花生 ara h 1 响应面复合益生菌发酵

高纯度花生过敏原蛋白ara h 1的规模化放大制备

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高纯度花生过敏原蛋白Ara h 1的规模化放大制备

作者：隗啸南南昌大学

学位级别：硕士

花生过敏是由花生中的某些蛋白引起的超敏反应,严重威胁着过敏患者的身体健康。其中arah 1是花生中一种7S贮藏蛋白,占花生总蛋白的12-16%,约有90%以上的花生过敏患者对其过敏。因此,制备出高纯度的过敏原蛋白ara h1对于花生过敏研究至... 详细信息

花生过敏是由花生中的某些蛋白引起的超敏反应,严重威胁着过敏患者的身体健康。其中arah 1是花生中一种7S贮藏蛋白,占花生总蛋白的12-16%,约有90%以上的花生过敏患者对其过敏。因此,制备出高纯度的过敏原蛋白ara h1对于花生过敏研究至关重要。本论文工作包括(1)arah 1实验室纯化方案的研究;(2)arah 1的小试规模放大纯化;(3)花生过敏原蛋白arah1纯化的中试工艺设计。研究的主要内容、结果和结论如下。1.采用硫酸铵分级沉淀法(0%、80%、100%)处理花生蛋白浸提液,并设计了三种层析纯化方案进行预实验,最终确定先阴离子交换层析(柱床规格1.6cm×36cm,流速 1.5ml/min,0-300mmol/LNaCl 浓度梯度洗脱,500ml),再羟基磷灰石层析(柱床规格 1.6cm×6cm,流速 0.8ml/min,20-100-150-200mmol/L磷酸盐缓冲液阶梯式梯度洗脱)的两步纯化策略。对该层析纯化方案进行的重复实验表明,该方法具有很好的稳定性,一次纯化周期arah 1的产量在120mg以上,最终得到的arah 1经SDS-PAGE电泳检测,纯度为90%以上。对纯化蛋白进行蛋白质肽指纹质谱分析表明,电泳中190kD、64kD、33kD的条带分别为arah 1三聚体、arah 1单体、arah 1片段。该纯化方法通量大、稳定性好、设备简单、纯化产品纯度高,适合于小试规模放大实验。2.完成了基于层析纯化方案的10倍放大小试实验,即阴离子交换层析柱床规格3.5cm×36cm,流速7.2ml/min,洗脱缓冲液浓度范围不变,体积为2,400ml;羟基磷灰层析柱床规格2.6cm×18cm,流速1.5ml/min,洗脱缓冲液浓度范围不变。多次重复实验表明该纯化方案重现性好,一次纯化周期中arah 1的产量达到1克以上。将实验室预实验纯化得到的ara h 1与小试纯化得到的ara h 1进行圆二色光谱分析和ANS荧光探针表面疏水性分析,结果表明它们的二级结构和蛋白表面疏水性无明显差异。另外,产品的得率和纯度得到了很好的保持,为后面的中试设计提供了可靠的实验参数。3.设计完成了适合于arah 1中试生产的工艺流程,规模为小试纯化规模的10倍,即一个纯化周期得到l0g以上纯度在90%以上的ara h 1。通过设计完成了设备选型,并绘制了 ara h 1中试纯化工艺的设备流程图,为ara h 1的工业化制备奠定了基础。

关键词：花生过敏 ara h 1 纯化中试设计

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食品中花生过敏原蛋白质定量检测的研究

食品中花生过敏原蛋白质定量检测的研究

作者：洪宇伟浙江工业大学

学位级别：硕士

食物过敏可导致某些人群严重的食品安全问题,已经引起全球范围内的广泛关注。目前尚没有食物过敏的有效治疗方法,过敏患者只能通过避免食用含有过敏原成分的食物来避免食物过敏。但是,食品在生产加工、储存、运输、销售过程中有可能被... 详细信息

食物过敏可导致某些人群严重的食品安全问题,已经引起全球范围内的广泛关注。目前尚没有食物过敏的有效治疗方法,过敏患者只能通过避免食用含有过敏原成分的食物来避免食物过敏。但是,食品在生产加工、储存、运输、销售过程中有可能被过敏原污染。因此,确定各类加工食品中是否含有食物过敏原成分,对于预防食用者发生食物过敏反应具有重要意义。本论文旨在结合蛋白组学和液相色谱质谱联用技术建立针对植物过敏蛋白的检测平台,并开展食品中花生等过敏原残留的定量检测方法的研究。选择花生作为主要研究对象,利用专一酶切技术、特异肽的唯一性、质谱的高分辨蛋白数据库以及低分辨按计划MRM的高灵敏度等技术,建立针对花生过敏原蛋白的定量检测方法,并将该方法应用到其他植物过敏原蛋白的检测中。本论文选择花生蛋白中的致敏蛋白ara h 1和ara h 2作为研究的目标蛋白,结合蛋白组学和液质联用技术,筛选出该两种致敏蛋白的特异肽段,人工合成该特异肽段标准品和特异肽段内标,建立了直接检测花生致敏蛋白ara h 1和ara h 2的准确定量检测方法。本方法具有特异性强、灵敏度高、定量准确等优点,致敏蛋白ara h 1和ara h2的检测灵敏度分别为8.59μg/g与4.45μg/g,回收率均在96.6%～100.0%和106.0%～107.8%之间。同时还对全国不同地区的20种花生中致敏蛋白ara h 1和ara h 2的含量进行检测分析以及考察了烘培时间对两种致敏蛋白的影响情况。因为目前国际上对烘培食品中花生过敏原残留量检测限量标准是以花生蛋白计,所以最终选择了ara h 2作为生物标记物,以该标记物的含量折算烘焙食品中花生蛋白的含量。本论文根据所测20种花生的过敏原含量和总蛋白含量初步统计得出致敏蛋白ara h 2和花生蛋白的换算系数。并且以此建立了以ara h 2为生物标记物检测烘焙食品中花生蛋白残留量的准确定量方法。以ara h 2作为生物标记物检测了10种烘培食品中花生蛋白的残留量。其定量限可达到6.23ug/g,回收率在107.0%～113.2%之间。

关键词：花生过敏原液相色谱串联三重四级杆质谱 ara h 1 ara h2 特异肽