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amorphigenin联合顺铂对人肺腺癌A549/DDP细胞的协同抗肿瘤作用

中国肺癌杂志 2016年第12期19卷 805-812页

作者：钟红珍左瑜芳巫鑫彭艳何会萍杨俊官成浓徐祖敏广东医科大学附属医院肿瘤中心湛江524000 广东医科大学天然药物研究与开发重点实验室湛江524000

背景与目的 amorphigenin是从紫穗槐属植物的种子中分离提取的鱼藤酮类化合物,研究发现amorphigenin对多种肿瘤细胞具有增殖抑制作用。本研究拟探讨amorphigenin对人肺腺癌耐顺铂细胞株A549/DDP的抗肿瘤作用及其可能的分子机制。方法采... 详细信息

背景与目的 amorphigenin是从紫穗槐属植物的种子中分离提取的鱼藤酮类化合物,研究发现amorphigenin对多种肿瘤细胞具有增殖抑制作用。本研究拟探讨amorphigenin对人肺腺癌耐顺铂细胞株A549/DDP的抗肿瘤作用及其可能的分子机制。方法采用CCK-8法测定A549/DDP细胞的增殖;克隆形成实验测定A549/DDP细胞的克隆形成;流式细胞术检测细胞的凋亡率;Western blot技术检测caspase-3、PARP和LRP蛋白的表达。结果 amorphigenin可抑制A549/DDP细胞的增殖48 h[半数抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC_(50))]为(2.19±0.92)μmol/L、抑制克隆形成及诱导细胞凋亡。此外,amorphigenin与顺铂联合可协同地抑制A549/DDP细胞生长和促进凋亡;降低耐药蛋白LRP蛋白的表达。结论 amorphigenin可抑制A549/DDP细胞增殖和促进细胞凋亡;amorphigenin可能是通过抑制耐药蛋白LRP蛋白表达,进而与顺铂对A549/DDP细胞产生协同抑制作用。

关键词： amorphigenin 顺铂肺腺癌凋亡抗肿瘤作用

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amorphigenin抑制东方粘虫线粒体复合酶Ⅰ分子机制研究

Amorphigenin抑制东方粘虫线粒体复合酶Ⅰ分子机制研究

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作者：姚瑶沈阳农业大学

学位级别：硕士

从紫穗槐果实中分离提取得到主要杀虫活性成分amorphigenin,化学分类上属于拟鱼藤酮类化合物,室内生物测定结果表明其对菜青虫幼虫、小菜蛾、苹果黄蚜、淡色库蚊幼虫均有毒杀作用,先前研究表明其对淡色库蚊的线粒体复合酶Ⅰ具有抑制作... 详细信息

从紫穗槐果实中分离提取得到主要杀虫活性成分amorphigenin,化学分类上属于拟鱼藤酮类化合物,室内生物测定结果表明其对菜青虫幼虫、小菜蛾、苹果黄蚜、淡色库蚊幼虫均有毒杀作用,先前研究表明其对淡色库蚊的线粒体复合酶Ⅰ具有抑制作用。已有的研究表明真核生物线粒体复合酶Ⅰ具有44个不同的亚基,而原核细胞中仅有14个亚基就可以正常行使线粒体复合酶Ⅰ的功能,因此这14个亚基被认为是线粒体复合酶Ⅰ的关键亚基,其中7个亚基是由核基因编码,主要行使NADH氧化脱氢功能和电子传递功能的NDUFV1、NDUFV2、NDUFS1和NDUFS2、NDUFS3、NDUFS7、NDUFS8亚基,另外7个由线粒体基因编码。本论文为探究amorphigenin对东方粘虫7个核基因编码的亚基的作用,通过对东方粘虫7个关键亚基的克隆鉴定及生物信息学分析,利用实时荧光定量PCR技术,RNAi技术探究了amorphigenin对东方粘虫7个关键亚基的作用,研究过程及结果如下:1.对amorphigenin进行了室内毒力测定及东方粘虫体重抑制的试验,结果表明amorphigenin处理东方粘虫3龄幼虫48 h的LC为491.56 mg/L,毒力回归方程为y=(3.93±0.89)x-(5.58±2.38);amorphigenin对东方粘虫的体重具有明显的抑制作用。2.提取东方粘虫总RNA,反转录合成c DNA,设计引物,利用PCR技术克隆鉴定了东方粘虫线粒体复合酶Ⅰ中7个核基因编码的关键亚基,根据NCBI上公开的东方粘虫基因组数据与先前课题组测定的东方粘虫2+3转录组测序数据比对得到了7个亚基在染色体上的分布以及基因长度、外显子和内含子的数量,并利用TBtools软件绘制了基因结构图。对7个关键亚基进行了系统发育分析及motif分析,研究发现7个亚基的分支聚类在一起,说明7个亚基的命名和生物学分类是没有问题的,保守区域比较多,说明其在进化过程中7个关键亚基基本保持不变。3.以亚致死剂量amorphigenin处理东方粘虫后进行了转录组测序分析,结果表明能显著抑制NDUFV2、NDUFS3、NDUFS7基因的表达,显著激活NDUFS1基因的表达;抑制NDUFS2基因的表达;激活NDUFV1、NDUFS8基因的表达。利用实时荧光定量PCR检测低浓度、中浓度、高浓度(350 mg/L、550 mg/L、750 mg/L)amorphigenin处理48 h后东方粘虫3龄幼虫NDUFV1、NDUFV2、NDUFS1、NDUFS2、NDUFS3、NDUFS7、NDUFS8基因的相对表达量,结果表明:amorphigenin会显著抑制NDUFV2、NDUFS3、NDUFS7基因的表达;低浓度的amorphigenin会显著激活NDUFV1的表达,中高浓度会显著抑制NDUFV1基因的表达;低浓度的amorphigenin会显著抑制NDUFS2基因的表达,中高浓度的amorphigenin会激活NDUFS2基因的表达;amorphigenin会激活NDUFS1、NDUFS8基因的表达。设计引物,合成ds RNA,根据预试验结果筛选出ds NDUFV2,利用注射法和饲喂法对东方粘虫3龄幼虫进行RNAi,结果表明:饲喂和注射ds NDUFV2的东方粘虫取食量比空白对照的东方粘虫取食量明显减少,空白对照的东方粘虫NDUFV2基因的表达量是饲喂ds NDUFV2的2.7倍和1.6倍;注射ds NDUFV2 12 h、24 h、36 h后的东方粘虫基因表达量比空白对照分别降低了89.4%、77.0%、78.0%。

关键词： amorphigenin 东方粘虫生长发育抑制线粒体复合酶Ⅰ的亚基 RNAi

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