检索结果-南通市图书馆

angⅡ诱导的心肌成纤维细胞增殖中COL1A1、COL3A1、ELP2、STAT3、P-STAT3表达情况的研究

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

AngⅡ诱导的心肌成纤维细胞增殖中COL1A1、COL3A1、ELP2、STAT3、...

作者：白丽平内蒙古医科大学

学位级别：硕士

目的:本文拟研究在血管紧张素Ⅱ(ang ⅱ)诱导的小鼠乳鼠心肌成纤维细胞增殖实验中I型胶原(COL1A1)、ⅡI型胶原(COL3A1)、延长因子复合物亚基2(ELP2)、信号转导子与转录激活因子3(STAT3)、磷酸化STAT3(p-STAT3)表达情况及缬沙坦干预后待... 详细信息

目的:本文拟研究在血管紧张素Ⅱ(ang ⅱ)诱导的小鼠乳鼠心肌成纤维细胞增殖实验中I型胶原(COL1A1)、ⅡI型胶原(COL3A1)、延长因子复合物亚基2(ELP2)、信号转导子与转录激活因子3(STAT3)、磷酸化STAT3(p-STAT3)表达情况及缬沙坦干预后待测指标表达量的变化情况,探讨ELP2是否通过调控p-STAT3的表达影响ang ⅱ诱导的心肌成纤维细胞增殖。方法:使用差速贴壁及胰酶消化法分离纯化1-3日龄C57BL/6小鼠乳鼠的心肌成纤维细胞,倒置显微镜下对心肌成纤维细胞进行形态学鉴定,并继续于心肌成纤维细胞完全培养基中进行原代细胞的传代培养。取传代后的第二代心肌成纤维细胞,建立ang ⅱ刺激心肌成纤维细胞增殖及缬沙坦干预细胞增殖实验,实验分组为:Control组(完全培养基)、ang ⅱ 0.5组(ang ⅱ 0.5umol/l)、ang ⅱ 1.0组(ang ⅱ 1.0umol/l)、ang ⅱ 1.0+ARB 1.0组(ang ⅱ 1.0umol/l+缬沙坦1.0umol/l)。培养24小时后,CCK-8检测各组于450nm处的吸光度值(OD值)及细胞增殖率,Western Blot检测各组心肌成纤维细胞中COL1A1、COL3A1、STAT3、p-STAT3和ELP2蛋白的表达水平;RT-q PCR检测各组COL1A1、COL3A1、STAT3和ELP2 m RNA的表达水平。结果:1.细胞于1.5h开始贴壁,24h基本贴壁完全,显微镜下观察细胞形态及生长方式符合心肌成纤维细胞特征。2.CCK-8结果示:与对照组相比,ang ⅱ 0.5组和ang ⅱ 1.0组OD值及增值率明显升高(Pang ⅱ浓度呈剂量依赖性(Pang ⅱ 1.0组明显下降(Pang ⅱ 1.0组COL3A1、STAT3、p-STAT3、ELP2蛋白表达量明显增加(Pang ⅱ浓度增加STAT3、ELP2蛋白表达显著增加(P0.05);缬沙坦干预后COL3A1,STAT3、p-STAT3、ELP2蛋白表达显著减少(Pang ⅱ 1.0组COL1A1、COL3A1、STAT3 m RNA表达量显著增加,差异均有统计学意义(Pang ⅱ浓度增加,STAT3m RNA表达量显著增加(P0.05);加用缬沙坦后COL1A1、STAT3 m RNA表达量减少,差异均有统计学意义(P0.05)。结论:(1)ang ⅱ可诱导心肌成纤维细胞增殖,并使心肌纤维化标志物(COL1A1、COL3A1)的表达升高。ang ⅱ水平越高,促使心肌成纤维细胞增殖的作用越明显。(2)ang ⅱ促进心肌成纤维细胞增殖可能与激活STAT3信号转导通路有关,且ELP2可能通过调控STAT3的活化影响ang ⅱ诱导的心肌成纤维细胞增殖。(3)缬沙坦在一定水平上可阻止ang ⅱ诱导的心肌成纤维细胞增殖,并下调心肌纤维化标志物(COL1A1、COL3A1)的表达。

关键词：心肌纤维化心肌成纤维细胞 ang ⅱ STAT3 ELP2

血管紧张素Ⅱ诱导的心肌纤维化中ELP2、STAT3及p-STAT3表达变化的研究

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

血管紧张素Ⅱ诱导的心肌纤维化中ELP2、STAT3及p-STAT3表达变化的...

作者：陈智慧内蒙古医科大学

学位级别：硕士

目的:本文拟探究在血管紧张素Ⅱ(angⅡ)诱导的小鼠心肌纤维化模型中延长因子复合物亚基2(ELP2)、信号转导子与转录激活子3(STAT3)及磷酸化STAT3(p-STAT3)表达变化以及加用缬沙坦后各项指标变化,来探究ELP2和STAT3信号通路在心肌纤维化... 详细信息

目的:本文拟探究在血管紧张素Ⅱ(angⅡ)诱导的小鼠心肌纤维化模型中延长因子复合物亚基2(ELP2)、信号转导子与转录激活子3(STAT3)及磷酸化STAT3(p-STAT3)表达变化以及加用缬沙坦后各项指标变化,来探究ELP2和STAT3信号通路在心肌纤维化形成中的作用。方法:1)心肌纤维化模型建立:小鼠随机分为对照组、模型组、缬沙坦组,测量各组小鼠基础体重(BW)、收缩压(SBP)和心率(HR),超声检测心脏输出量(CO)、舒张期左心室内径(LVEDd)、收缩期左心室内径(LVEDs)、左心室射血分数(EF)、左心室缩短分数(FS)、心搏量(SV)、舒张期左心室容积(LVEVd)、收缩期左心室容积(LVEVs)等指标。小鼠植入微量渗透泵,分别为:对照组:微泵持续泵入生理盐水1.44ug/g/d+喂水;模型组:微泵持续泵入angⅡ溶液1.44ug/g/d+喂水;缬沙坦组:微泵持续泵入angⅡ溶液1.44ug/g/d+灌胃缬沙坦溶液40ug/g/d。2周后测量小鼠BW、SBP、HR及心脏超声指标。小鼠处死后行天狼猩红染色,观察各组小鼠胶原蛋白染色面积变化。2)检测相关蛋白及mRNA表达水平:通过免疫荧光、Western Blot法检测各组小鼠心肌细胞中Ⅰ型胶原(COL1A1)、ⅡI型胶原(COL3A1)、ELP2、STAT3和p-STAT3蛋白表达水平。qPCR检测各组小鼠心肌细胞中COL1A1、COL3A1、ELP2、STAT3 mRNA 表达情况。结果:1)建模前后,三组小鼠 BW、SBP、HR、CO、LVEDs、EF、FS、SV、LVEVs均无统计学差异(P>0.05)。2周后,与对照组小鼠相比,模型组LVEDd、LVEVd显著降低,心肌组织切片染色观察胶原纤维明显增多,颜色发红,胶原蛋白染色面积明显增加,COL1A1蛋白、COL3A1蛋白和mRNA表达明显增加,差异均有统计学意义(P0.05)。2)与对照组小鼠相比,模型组中ELP2、STAT3和p-STAT3蛋白表达量增加,且ELP2蛋白和mRNA、STAT3 mRNA以及p-STAT3/STAT3蛋白表达显著上调,差异有统计学意义(P0.05)。且缬沙坦组中ELP2、STAT3和p-STAT3蛋白表达量减少,ELP2蛋白和mRNA、STAT3 mRNA以及p-STAT3/STAT3蛋白表达显著下调,差异有统计学意义(PangⅡ诱导小鼠发生心肌纤维化建模方法可行性高。(2)心肌纤维化形成过程中STAT3通路被活化,且ELP2参与其中。(3)缬沙坦一定程度上能够抑制angⅡ诱导的心肌纤维化。

关键词： ang ⅱ 心肌纤维化 ELP2 STAT3

Role of a new-type polypeptide in regulation of oxidative stress in cardiac hypertrophy through ox-CaMK Ⅱ

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

中国药理学与毒理学杂志 2019年第10期 806-807页

作者： ZHENG Xi LI Jing-yuan Wang Si-qi ZHang Chen-yang HU Cong TONG Xin TIAN Xing GU Li-xian CHang Xin-yi HAO Li-ying Department of Pharmaceutical ToxicologySchool of Pharmacy China Medical University Department of Clinical Pharmacy School of Pharmacy China Medical University

OBJECTIVE Oxidative stress is the imbalance between the production and removal of reactive oxygen species（ROS）, leading to cel and tissue damage.There is growing evidence that excessive ROS is induced in cardiac hypertrophy and heart failure. Over accumulation of ROS subsequently activates ROS-sensitive downstream signaling pathways associated with pathological myocardial hypertrophy. angiotensin Ⅱ（ang ⅱ）increases ROS in ventricular myocardium by acting on oxidized CaMK Ⅱ（ox-CaMK Ⅱ）. This study will explore the role of a new polypeptide targeting on CaMKⅡ in the regulation of oxidative stress in cardiac hypertrophy through ox-CaMKⅡ, and provide a new target and a new way for the treatment of cardiac hypertrophy. METHODS H9c2 cells were divided into three groups. The control group was given complete medium. The cardiac hypertrophy group was administered by 100 nmol·L;angⅡ. After 24 h of administration of ang ⅱ, the polypeptide group was given a new type polypeptide, 5 μg· m L;. Oxidative stress was estimated in vivo by measuring ROS level,ox-CaMK Ⅱ expression and superoxide dismutase（SOD）activity. RESULTS Compared with that of the control group, the SOD activity in the cardiac hypertrophy group was decreased, while the new polypeptide could significantly improve the SOD activity. Among the three groups, the expression of ox-CaMK Ⅱ in the cardiac hypertrophy group was the highest, demonstrating that this novel polypeptide could reduce ox-CaMKⅡ expression. CONCLUSION In conclusion, our newly designed CaMKⅡ-targeted polypeptide can inhibit ROS-mediated downstream pathway by inhibiting ox-CaMK Ⅱ expression and reducing excessive ROS accumulation, thereby reversing cardiac hypertrophy.

关键词： cardiac hypertrophy ang ⅱ ox-CaMK Ⅱ ROS SOD

有氧运动对糖尿病大鼠心肌纤维化的干预作用及机制研究

同方期刊数据库评论

在线全文

同方期刊数据库

学校读者我要写书评

暂无评论

有氧运动对糖尿病大鼠心肌纤维化的干预作用及机制研究

TXNIP-NLRP3炎性小体通路在ang ⅱ诱导的胰岛β细胞凋亡中的作用

第十二届全国体育科学大会

作者：田清华刘霞刘亚邓鹏辉湖南师范大学体育学院体适能与运动康复湖南省重点实验室

研究目的:探讨糖尿病大鼠心肌纤维化在运动的干预下其发生、发展及其与angⅡTGF-β1/Smad2信号通路的关系。研究方法:选取6周龄雄性SD大鼠为实验对象,随机分成两组,其中一组为对照组(NC组,n=10),另外一组为糖尿病模型组(DM组,n=30)。NC... 详细信息

研究目的:探讨糖尿病大鼠心肌纤维化在运动的干预下其发生、发展及其与angⅡTGF-β1/Smad2信号通路的关系。研究方法:选取6周龄雄性SD大鼠为实验对象,随机分成两组,其中一组为对照组(NC组,n=10),另外一组为糖尿病模型组(DM组,n=30)。NC组大鼠用普通饲料喂养,DM组大鼠用高脂饲料喂养。在DM组大鼠进行喂养4周的高脂饮食后,不可以摄入食物并且禁水。给予DM组按照40mg/kg剂量注射1%STZ,一星期后从DM组的大鼠尾静脉取血并测其血糖,如果测得大鼠的空腹血糖超过了7.8mmol/L,说明建模成功。建模成功的DM组大鼠进行正常饮食。建模成功后随机分为两组,其中一组为糖尿病对照组(DM组),另一组为糖尿病运动组(DME组)。DME组的大鼠每周进行6天的无负重游泳训练,每次训练60分钟,持续8周。在大鼠最后一次训练后,禁食12h,次日以2.5ml/kg的剂量,腹腔进行注射10%的水合氯醛使其具有麻醉,随后从胸主动脉取血保存于—20℃,以备待测。取大鼠左心室的心肌组织,将用于Masson染色观察的心肌组织置于4%的多聚甲醛溶液中,另一部分迅速放入冷冻储存管中,存放于—80℃冰箱检测。测定血清fbg和胰岛素(INS)水平,同时注意观察心肌组织的情况以及Ⅰ、Ⅲ型胶原的免疫组织化学变化,接下来测定大鼠心肌组织中angⅡ、TGF-β1、Smad2、Ⅰ、Ⅲ型胶原纤维m RNA表达水平、以及心肌组织中TGF-β1、Smad2蛋白表达水平。研究结果:(1)通过将DM组与NC组的大鼠比较发现,大鼠血清中FBG、HOMA-IR的表达水平十分显著的升高(P0.05);通过将DM组与NC组的大鼠比较大鼠心肌组织中Ⅲ型胶原纤维m RNA表达水平明显升高(PangⅡⅡSmad2mRNA表达量有所升高,没有存在明显的差异,(P>0.05);通过将DME组与DM组的大鼠进行比较大鼠心肌组织TGF-β1mRNA表达水平明显下降(PangⅡ、Smad2mRNA表达量有所下降,且无明显差异(P>0.05);5)将DM组与NC组进行比较,糖尿病组心肌组织中TGF-β1、Smad2蛋白表达增加,没有存在明显的差异(P>0.05);通过将DME组与DM组大鼠进行比较,TGF-β1和Smad2蛋白表达量降低,没有存在明显的差异(P>0.05)。研究结论:糖尿病心肌病最突出的病变是心肌纤维化,本实验研究成功进行复制了糖尿病大鼠的模型,发现糖尿病大鼠中不仅出现心肌组织Ⅰ、Ⅲ型胶原纤维比例失调的情况,而且其胶原蛋白累积也增加,糖尿病大鼠心肌出现一定程度的纤维化。通过有氧运动的干预后,发现胶原沉积减少,细胞的形态、大小、间隙等恢复正常,心肌组织Ⅰ、Ⅲ型胶原纤维表达水平降低,Ⅰ、Ⅲ型胶原纤维m RNA表达水平呈现出非常明显的下降情况,心肌纤维化程度有所改善,有效进行阻止糖尿病心肌纤维化的发生与发展。TGF-β1是导致正常组织发生纤维化的主要细胞因子,过量angⅡ可引起纤维细胞增值,此外心肌成纤维细胞Smad信号磷酸化也是由其刺激的。糖尿病可以促进angⅡ的表达,激活TGF-β1/Smad2途径,促进心肌纤维化,在有氧运动的干预下可以降低angⅡ的表达水平,抑制激活TGF-β1/Smad2通路,改善心功能评价指标,因此推测有氧运动的作用影响机制可能与通过抑制angⅡ/TGF-β1/Smad2通路的有关。

关键词：有氧运动糖尿病心肌纤维化 TGF-β1/Smad2 ang ⅱ

来源： cnki会议评论

在线全文

cnki会议

学校读者我要写书评

暂无评论

TXNIP-NLRP3炎性小体通路在Ang Ⅱ诱导的胰岛β细胞凋亡中的作用

作者：冯艳金山西医科大学

学位级别：硕士

研究背景:随着居民生活水平的提高,糖尿病在我国的发病率逐年提升,已然成为当前社会最主要的健康杀手。糖尿病是遗传因素和环境因素共同影响而引起的疾病,造成其病情恶化的最主要原因为胰岛β细胞的损伤和数目的减少。近年来发现,肾素-... 详细信息

研究背景:随着居民生活水平的提高,糖尿病在我国的发病率逐年提升,已然成为当前社会最主要的健康杀手。糖尿病是遗传因素和环境因素共同影响而引起的疾病,造成其病情恶化的最主要原因为胰岛β细胞的损伤和数目的减少。近年来发现,肾素-血管紧张素系统(Renin-angiotensin system,RAS)在局部胰腺组织中存在表达,更重要的是在糖尿病时RAS激活,致使其主要的效应物质,血管紧张素Ⅱ(angiotensin Ⅱ,ang ⅱ)水平升高,而后者的过表达会引起胰岛功能紊乱和胰岛β细胞凋亡增加,但其具体机制尚不明确。越来越多的研究证实,慢性炎症反应是导致糖尿病发生发展的重要因素。NLRP3炎性小体是一种多蛋白复合物,在各种病原刺激下发生活化,随后继续激活Pro Caspase-1,使其裂解为Caspase-1 p10活性片段,后者通过促进成熟的IL-1β的分泌而诱发细胞炎症损伤。关于NLRP3炎性小体的活化机制众说纷纭,但氧化应激引发ROS生成增多,进而促进TXNIP过表达或与NLRP3结合增多是其最主要的激活途径。因此,本研究旨在探讨ang ⅱ发挥胰岛β细胞损伤作用是否通过TXNIP-NLRP3炎性小体通路而实现。目的:1.使用ang ⅱ刺激正常大鼠胰岛组织,观察其对胰岛β细胞分泌胰岛素水平的影响;2.ang ⅱ孵育正常大鼠胰岛及INS-1胰岛β细胞,观察其对胰岛细胞凋亡及NLRP3炎性小体表达的影响;3.探究ang ⅱ影响NLRP3炎性小体表达的具体机制。方法:1.动物实验:构建糖尿病大鼠模型,分离胰岛并检测ang ⅱ水平;2.离体实验:(1)分离正常大鼠胰岛组织,使用ang ⅱ刺激,ELISA法检测胰岛素分泌量;(2)Western Blot检测ang ⅱ对胰岛凋亡及NLRP3炎性小体表达的影响;(3)CCK-8检测不同浓度(0、1×10、1×10、1×10、1×1055 mol/L)及不同作用时间(0、6、12、24、48 h)的ang ⅱ对INS-1胰岛β细胞存活率的影响;(4)流式细胞术及Western Blot检测Cleaved Caspase-3/Caspase-3,探究ang ⅱ对INS-1胰岛β细胞凋亡的影响;(5)Western Blot检测ang ⅱ作用下INS-1胰岛β细胞NLRP3炎性小体、TXNIP、ChREBP、AT1R的表达情况;(6)RT-PCR检测ang ⅱ对INS-1胰岛β细胞TXNIP、ChREBP的mRNA水平的表达影响;(7)IF/ICC法观察ang ⅱ处理对INS-1胰岛β细胞TXNIP、ChREBP及AT1R的表达影响。结果:1.糖尿病鼠胰岛组织中ang ⅱ含量升高分离糖尿病鼠胰岛,ELISA实验检测胰岛中ang ⅱ含量的结果显示,T1DM组ang ⅱ水平显著上调(Pang ⅱ含量也明显升高(Pang ⅱ对原代胰岛的功能及蛋白表达的影响2.1 ang ⅱ可以降低胰岛β细胞的胰岛素分泌水平检测胰岛功能显示,ang ⅱ组葡萄糖刺激的胰岛素分泌指数降低(Pang ⅱ造成胰岛功能受损。(见图2A-C)2.2 ang ⅱ可以诱导胰岛细胞凋亡Western Blot结果表明,与对照组相比,ang ⅱ组Cleaved Caspase-3/Caspase-3比值升高(Pang ⅱ诱导胰岛细胞凋亡增加。(见图2D)2.3 ang ⅱ可以激活胰岛细胞NLRP3炎性小体与对照组相比,ang ⅱ组的NLRP3、ASC、Caspase-1的活性片段p10的蛋白表达均升高(Pang ⅱ可引起NLRP3炎性小体的激活。(见图2E、F)3.ang ⅱ诱导INS-1胰岛β细胞存活率下降CCK-8结果显示,随着ang ⅱ作用浓度的升高,INS-1胰岛β细胞存活率逐渐下降,在1×10mol/L时作用显著(Pang ⅱ不同时间,发现随着ang ⅱ作用时间的延长,细胞存活率逐渐降低,ang ⅱ作用24 h时细胞活力显著下降(Pang ⅱ促进INS-1胰岛β细胞凋亡流式细胞术结果显示,ang ⅱ组细胞凋亡率相比对照组升高(Pang ⅱ组CleavedCaspase-3/Caspase-3比值升高(Pang ⅱ通过NLRP3炎性小体诱导INS-1胰岛β细胞凋亡与对照组相比,ang ⅱ组NLRP3、ASC的蛋白表达均上调(P<0.05,n=6),Caspa

关键词： ang ⅱ NLRP3炎性小体 TXNIP AT1R

芹菜苷、3-甲氧基芹菜苷对angⅡ诱导的HUVECs氧化损伤模型作用机制

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

芹菜苷、3-甲氧基芹菜苷对AngⅡ诱导的HUVECs氧化损伤模型作用机制

作者：孙贝贝扬州大学

学位级别：硕士

本文首先利用血管紧张素Ⅱ（ang ⅱ）诱导人脐静脉内皮细胞（HUVECs）建立氧化损伤模型模拟体外高血压细胞损伤模型,其次通过考察细胞形态、细胞活性、微观结构、细胞凋亡以及检测细胞功能中氧化损伤标志物丙二醛（MDA）、一氧化氮（NO... 详细信息

本文首先利用血管紧张素Ⅱ（ang ⅱ）诱导人脐静脉内皮细胞（HUVECs）建立氧化损伤模型模拟体外高血压细胞损伤模型,其次通过考察细胞形态、细胞活性、微观结构、细胞凋亡以及检测细胞功能中氧化损伤标志物丙二醛（MDA）、一氧化氮（NO）含量、一氧化氮合酶（NOS）和超氧化物歧化酶（SOD）的活力来评价芹菜苷与3-甲氧基芹菜苷的修复效果,进而选取功能活性较强的芹菜苷,再通过实时荧光定量PCR（real-time PCR）、蛋白质印迹法（Western Blot）等技术来研明芹菜苷对血压调节的细胞外调节蛋白激酶（ERK1/2）信号通路的影响,从而阐明芹菜苷在血管内皮细胞中发挥修复作用的途径,为芹菜黄酮调节血压研究提供理论基础,同时为高血压病患者日常膳食提供有效的建议。主要的实验结果及结论如下：（1）以HUVECs为模型细胞,ang ⅱ为诱导剂,筛选诱导剂的浓度和诱导时间对HUVECs氧化应激损伤的影响。实验发现ang ⅱ能明显的诱导内皮细胞的氧化损伤,主要表现为细胞形态变化,细胞器细胞膜结构损伤,细胞活性下降,凋亡率上升,细胞脂质过氧化增加,细胞的分泌功能如NO释放率、eNOS、SOD活力降低。其中1μmol/L angⅡI诱导12 h时各项指标为细胞活性为65.11%,NO含量43.57 μmol/L, TNOS活力为6.99U/mgprot, eNOS活力为1.89U/mgprot,MDA含量为7.46 nmol/mgprot, SOD活力为144.88U/mgprot,细胞凋亡率为（41.5±2.6）%,微观结构显示核膜皱缩,核仁消失,胞浆内出现大量空泡状结构,线粒体或者细小或者肿胀,粗面内质网扩张数目较少,部分核糖体丢失,平面内质网扩张,但细胞未解体,仍然保持细胞结构。（2）以芹菜苷、3-甲氧基芹菜苷标准品为研究对象,通过与建立损伤模型相同的技术考察两者对模型的修复情况。实验发现两者均可以增加细胞活力,增加NO释放量,清除自由基,减少细胞内过氧化物的产生,降低细胞凋亡率,修复细胞器细胞膜结构等,且上述功能在芹菜苷、3-甲氧基芹菜苷浓度低于50 μmol/L时随时间呈剂量依赖增加关系,高于50 μmol/L时修复细胞的功效开始降低。说明两者均具有一定程度的修复损伤的内皮细胞作用。具体结果为：50 μmol/L芹菜苷修复12h时,各指标分别为细胞活力79.07%,NO含量为139.22 μmol/L, TNOS活力为26.32 U/mgprot, eNOS活力为16.32 U/mgprot, MDA含量为5.47 nmol/mgprot, SOD活力为51.51 U/mgprot,细胞凋亡率下降到（14.7±1.2）%,微观结构显示细胞核仁基本完整,胞浆内空泡减少,粗面内质网及核糖体数目未见减少,形态未见明显病变。50μmol/L3-甲氧基芹菜苷修复12 h时,各指标分别为细胞活力64.50%,NO含量为78.88 μmol/L, TNOS活力为19.94 U/mgprot, eNOS活力为12.41 U/mgprot,MDA含量为7.93 nmol/mgprot, SOD活力为44.32 U/mgprot,细胞凋亡率下降到（33.7±1.7）%,微观结构显示细胞器数量减少,仍有部分线粒体肿胀。说明3-甲氧基芹菜苷在一定程度上同样具有减缓血压症状的作用,其发挥作用的规律与芹菜苷类似,但效果不如芹菜苷。综合两者的作用效果,最终选择50 μmol/L芹菜苷修复12 h来研究芹菜苷对ERK1/2信号通路的作用。（3）ERK1/2信号通路是与高血压相关的信号通路之一。实验发现,在angⅡ诱导的模型中加入芹菜苷,ERK1、ERK2的mRNA表达分别降低7.84%、22.28%,磷酸化蛋白表达分别降低30.91%、11.33%,说明芹菜苷可以抑制磷酸化ERK1、ERK2的mRNA和蛋白表达来发挥降血压作用。实验还发现芹菜苷能够抑制ERK1/2的下游产物ACE的mRNA和蛋白表达,进而减少细胞损伤,同时芹菜苷能够激活eNOS的mRNA和蛋白表达,发挥释放NO的作用,从而修复内皮细胞损伤。这种效果在加入ERK1/2特异性抑制剂U0126后更为明显。

关键词：高血压 HUVEC 芹菜苷 3-甲氧基芹菜苷 ang ⅱ ERK1/2信号通路

神经肽angⅡ、ET-1和NRG1Ⅱ可能参与低氧诱导大鼠类焦虑样行为

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

神经肽AngⅡ、ET-1和NRG1Ⅱ可能参与低氧诱导大鼠类焦虑样行为

作者：翟专浙江大学

学位级别：硕士

背景和目的低氧作为一种特殊的环境应激因素,不同于其他应激原,它会导致机体组织器官和细胞的供氧不足,引起一系列的生理乃至病理的变化。我们实验室以前的研究表明妊娠期间歇低氧应激可以诱导子代成年雄性大鼠出现类焦虑样行为,其机... 详细信息

背景和目的低氧作为一种特殊的环境应激因素,不同于其他应激原,它会导致机体组织器官和细胞的供氧不足,引起一系列的生理乃至病理的变化。我们实验室以前的研究表明妊娠期间歇低氧应激可以诱导子代成年雄性大鼠出现类焦虑样行为,其机制和下丘脑室旁核高表达的促肾上腺皮质激素释放因子受体1(Corticotrophin-releasing factor receptor1, CRFR1)以及受体的甲基化水平变化密切相关。低氧应激不仅可以影响机体的生理功能,也可以诱导机体的行为变化。本论文主要探讨连续低氧应激是否诱导成年雄性大鼠产生类焦虑样行为,与行为学变化相关的大脑组织核团的神经肽血管紧张素Ⅱ(angiotensin Ⅱ, ang ⅱ)、内皮素-1(Endothelin-1,ET-1)和神经调节蛋白-1(Neuregulin-1,NRG1)基因和受体表达变化,以及其可能的调节机制。实验设计和方法我们利用人工模拟高原低氧的方法,研究5000米5天连续低氧对成年雄性大鼠行为的影响,通过开放场实验、明暗箱实验以及高架十字迷宫实验检测5000米5天连续低氧对成年雄性大鼠类焦虑样行为的影响。利用冰冻切片机,采用微量取样技术,根据大鼠脑立体定位图谱获取前额叶皮层(AC)、海马(HP)、下丘脑室旁核(PVN)、中央杏仁核(CeA)和蓝斑(LC)等核团或组织。提取组织RNA,反转录后采用实时定量PCR检测各个核团组织的神经肽ang ⅱ、ET-1、NRG1Ⅱ及其相应受体分子的基因表达变化。实验分为两组,连续低氧结束后即刻以及连续低氧后恢复常氧饲养一天后取样。实验结果 1.5000米5天连续低氧降低成年雄性大鼠体重,恢复供氧一天后,大鼠体重没有回复到对照组水平。 2.在开放场实验中,和对照组相比,5000米5天连续低氧对成年雄性大鼠的总活动距离、中心位置的活动距离及时间、外周位置的活动距离及时间(5min和10min记录时间)没有影响;在明暗箱实验中,连续低氧应激后,成年雄性大鼠第一次进入暗箱的潜伏时间明显减少,停留在暗箱的时间也明显减少;在高架十字迷宫实验中,连续低氧明显减少雄性大鼠的总穿梭次数、降低进入闭合臂及开放臂的次数,同时增加了大鼠停留在闭合臂的时间。提示连续5天的5000米低氧应激没有影响动物的基本运动能力,连续低氧应激可以诱导成年雄性大鼠出现类焦虑样行为。 3.5000米5天连续低氧刺激AC区、下丘脑PVN区和CeA核团CRFR1mRNA的表达。复常氧后一天,PVN和CeA区CRFR1mRNA的表达仍未恢复到对照组水平。 4.5000米5天连续低氧增加了angⅡ前体分子,血管紧张素原(angiotensingen, AGT)在AC区和CeA核团的表达。受体AT1a和AT2在PVN区,CeA核团和HP的基因表达显著增高。在低氧应激结束恢复一天后,AT1a和AT2在CeA和HP区仍然高表达。 5.5000米5天连续低氧没有明显升高ET-1的表达,但在低氧结束后恢复常氧正常饲养一天的实验组,AC区、CeA区、PVN区、HP和LC核团的ET-1表达均显著增加。连续低氧增加了这些核团ErA受体的表达。而ErB受体只在PVN区和CeA核团表达增高。 6.5000米5天连续低氧没有影响NRG1Ⅱ及其受体ErbB4在PVN、HP和LC的表达,但升高了NRG1Ⅱ及其受体ErbB4在AC和CeA核团的表达。以上结果显示5000米5天连续低氧降低大鼠体重,诱导成年雄性大鼠出现类焦虑样行为。5000米5天连续低氧增加了AC、PVN、CeA等脑核团的ang-Ⅱ、ET-1以及NRG1Ⅱ神经肽的基因表达,提示不同神经肽可能在各个脑区的微环路中发挥不同作用,共同参与诱导成年雄性大鼠低氧下的类焦虑样行为。

关键词：低氧应激类焦虑样行为 CRFR1 ang ⅱ ET-1 NRG1Ⅱ

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

醋柳黄酮及其单体抑制心肌肥厚的机理研究

醋柳黄酮及其单体抑制心肌肥厚的机理研究

作者：宋鑫泸州医学院

学位级别：硕士

目的：在培养原代大鼠心肌细胞的基础上,用血管紧张素Ⅱ诱导新生大鼠心肌细胞肥大为模型,探讨醋柳黄酮及其单体(槲皮素与异鼠李素)抑制心肌肥厚的作用机理是否与钙调神经磷酸酶信号通路有关。方法：取1-3d龄SD大鼠心肌细胞,运用差速贴... 详细信息

目的：在培养原代大鼠心肌细胞的基础上,用血管紧张素Ⅱ诱导新生大鼠心肌细胞肥大为模型,探讨醋柳黄酮及其单体(槲皮素与异鼠李素)抑制心肌肥厚的作用机理是否与钙调神经磷酸酶信号通路有关。方法：取1-3d龄SD大鼠心肌细胞,运用差速贴壁分离法提纯后进行培养。心肌细胞常规培养72小时,换无血清培养基同步化24小时后,分别加入不同药物进行孵育。实验分组：①对照组(Control):不加任何处理因素,与加入处理因素的组别共同进行换液处理;②模型组(angⅡ)：加入angⅡ10-6mol/L,建立心肌细胞肥大模型;③醋柳黄酮组(TFH group):预先加入醋柳黄酮100mg/L,再加入angⅡ10-6mol/L;④槲皮素组(Quer group):预先加入槲皮素100umol/L,再加入angⅡ10-6mol/L;⑤异鼠李素组(Isor group):预先加入异鼠李素100umol/L,再加入angⅡ10-6mol/L;⑥缬沙坦组(Valsartan group):预先加入缬沙坦10-6mol/L,再加入angⅡ10-6mol/L。采用抗a-actin免疫组化鉴定心肌细胞;Image-Pro Plus专业图像处理软件测定细胞表面积;考马斯亮蓝法测定细胞总蛋白含量;采用p-NPP晦法测定心肌细胞肌浆网钙泵(Sarcoplasmic reticulum Ca2+-ATPases,SERCA)活力;定磷法测定钙调神经磷酸酶(Calcineurin,CaN)活性及RT-PCR法半定量测定CaN mRNA表达。结果：(1)心肌细胞鉴定：心肌细胞经抗α-actin免疫细胞化学染色后,细胞质内可见棕黄色丝状物,证实为心肌细胞。(2)心肌细胞表而积：与control组比较,angⅡ组的细胞表面积显著增加(761.75±95.09vs498.27±67.31um2,P0.05)。与angⅡ组相比,Valsartan组、Quer组、Isor组及TFH组的细胞表面积分别减小(552.07±93.48vs761.75±95.09um2, P0.05)(3)心肌细胞总蛋白含量：与control组比较,angⅡ组的细胞总蛋白含量明显增加(4.61±1.42vs2.63±0.79ng/well, P0.05)。与angⅡ组相比,Valsartan组与TFH组的细胞总蛋白含量分别减小(3.04±0.86vs4.61±1.42ng/well,P0.05)。(4)肌浆网钙泵(SERCA)活力：与control组比较,angⅡ组的SERCA活力明显下降(2.36±0.99vs4.11±1.19umol/g pro·min, P0.05)。与angⅡ组相比,Valsartan组、Isor组、Quer组及TFH组的SERCA活力均升高(3.89±1.12vs2.36±0.99umol/g pro-min, P0.05)。(5)钙调神经磷酸酶(CaN)活性：与control组比较,angⅡ组、Isor组的CaN活性分别显著升高(0.50±0.13vs0.25±0.09U/mg prot, P0.05)。与angll组相比,Valsartan组、Quer组、Isor组及TFH组的SERCA的CaN活性分别降低(0.32±0.14vs0.50±0.13U/mg prot, P<0.05)、(0.37±0.10vs0.50±0.13U/mg prot, P<0.05)、(0.

关键词：醋柳黄酮及其单体 ang ⅱ 心肌肥厚 SERCA CaN mRNA

基于NLRP3炎症小体信号通路探讨“浊毒致瘀”病机下的高血压肾病机制

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

基于NLRP3炎症小体信号通路探讨“浊毒致瘀”病机下的高血压肾病...

作者：张凯敏广州中医药大学

学位级别：硕士

目的:在“浊毒致瘀”病机下的高血压肾病的进展中,肾纤维化是一种常见的表型。其中TGF-beta在高血压肾纤维化的发病机制中发挥重要作用,NLRP3炎症小体在“浊毒致瘀”病机下的高血压肾病中扮演着重要的角色。然而,TGF-β介导的NLRP3炎症... 详细信息

目的:在“浊毒致瘀”病机下的高血压肾病的进展中,肾纤维化是一种常见的表型。其中TGF-beta在高血压肾纤维化的发病机制中发挥重要作用,NLRP3炎症小体在“浊毒致瘀”病机下的高血压肾病中扮演着重要的角色。然而,TGF-β介导的NLRP3炎症小体通路的激活在调节“浊毒致瘀”病机下的高血压肾纤维化中的病理生理作用尚未阐明。本研究旨在探讨TGF-β介导的NLRP3炎性小体在高血压大鼠肾纤维化中的作用,同时使用中药网络药理方法初步探讨中药黄芪治疗“浊毒致瘀”病机下引起的肾纤维化的通路与机制。方法:(1)“浊毒致瘀”病机下高血压肾纤维化模型的建立:将12只SD大鼠随机分为两组,即正常组和angⅡ模型组。通过Alzet渗透微型泵,在单侧肾切除大鼠皮下埋置血管紧张素Ⅱ泵。每天观察动物的状态,14天后进行体重和血压的测量,开始取材。取肾脏置于4%多聚甲醛中固定,免疫组化检测肾脏中纤维化指标alpha-SMA,MMP-2,MMP-9以及促纤维化因子TGF-beta的表达情况。(2)探究肾纤维化过程中NLRP3炎症小体的作用:免疫组化技术检测肾脏中NLRP3炎症小体相关蛋白及下游高迁移率族蛋白(HMGB1)、IL-1beta的蛋白变化情况。利用TGF-beta(5ng/ml,1Ong/ml)刺激大鼠肾小管上皮细胞模拟纤维化模型。用不同浓度的TGF-beta刺激大鼠肾小管上皮细胞24小时,48小时,72小时检测alpha-SMA和Collagen Ⅰ的表达情况筛选药物刺激时间。使用DCFH-DA探针检测细胞内ROS的水平变化;免疫荧光检测TGF-beta刺激后NRK-52E细胞中NLRP3/Caspasel的共定位情况;Westernblot检测造模后NLRP3,Caspase1,cle-caspase1,HMGB1,GasderminD,cle-GasderminD 的表达情况;使用gRNA在NRK-52E细胞中沉默NLRP3后检测纤维化指标alpha-SMA的变化情况;使用Caspase1抑制剂AV-YVAD-CMK处理细胞后,检测纤维化指标alpha-SMA的变化情况;使用NLRP3炎症小体抑制剂ISO处理细胞后,检测纤维化指标 alpha-SMA,CollagenⅠ,以及 NLRP3 下游蛋白 HMGB1,GasderminD的变化情况,确定炎症小体活化后所激活的HMGB1-Gasdermin D轴与纤维化的发生发展密切相关。(3)利用中药网络药理学探究黄芪治疗肾纤维化的作用机制:通过TCMSP数据库可以得到黄芪有效成分以及对应的靶点信息;使用SwissTargetPrediction数据库进行靶点预测;使用Genecards综合数据库收集肾纤维化相关靶点信息;应用在线韦恩图绘制工具Jvenn,获得肾纤维化相关的靶点以及黄芪活性成分靶点的交集;将黄芪活性成分与肾纤维化的共有靶点输入String数据库构建PPI网络;将黄芪活性成分与肾纤维化的共有靶点进行GO富集和KEGG通路分析。结果:(1)ang ⅱ造模14天后,与对照组相比,大鼠的体重无明显变化,造模组大鼠的血压明显增升高。对肾组织切片进行免疫组化检测,结果显示ang ⅱ造模后大鼠肾脏中纤维化指标alpha-SMA,MMP-2,MMP-9明显增加,证明高血压肾纤维化模型造模成功。免疫组化的结果同时显示ang ⅱ造模后大鼠肾脏中的TGF-beta的含量增加了,证明TGF-beta与ang ⅱ的促纤维化作用密切相关。(2)探究肾纤维化过程中NLRP3炎症小体的作用:免疫组化结果显示造模大鼠肾脏中NLRP3炎症小体相关蛋白及下游HMGB1、IL-1beta的蛋白表达量增加,表明NLRP3炎症小体可能参与着肾纤维化的发生发展过程。Westernblot结果显示TGF-beta刺激大鼠肾小管上皮细胞NRK-52E 72小时后,alpha-SMA和Collagen Ⅰ的表达明显增加。使用荧光酶标仪检测不同浓度TGF-beta刺激后,大鼠肾小管上皮细胞NRK-52E中ROS的水平变化,结果显示TGF-beta刺激可以显著增加细胞中ROS的水平。免疫荧光结果表示,TGF-beta可以增强大鼠肾小管上皮细胞中NLRP3/Caspase1的共定位情况。Western Blot检测TGF-beta刺激后大鼠肾小管上皮细胞NLRP3,Caspase1,cle-caspase1,HMGB1,GasderminD,cle-GasderminD的表达情况,结果显示TGF-beta刺激可以上调NLRP3,cle-Caspase1,cle-GasderminD的蛋白表达以及促进细胞上清液中的HMGB1的含量增加。使用gRNA在NRK-52E细胞中沉默NLRP3以及使用Caspase1抑制剂AV-YVAD-CMK处理细胞,检测纤维化指标alpha-SMA的变化情况,结果显示沉默了 NLRP3以及抑制了 Caspas

关键词：高血压肾病浊毒致瘀肾纤维化 ang ⅱ TGF-beta NLRP3炎症小体