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Agrobacterium-mediated transformation of herbicide resistance in creeping bentgrass and colonial bentgrass

Journal of Zhejiang University Science 2003年第3期4卷 346-351页

作者：柴明良汪炳良 KIMJae-yeoul LEEJong-min KIMDoo-hwan DepartmentofHorticulture ZhejiangUniversityHangzhou310029China DeoartmentofHorticulturalScience KonkukUniversitySeoul143-701Korea DepartmentofBiologyScience TheUniversityofAucklandNewZealand

Embryogenic calli were induced from the seeds of creeping bentgrass ( agrostis palustris Huds.) cv. Regent and colonial bentgrass ( agrostis Tenuis Sibth. Fl. Oxen.) cv. Tiger. The embryogenic calli were precultured on fresh medium for 4-7 days and then co cultivated with Agrobacterium tumefaciens , LBA4404, which contains plasmid vector pSBGM harboring bar coding region, synthetic green fluorescent protein (sGFP) coding region and matrix attachment region (MAR). After 3 days of co cultivation, the calli were washed thoroughly and transferred to MS medium containing 2 mg/L of 2, 4 D, 12-15 mg/L phosphinothricin (PPT) and 250 mg/L of cefotaxime. After 2-3 months of selection, the actively growing calli of 'Regent' and 'Tiger' were transferred to MS medium with 12-15 mg/L PPT and 250 mg/L cefotaxime for regeneration. The putative transformants were maintained on MS medium with 3 mg/L PPT for long period but control died within 1 month. After establishing in greenhouse, the transformants also showed strong resistance to 0.4% of herbicide Basta but control plants died within 2 weeks. Under confocal microscope, both young leaves and roots showed significant GFP expression. PCR analysis revealed the presence of a DNA fragment of GFP gene at the expected size (380 bp) in the transformants and its absence in a randomly selected control plant.

关键词： agrostis palustris agrostis tenuis Agrobacterium Herbicide resistance sGFP(synthetic green fluorescent protein)

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