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Allglo探针4重荧光定量PCR技术同时检测4种疱疹病毒

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中华微生物学和免疫学杂志 2012年第1期32卷 78-83页

作者：余道军吴盛海王贤军童文娟杭州市第一人民医院检验科 310006

目的探讨多重荧光定量PCR技术的优化条件，建立基于AIIGlo探针技术荧光定量法检测4种疱疹病毒新方法。方法分别采用单重和多重定性PCR扩增临床常见4种疱疹病毒[单纯疱疹病毒1型（HSV-1）、HSV-2、Epstein—Barr病毒（EBV）、巨细胞病毒... 详细信息

目的探讨多重荧光定量PCR技术的优化条件，建立基于AIIGlo探针技术荧光定量法检测4种疱疹病毒新方法。方法分别采用单重和多重定性PCR扩增临床常见4种疱疹病毒[单纯疱疹病毒1型（HSV-1）、HSV-2、Epstein—Barr病毒（EBV）、巨细胞病毒（CMV）]井测序鉴定，然后分别采用Allglo探针和TaqMan探针的单重和多重定量PCR技术对4种疱疹病毒进行单种和多种病毒同时定性定量检测。结果TaqMan探针和Allglo探针单种疱疹病毒检测阳性率和特异性均为100％，Allglo探针单重定量PCR检测比4重探针单种定量PCR的检测Ct值高1～3，Allglo探针4重定量PCR可以同时检测4种疱疹病毒，相同样品Allglo探针4重定量PCR检测与单探针单重定量PCR分别检测的结果符合率100％。结论Allglo探针荧光定量PCR技术的通量、灵敏度和特异性均高于TaqMan探针。应用前景广阔。

关键词：人疱疹病毒 Allglo探针 4重荧光定量PCR 特异性灵敏度

Allglo探针Real-time RT-PCR检测发热伴血小板减少综合征病毒

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江苏预防医学 2016年第5期27卷 516-519页

作者：李志锋胡建利鲍倡俊王笑辰祁贤江苏省疾病预防控制中心南京210009

目的建立基于Allglo探针Real—time RT—PCR技术检测发热伴血小板减少综合征病毒（SFTSV）的方法。方法根据SFTSV基因组S片段的相对保守序列设计引物和Allglo探针，建立和优化Real—time RT—PCR反应体系，对其敏感性、特异性和稳定性... 详细信息

目的建立基于Allglo探针Real—time RT—PCR技术检测发热伴血小板减少综合征病毒（SFTSV）的方法。方法根据SFTSV基因组S片段的相对保守序列设计引物和Allglo探针，建立和优化Real—time RT—PCR反应体系，对其敏感性、特异性和稳定性进行评价，并检测临床疑似SFTSV病例标本，与普通RT—PCR法、病毒分离法和抗体检测法进行比较。结果所建立Allglo探针Real—time RT—PCR法检测SFTSV核酸，标准曲线方程为Y=3．38x＋46．03（Y为ct值，z为核酸拷贝数log值），r2〉O．998，扩增效率为97．6％，Ct值变异系数（CV）均〈1．2％，检测限为1．00×10^3copy／mL。与汉坦病毒、H1N1、H3N2、登革病毒1～4型均无交叉。检测362份疑似病例标本，SFTSV核酸阳性检出率11．9％，高于普通RT-PCR法、病毒分离法和抗体检测法（P值均d0．05）。结论建立的Allglo探针Real—time RT-PCR法，操作简单、快速，灵敏性、特异性较高，可用于SFTSV核酸检测。

关键词：发热伴血小板减少综合征病毒 Allglo探针 Real-timeRT-PCR 病毒分离抗体检测 RT-PCR

基于Allglo探针的双重实时荧光定量PCR法检测高危型人乳头瘤病毒HPV16/18

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江苏预防医学 2014年第2期25卷 16-19页

作者：陈璟李志锋张颂江苏省工人汤山疗养院南京211131 江苏省疾病预防控制中心南京210009 江苏省常熟市第一人民医院苏州215500

目的建立基于Allglo探针的双重实时荧光定量PCR检测高危型人乳头瘤病毒HPV16/18的方法。方法针对HPV16/18病毒基因组保守序列,设计引物和Allglo探针,建立双重荧光定量PCR检测方法,评价其敏感性、特异性和稳定性,并与传统HC2方法比较。... 详细信息

目的建立基于Allglo探针的双重实时荧光定量PCR检测高危型人乳头瘤病毒HPV16/18的方法。方法针对HPV16/18病毒基因组保守序列,设计引物和Allglo探针,建立双重荧光定量PCR检测方法,评价其敏感性、特异性和稳定性,并与传统HC2方法比较。结果成功建立了双重实时荧光定量PCR检测HPV16/18的方法,检测限均为10copies/μL,敏感性和特异性均为100%。应用该方法检测160份宫颈肿瘤患者样本,与传统HC2法结果一致性为100%。结论该研究建立的快速、准确、可同时检测HPV16/18的双重实时荧光定量PCR法,具有较高的敏感性、特异性和稳定性,操作简单,可用于HPV16/18的临床筛查和诊断。

关键词：人乳头瘤病毒 Allglo探针荧光定量PCR

致病性大肠埃希菌毒素基因的Allglo探针技术鉴定

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浙江预防医学 2014年第6期26卷 646-648页

作者：赵锎戎奇吉叶菊莲徐莹莹童柯方金大智温州医科大学附属慈溪医院检验科浙江温州315300 浙江省疾病预防控制中心

目的基于Allglo探针技术结合多重荧光PCR,建立快速、简便鉴定致病性大肠埃希菌相关毒素基因的方法。方法选取致病性大肠埃希菌的紧密黏附素基因(eae)、志贺样毒素Ⅰ基因(stx I)、志贺样毒素II基因(stx II)和转录激活因子基因(aggR)作为... 详细信息

目的基于Allglo探针技术结合多重荧光PCR,建立快速、简便鉴定致病性大肠埃希菌相关毒素基因的方法。方法选取致病性大肠埃希菌的紧密黏附素基因(eae)、志贺样毒素Ⅰ基因(stx I)、志贺样毒素II基因(stx II)和转录激活因子基因(aggR)作为靶点。通过设计引物和Allglo探针,建立多重荧光PCR反应体系。同时,构建了4种毒素基因标准质粒,进而评价方法的特异性、灵敏性和重复性。结果基于Allglo探针技术的多重荧光PCR方法可同时准确、特异地鉴定致病性大肠埃希菌所携带的4种毒素相关基因,eae基因和aggR基因的灵敏度为10 copies/μL,stx I基因和stx II基因的灵敏度为1 copies/μL;定量检测的批间和批内变异系数均小于5%。对356份腹泻粪便样本进行评价,结果显示检出39份基因阳性。39份阳性样本中,eae基因阳性为53.85%,stxⅠ基因和stx II基因阳性为23.08%,aggR基因阳性为46.15%。通过直接测序方法进行鉴定,符合率达到100.00%。结论本实验建立的基于Allglo探针技术结合多重荧光PCR方法具有操作简便、特异性好和灵敏度高等特点,为致病性大肠埃希菌鉴定提供了一种快速、可靠的检测方法。

关键词：致病性大肠埃希菌 Allglo探针毒素基因检测

Allglo探针四重荧光定量PCR技术同时检测四种疱疹病毒

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AllGlo探针四重荧光定量PCR技术同时检测四种疱疹病毒

Allglo探针与Taqman探针双重荧光RT-PCR法检测GI型和GII型诺如病毒的比较和应用

2011年浙江省检验医学学术年会

作者：余道军吴盛海王贤军童文娟杭州市第一人民医院检验科

目的探讨多重荧光定量PCR技术的优化条件,建立基于Allglo探针技术荧光定量法检测四种疱疹病毒新方法。方法分别采用单种和多重定性PCR扩增临床常见四种疱疹病毒(HSV-1、HSV-2、EBV、CMV)并测序鉴定,然后分别采用Allglo探针和TaqMan探针... 详细信息

目的探讨多重荧光定量PCR技术的优化条件,建立基于Allglo探针技术荧光定量法检测四种疱疹病毒新方法。方法分别采用单种和多重定性PCR扩增临床常见四种疱疹病毒(HSV-1、HSV-2、EBV、CMV)并测序鉴定,然后分别采用Allglo探针和TaqMan探针的单种和多重定量PCR技术对四种疱疹病毒进行单种和多种病毒同时定性定量检测。结果四种疱疹病毒单种定性PCR检测均为阳性,而多重PCR检测均为阴性;TaqMan探针和Allglo探针单种疱疹病毒检测阳性率和特异性均为100%,Allglo探针单种定量PCR检测比TaqMan探针单种定量PCR的检测Ct值高2-3,Allglo探针四重定量PCR可以同时检测四种疱疹病毒,相同样品Allglo探针四重定量PCR检测与TaqMan探针单种定量PCR分别检测的结果符合率100%。结论 Allglo探针荧光定量PCR技术的通量、灵敏度和特异性均高于TaqMan探针,应用前景广阔。

关键词：疱疹病毒 Allglo探针四重荧光定量PCR 特异性灵敏度

来源： cnki会议评论

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cnki会议

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中国卫生检验杂志 2013年第14期23卷 2924-2926,2947页

作者：王毅谦郭旸吴福平李辉邵景东张家港出入境检验检疫局江苏张家港215600 上海辉睿生物科技有限公司上海201210

目的对Allglo探针和Taqman探针检测GI型和GII型诺如病毒的双重荧光RT-PCR方法进行比较,并应用于临床标本的检测。方法设计针对GI型和GII型诺如病毒的Allglo探针和Taqman探针,优化最佳反应条件,建立一步法荧光RT-PCR快速检测反应体系。... 详细信息

目的对Allglo探针和Taqman探针检测GI型和GII型诺如病毒的双重荧光RT-PCR方法进行比较,并应用于临床标本的检测。方法设计针对GI型和GII型诺如病毒的Allglo探针和Taqman探针,优化最佳反应条件,建立一步法荧光RT-PCR快速检测反应体系。对这两种方法的特异性、灵敏度进行比较评估,对56份临床粪便标本进行检测,并统计结果。结果这两种方法特异性强;最低检测限均为102copies/μL以下;但是Allglo探针在同一浓度下比Taqman探针CT值更低,扩增效率更高。对56份临床粪便标本进行检测,两种方法结果一致。结论 Allglo探针双重荧光RT-PCR方法较之Taqman探针检测GI型和GII型诺如病毒扩增效率更高,两者均可用于感染性腹泻暴发中诺如病毒的快速筛查。

关键词： Allglo探针 Taqman探针 GⅠ型和GⅡ型诺如病毒

应用Allglo探针检测对虾白斑综合征病毒研究

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中国动物检疫 2010年第11期27卷 31-33页

作者：陈定虎杨雷亮冯云张建威潘星徐守振中山出入境检验检疫局广东中山528403 青岛农业大学山东青岛266000

用Allglo探针检测对虾白斑综合征病毒,阳性反应呈典型的S曲线,说明本检测探针和引物设计合理。经灵敏度测定,当样品DNA浓度低至100拷贝/μL时,仍可以有效扩增,但在103/μL之上时结果最佳。同时,经过与传统探针检测对比试验得出:用Taqma... 详细信息

用Allglo探针检测对虾白斑综合征病毒,阳性反应呈典型的S曲线,说明本检测探针和引物设计合理。经灵敏度测定,当样品DNA浓度低至100拷贝/μL时,仍可以有效扩增,但在103/μL之上时结果最佳。同时,经过与传统探针检测对比试验得出:用Taqman标记的探针检测相同量的样品时,allglo MAR标记的探针(FAM通道)CT值与FAM标记的探针的CT值没有明显区别,但是MAR标记的探针的荧光信号强度要比FAM标记的探针约高40%,更适合于对虾白斑综合征病毒的检测。

关键词： Allglo探针对虾白斑综合征病毒检测

GⅠ和GⅡ型诺如病毒双重荧光RT-PCR法检测

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中国公共卫生 2013年第4期29卷 599-602页

作者：王毅谦石晶吴福平郭旸李辉邵景东张家港出入境检验检疫局综合技术中心江苏215600 上海辉睿生物科技有限公司

目的建立应用Allglo探针同时检测GⅠ和GⅡ型诺如病毒的双重荧光反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法。方法设计针对GⅠ和GⅡ型诺如病毒开放阅读框架ORF1及ORF2为目的基因的引物和Allglo探针,优化最佳反应条件,建立一步法荧光RT-PCR快速检... 详细信息

目的建立应用Allglo探针同时检测GⅠ和GⅡ型诺如病毒的双重荧光反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法。方法设计针对GⅠ和GⅡ型诺如病毒开放阅读框架ORF1及ORF2为目的基因的引物和Allglo探针,优化最佳反应条件,建立一步法荧光RT-PCR快速检测反应体系;对该方法的特异性、抗干扰性、灵敏度进行评估,对96份临床粪便标本进行检测、测序分析。结果该方法特异性强,与轮状病毒、扎如病毒、星状病毒、腺病毒同时检测无交叉反应;同一体系下GⅠ或GⅡ型诺如病毒相互之间没有干扰;最低检测限均为10 copies/μL;对96份临床粪便标本进行检测,结果与单重荧光RT-PCR方法符合率100%,且测序结果显示目标序列正确。结论本研究建立的Allglo探针法检测GⅠ和GⅡ型诺如病毒技术特异性好,灵敏度高,可用于感染性腹泻暴发中诺如病毒的快速筛查。

关键词： Allglo探针 GI和GII型诺如病毒快速检测