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中华肾脏病杂志 2002年第3期18卷 159-165页

作者：梁秀彬张宏王海燕北京大学第一医院肾内科北京大学肾脏病研究所 100034

目的采用基因芯片技术来筛选新基因angrem104的功能相关基因,为进一步的基因功能研究提供线索。方法建立新基因angrem104的正义和反义表达的系膜细胞模型,应用含有4000个人类基因的cDNA表达谱芯片,对过量表达angrem104基因和抑制表达A... 详细信息

目的采用基因芯片技术来筛选新基因angrem104的功能相关基因,为进一步的基因功能研究提供线索。方法建立新基因angrem104的正义和反义表达的系膜细胞模型,应用含有4000个人类基因的cDNA表达谱芯片,对过量表达angrem104基因和抑制表达angrem104基因的人肾小球系膜细胞RNA表达进行检测。部分基因的差异表达由RT-PCR方法来验证。结果筛选出的差异表达基因共96个,其中94个基因上调表达,2个基因下调表达。差异表达的基因涉及到细胞外基质和受体蛋白、细胞信号传导相关基因、DNA结合及转录相关蛋白、免疫相关蛋白、细胞骨架和动力蛋白和细胞合成及代谢相关蛋白等。特别是纤连蛋白(FN)及整合素β1(integrin β1)表达明显上调。RT-PCR的方法也证实了angrem104与FN表达的相关性。结论应用作为研究基因功能有效手段的基因表达谱芯片技术来筛选新基因angrem104的功能相关基因,发现angrem104与FN的表达有关,为其功能研究提供了重要线索。

关键词：血管紧张素Ⅱ 纤连蛋白基因表达谱芯片 angrem 相关基因芯片筛选

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人肾小球系膜细胞增生硬化相关新基因angrem104的表达和功能研究

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中国病理生理杂志 2003年第8期19卷 1016-1020页

作者：梁秀彬张宏王海燕北京大学第一医院肾内科北京大学肾脏病研究所北京100034

目的 :angrem10 4 (angiotensinⅡrelatedgenesinmesangialcells)是血管紧张素Ⅱ (AngⅡ )刺激系膜细胞后上调表达的新基因 (GenBank登录号是AF36 7870 )。本研究旨在进一步探讨新基因angrem10 4的功能 ,为研究肾小球增生硬化可能的分... 详细信息

目的 :angrem10 4 (angiotensinⅡrelatedgenesinmesangialcells)是血管紧张素Ⅱ (AngⅡ )刺激系膜细胞后上调表达的新基因 (GenBank登录号是AF36 7870 )。本研究旨在进一步探讨新基因angrem10 4的功能 ,为研究肾小球增生硬化可能的分子机制奠定基础。方法 :用Northernblot检测angrem10 4在正常人组织中的表达分布及其在AngⅡ刺激和刺激被losartan阻断后的表达变化。构建angrem10 4与pcDNA3 1/V5 /His -TOPO的正义和反义真核表达载体 ,并转染至体外培养人肾小球系膜细胞 ,用RT -PCR的方法检测在angrem10 4基因过度表达时纤粘连蛋白(FN)的表达变化。通过ExPASy对angrem10 4进行生物信息学分析。结果 :生物信息学分析提示angrem10 4是一种核蛋白。Northernblot结果显示angrem10 4在正常人心脏、胎盘、肝脏、骨骼肌、肾脏和胰腺组织中广泛的表达 ,而在脑组织和肺中未检测到表达。在AngⅡ刺激人系膜细胞后 6h ,angrem10 4表达明显上调 ,并可持续至 4 8h ,但却剂量依赖地被AngⅡI型受体 (AT1R)拮抗剂 (losartan)抑制。用RT -PCR的方法检测到在angrem10 4基因过度表达时FN的表达明显上调 ,而当反义阻断angrem10 4基因的表达时 ,在AngⅡ刺激下人系膜细胞FN的表达无明显改变。结论 :angrem10 4是在正常人组织内?

关键词：血管紧张素Ⅱ 纤连蛋白类基因功能基因 angrem 肾小球硬化症病灶性

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血管紧张素Ⅱ上调人肾小球系膜细胞硬化相关基因的克隆

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中华肾脏病杂志 2002年第2期18卷 140-145页

作者：周安宇张宏梁秀彬侯平王海燕北京大学第一医院肾内科北京大学肾脏病研究所 100034

目的筛选和鉴定培养的人肾小球系膜细胞（MsC）在血管紧张素Ⅱ（Angiotensin　Ⅱ,Ang　Ⅱ）作用下,产生以纤连蛋白（Fibronectin,FN）为代表的细胞外基质成分的过程中上调表达的基因,寻找Ang Ⅱ致细胞外基质堆积作用的相关基因,为探讨A... 详细信息

目的筛选和鉴定培养的人肾小球系膜细胞（MsC）在血管紧张素Ⅱ（Angiotensin　Ⅱ,Ang　Ⅱ）作用下,产生以纤连蛋白（Fibronectin,FN）为代表的细胞外基质成分的过程中上调表达的基因,寻找Ang Ⅱ致细胞外基质堆积作用的相关基因,为探讨Ang Ⅱ在肾小球硬化发展过程的分子机制奠定基础。方法人MsC经Ang Ⅱ（10-6mol/L）刺激24h后,采用抑制性消减杂交（suppressionsubtractive hybridization,SSH）获得Ang　Ⅱ相关的差异表达的cDNA,经纯化克隆到pGEM-Teasy Vector并转化大肠杆菌;随机选择120个克隆,经反向Northern筛选上调表达的基因cDNA片段,并以Northern杂交验证,然后进行DNA序列测定和同源性比较。采用5＇-和3＇-RACE及长距离PCR的方法获得新基因的全长cDNA。结果在120个随机选择的克隆中,反向Northern结果表明有55个克隆表达明显上调。挑选其中20个克隆进行DNA序列测定,结果显示18个为独立的基因片段序列（有两个序列为双拷贝）,其中15个为已知基因,包括细胞外基质成分:如血小板反应素Ⅰ、Ⅰ型胶原α2;细胞骨架及结合蛋白:如平滑肌肌动蛋白α、钙调蛋白1、γ-胞浆型肌动蛋白等;合成和代谢相关蛋白:如醛缩酶A、延长因子1-γ、arnesyl pyrophosphate synthetase等;蛋白分解相关蛋白:如组织蛋白酶。

关键词：血管紧张素Ⅱ 细胞外基质基因克隆系膜细胞 angrem 肾小球硬化相关基因克隆

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