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circCAPRIN1 interacts with STAT2 to promote tumor progression and lipid synthesis via upregulating acc1 expression in colorectal cancer

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Cancer Communications 2023年第1期43卷 100-122页

作者： Yufei Yang Dakui Luo Yang Shao Zezhi Shan Qi Liu Junyong Weng Weijing He Ruoxin Zhang Qingguo Li Ziliang Wang Xinxiang Li Department of Colorectal Surgery Fudan University Shanghai Cancer CenterShanghai 200032P.R.China Department of Oncology Shanghai Medical CollegeFudan UniversityShanghai 200032P.R.China Cancer Institute Fudan University Shanghai Cancer CenterShanghai 200032P.R.China Shanghai Municipal Hospital of Traditional Chinese Medicine Shanghai University of Traditional Chinese MedicineShanghai 200071P.R.China

Background:Circular RNAs(circRNAs)generated by back-splicing of precursor mRNAs(pre-mRNAs)are often aberrantly expressed in cancer *** evidence has revealed that circRNAs play a critical role in the progression of several cancers,including colorectal cancer(CRC).However,the current understandings of the emerging functions of circRNAs in CRC lipid metabolism and the underlying molecular mechanisms are still ***,we aimed to explore the role of circCAPRIN1 in regulating CRC lipid metabolism and ***:circRNA microarray was performed with three pairs of tumor and non-tumor tissues from CRC *** expression of circRNAs were determined by quantitative PCR(qPCR)and in situ hybridization(ISH).The endogenous levels of circRNAs in CRC cells were manipulated by transfection with lentiviruses overexpressing or silencing *** regulatory roles of circRNAs in the occurrence of CRC were investigated both in vitro and in vivo using gene expression array,RNA pull-down/mass spectrometry,RNA immunoprecipitation assay,luciferase reporter assay,chromatin immunoprecipitation analysis,and fluorescence in situ hybridization(FISH).Results:Among circRNAs,circCAPRIN1 was most significantly upregulated in CRC tissue ***1 expression was positively correlated with the clinical stage and unfavorable prognosis of CRC *** of circCAPRIN1 suppressed proliferation,migration,and epithelial-mesenchymal transition of CRC cells,while circCAPRIN1 overexpression had opposite *** sequencing and gene ontology analysis indicated that circCAPRIN1 upregulated the expressions of genes involved in CRC lipid ***,circCAPRIN1 promoted lipid synthesis by enhancing Acetyl-CoA carboxylase 1(acc1)*** mechanistic assays demonstrated that circCAPRIN1 directly bound signal transducer and activator of transcription 2(STAT2)to activate acc1 transcription,thus regulating lipid metabolism and facilit

关键词： circRNA colorectal cancer circCAPRIN1 lipid metabolism STAT2 acc1

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敲低acc1对胶质瘤U251细胞迁移的作用及机制研究

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中国应用生理学杂志 2022年第6期38卷 745-753页

作者：张琳钱河赵宝生高曼棋刘玉珍新乡医学院第一附属医院河南省神经修复重点实验室河南卫辉453100 新乡医学院第一附属医院生命科学研究中心河南卫辉453100 新乡医学院第一附属医院胸外科河南卫辉453100

目的:探讨敲低acc1对人胶质瘤U251细胞迁移的作用及机制。方法:选用人胶质瘤U251细胞系。实验分为三部分,实验一:通过慢病毒转染建立稳定低表达acc1的U251细胞株(shacc1)及其对照(NC),Transwell迁移及划痕实验检测细胞迁移,WB检测acc1、... 详细信息

目的:探讨敲低acc1对人胶质瘤U251细胞迁移的作用及机制。方法:选用人胶质瘤U251细胞系。实验分为三部分,实验一:通过慢病毒转染建立稳定低表达acc1的U251细胞株(shacc1)及其对照(NC),Transwell迁移及划痕实验检测细胞迁移,WB检测acc1、Vimentin、Fibronectin、N-cadherin、E-cadherin、Slug蛋白表达;实验二:探索并验证敲低acc1后下游关键分子PAI-1表达量升高。应用其抑制剂PAI-039处理细胞,Transwell迁移及划痕实验检测细胞迁移,WB检测acc1、PAI-1、Vimentin、Fibronectin、N-cadherin、E-cadherin、Slug蛋白表达;实验三:探索敲低acc1调节PAI-1的分子机制,检测细胞乙酰辅酶A水平及组蛋白H3乙酰化。使用乙酰基转移酶抑制剂C646处理细胞,Transwell迁移及划痕实验检测细胞迁移,WB检测acc1、H3K9ac、PAI-1、Vimentin、Fibronectin、N-cadherin、E-cadherin、Slug蛋白表达,RT-qPCR检测PAI-1 mRNA水平;每项实验重复三次。结果:实验一:对胶质瘤U251细胞进行慢病毒转染,WB结果显示,与NC组相比,shacc1组acc1表达水平显著降低,提示慢病毒转染成功(P1),shacc1组迁移细胞数明显增多(P1),迁移相关蛋白Vimentin、Fibronectin、N-cadherin、Slug表达上调,E-cadherin表达下调(P1);实验二:与NC组相比,shacc1组PAI-1 mRNA水平上调;进一步使用PAI-1的抑制剂PAI-039,与对照组相比,shacc1+PAI-039组细胞迁移数减少,且呈浓度依赖性(P1),迁移相关蛋白Vimentin、Fibronectin、N-cadherin、Slug表达上调,E-cadherin表达下调(P1);实验三:与NC组相比,shacc1组乙酰辅酶A浓度显著增加(P1),H3K9ac表达水平明显升高(P1);进一步使用组蛋白乙酰基转移酶抑制剂C646处理细胞后,PAI-1 mRNA水平下降,与对照组相比,shacc1+C646组细胞迁移数减少,且呈浓度依赖性(P1),H3K9ac表达水平降低,迁移相关蛋白Vimentin、Fibronectin、N-cadherin、Slug表达上调,E-cadherin表达下调(P1);结论:敲低acc1通过增加组蛋白乙酰化修饰水平上调PAI-1促进人胶质瘤U251细胞的迁移。

关键词：胶质瘤 acc1 组蛋白乙酰化 PAI-1 细胞培养迁移

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雷公山山区放牧山羊acc1 mRNA的组织分布

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江苏农业科学 2015年第5期43卷 25-28页

作者：杨家大陈祥龙威海冯文武丁玫凯里学院环境与生命科学学院贵州凯里556011 贵州大学高原山地动物遗传育种与繁殖省部共建教育部重点实验室贵州贵阳550025

为了揭示雷公山山区放牧山羊乙酰辅酶A羧化酶1(acc1)mRNA表达的组织分布规律,使用Taq Man实时荧光定量技术对黔东南小香羊、贵州白山羊、贵州黑山羊、黔北麻羊和南江黄羊的肝、肾、心、肺、背最长肌、半膜肌以及皮下脂肪组织中acc1基因... 详细信息

为了揭示雷公山山区放牧山羊乙酰辅酶A羧化酶1(acc1)mRNA表达的组织分布规律,使用Taq Man实时荧光定量技术对黔东南小香羊、贵州白山羊、贵州黑山羊、黔北麻羊和南江黄羊的肝、肾、心、肺、背最长肌、半膜肌以及皮下脂肪组织中acc1基因的mRNA表达水平进行测定。结果表明,黔东南小香羊、黔北麻羊、南江黄羊acc1 mRNA均主要在皮下脂肪中表达,其水平分别为3 919.545 6、900.556 8、1 550.559 2;贵州黑山羊acc1 mRNA主要在肝脏内表达,其水平为2 367.425 8;贵州白山羊acc1 mRNA主要在肌肉组织和肝脏中表达,其水平分别为背最长肌420.110 9,心351.436 1,半膜肌268.031 1,肝200.414 1。在皮下脂肪和肝脏,贵州白山羊acc1 mRNA的表达水平都明显低于其他品种。由此可见,雷公山山区放牧山羊acc1 mRNA主要在皮下脂肪和肝脏中表达。

关键词：雷公山山区放牧山羊乙酰辅酶1 羧化酶1 acc1 基因表达

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acc1介导SOCE调控肥胖小鼠CD4+Th17细胞IL-17分泌的研究

ACC1介导SOCE调控肥胖小鼠CD4+Th17细胞IL-17分泌的研究

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作者：何雨欣黑龙江八一农垦大学

学位级别：硕士

随着人们现代生活水平的提高,肥胖症已经成为了一个全球性的问题,其发病率也在不断上升。肥胖病人体内免疫系统常常会失衡,这表明肥胖症与免疫系统之间存在密切关系。因此,观察肥胖症免疫系统的变化显得十分重要,对于肥胖症的预防和治... 详细信息

随着人们现代生活水平的提高,肥胖症已经成为了一个全球性的问题,其发病率也在不断上升。肥胖病人体内免疫系统常常会失衡,这表明肥胖症与免疫系统之间存在密切关系。因此,观察肥胖症免疫系统的变化显得十分重要,对于肥胖症的预防和治疗具有重要的参考价值。肥胖导致油酸和亚油酸等游离脂肪酸（FFA）的增多,同时也有研究表明CD4T细胞参与肥胖引发的炎症反应。在脂肪酸的代谢过程中,用于合成脂肪的前体物质是乙酰辅酶A羧化酶1（acc1）,其在Th17细胞分化过程中扮演重要角色。细胞内Ca稳态是保持细胞正常功能的基础,在非兴奋性细胞中钙池引发的钙离子内流（SOCE）是调控胞内Ca水平的主要通道,还参与Th17细胞的调控所以acc1与SOCE之间存在着联系。因此,本研究旨在明确acc1是否能够通过SOCE调控肥胖小鼠CD4Th17细胞分泌IL-17的含量。本研究通过对C57BL/6小鼠饲喂正常对照饲料和高脂模型饲料构建小鼠肥胖模型。通过每周称重并记录体重的变化情况,观察到高脂小鼠体型明显偏大,无菌分离出小鼠的脾脏并照相记录脾脏外形的变化。通过ELISA方法检测摘除小鼠眼球采集的血液中白介素-17（IL-17）的含量。结果发现,高脂组小鼠的体型增大、脾脏肿胀变大以及IL-17含量升高。再利用磁珠阳性分选出CD4T细胞或阴性分选出Naive CD4T细胞,检测脂质合成相关基因（FASN、acc1和SREBP-1C）、脂肪酸氧化相关基因（CPT1）以及SOCE相关基因（ORAI1、ORAI2、ORAI3、STIM1和STIM2）。结果表明,高脂组小鼠CD4T细胞中脂质合成相关基因和SOCE相关基因显著升高,而脂肪酸氧化相关基因CPT1的表达降低。随后采用流式细胞术检测CD4T细胞中IL-17的含量,结果表明IL-17的含量增加。Naive CD4T细胞中检测脂质合成、脂肪酸氧化和SOCE相关的主要基因表达情况以及对Th17细胞分化的影响,结果显示与CD4T细胞的结果一致。表明高脂饲喂会促进小鼠脂质的合成和SOCE以及Th17细胞的分化,降低了脂肪酸的氧化。为了研究SOCE对CD4Th17细胞的影响,我们采用油酸（OA）刺激小鼠CD4T细胞作为体外研究基础。用不同浓度的OA（0、100、200、300、400、500μM）刺激CD4T细胞48 h。结果显示,在300μM OA时acc1的表达量上升最大且显著。接下来分别添加SOCE激活剂毒胡萝卜素（Thapsigargin）或抑制剂2-氨基乙氧基二苯基硼酸盐（2-APB）刺激CD4Th17细胞,再加入300μM OA刺激细胞,以确定SOCE对CD4Th17细胞分泌IL-17的影响。流式细胞术检测IL-17的含量发现激活SOCE会导致其分泌升高。此外,在Naive CD4T细胞中检测激活/抑制SOCE相关的主要基因表达情况以及IL-17的含量。首先添加SOCE激活/抑制剂,再加入OA和诱导分化为Th17细胞的细胞因子,结果显示与CD4T细胞的结果一致,表明体外添加OA能够促进SOCE相关基因的表达,进而影响CD4Th17细胞的分化。为了进一步确定acc1与SOCE之间的关系,我们在CD4Th17细胞中先添加了acc1抑制剂1μM ND-630刺激细胞48 h后,再添加OA刺激48 h,结果发现,抑制acc1减少SOCE相关基因的表达以及IL-17的含量,而增强了CPT1的表达。此外,还在Naive CD4T细胞中先加入抑制剂ND-630,再加入OA和诱导分化为Th17细胞的细胞因子刺激Naive CD4T细胞。检测关于acc1、SOCE的主要相关基因同样的表达情况以及IL-17的含量变化情况,结果表明,无论是在CD4T细胞还是在Naive CD4T细胞当中,抑制acc1的表达会降低SOCE的表达以及IL-17的含量。综上所述,肥胖小鼠中脂肪酸含量高进而导致脂质合成增多,发现激活/抑制SOCE会影响CD4Th17细胞产生IL-17的含量。在加入acc1抑制剂ND-630,且外源添加OA的情况下,不但对IL-17的含量产生影响还使SOCE的表达降低。说明acc1能够通过SOCE调控肥胖小鼠CD4Th17细胞的功能,研究结果为防治肥胖症的发生提供新思路。

关键词：脂质合成 acc1 CD4+Th17细胞 SOCE

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利用CRISPR/Cas9技术编辑大麦乙酰辅酶A羧化酶(acc1)基因

利用CRISPR/Cas9技术编辑大麦乙酰辅酶A羧化酶(ACC1)基因

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作者：林萌萌山东农业大学

学位级别：硕士

大麦(Hordeum vulgare L.,2n=2x=14)是世界上仅次于玉米、水稻和小麦的第四大谷类作物,是麦族研究的模式植物。acc1基因编码的乙酰辅酶A羧化酶(Acetyl-CoA carboxylase,accase)是植物叶绿体中催化脂肪酸从头合成过程第一步的关键酶。以A... 详细信息

大麦(Hordeum vulgare L.,2n=2x=14)是世界上仅次于玉米、水稻和小麦的第四大谷类作物,是麦族研究的模式植物。acc1基因编码的乙酰辅酶A羧化酶(Acetyl-CoA carboxylase,accase)是植物叶绿体中催化脂肪酸从头合成过程第一步的关键酶。以accase为靶位点开发的除草剂已广泛应用于消除阔叶作物中的禾本科杂草。在前人的研究中,小麦acc1基因中羧基转移酶结构域的一个氨基酸突变(A1992V)能产生对accase抑制剂类(Group 1)除草剂的抗性。本研究中,我们利用CRISPR/Cas9(clustered regularly interspaced short palindromic repeats/CRISPR-associated proteins9)基因编辑技术对大麦acc1基因进行编辑,以期获得抗accase抑制剂类除草剂的大麦,并为利用CRISPR/Cas9开展大麦基因组编辑奠定基础和提供实验指导。本课题的主要研究结果如下:1.根据小麦acc1基因序列(AF029895),获得并向Genebank提交大麦‘Tamalpais’acc1基因的DNA序列(MK481069),cDNA序列(MK481066)和大麦‘Morex’acc1基因cDNA序列(MK481065)。对禾草类不同物种的acc1基因进行基因注释及结构分析,归纳总结了禾草类植株抗除草剂的突变位点。2.根据大麦acc1(Hvacc1)基因序列,在乙酰辅酶A羧化酶的羧基转移酶结构域处选择了四个靶位点(T1-T4),构建了三个CRISPR/Cas9基因编辑载体(V1-V3)。其中V1和V2载体各包含一个靶位点,V3载体包含两个靶位点。3.本研究构建了三个Donor载体(D1-D3)以实现基因替换。其中D1为73 bp的单链DNA,可以通过同源重组途径实现断裂DNA的修复;D2为双链环形质粒,其中包含465 bp Hvacc1基因的同源序列,可通过同源重组途径进行DNA修复;D3为双链环形质粒,其中包含702 bp Hvacc1基因的同源序列,同源序列的两端含有T3和T4的靶点序列,可通过非同源末端连接途径进行DNA修复。4.利用基因枪轰击法对三个CRISPR/Cas9基因编辑载体和三个Donor载体分别进行大麦共转化,转化大麦幼胚2,300个,获得再生植株90棵。经过潮霉素基因筛选,确定阳性转基因植株84棵,其中独立的转基因事件20个,转基因效率为0.87%。5.利用TILLING技术对转基因植株进行检测,V3+D3载体的转化事件中,8棵植株发生了基因编辑,基因编辑效率为25%。测序结果表明,7棵植株在T3靶位点处发生3-bp的删除,导致第1878号异亮氨酸缺失(acc1:***1878del);1棵植株在T4靶位点处发生26-bp的删除,导致acc1蛋白在C端缺失213个氨基酸(acc1:***2099ys2311del)。这8棵植株均未检测到基因替换,转化V1和V2载体的转基因植株并未检测到基因编辑的发生。6.对Ile1878del突变体T代大麦进行了分蘖和穗部性状的调查分析,结果表明突变并不影响大麦的有效分蘖数、平均分蘖高度、穗长及小穗数。同时对该突变体材料进行了除草剂抗性鉴定,发现该突变不改变大麦对APP类除草剂高效氟吡甲禾灵(haloxyfop)、烯草酮(clethodim)、精喹禾灵(quizalofop-P-ethyl)烯禾啶(sethoxydim)的抗性反应。

关键词： acc1 CRISPR/Cas9 TILLING 乙酰辅酶A羧化酶基因替换

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基于acc1、Pgk1和trnL-F基因探究披碱草属自然杂种起源

基于Acc1、Pgk1和trnL-F基因探究披碱草属自然杂种起源

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作者：于正豪四川农业大学

学位级别：硕士

小麦族植物中不同属间、种间的自然杂交现象较为常见。刘晓燕(2017)报道了8份五倍体自然杂种(SH01-SH08,2n=35,StStHHY),2份四倍体自然杂种(SH09&SH10,2n=28,StStHH)。为探讨这10份自然杂种的起源和形成机制,本研究利用2个细胞核基因(A... 详细信息

小麦族植物中不同属间、种间的自然杂交现象较为常见。刘晓燕(2017)报道了8份五倍体自然杂种(SH01-SH08,2n=35,StStHHY),2份四倍体自然杂种(SH09&SH10,2n=28,StStHH)。为探讨这10份自然杂种的起源和形成机制,本研究利用2个细胞核基因(acc1与Pgk1)以及1个叶绿体基因(trnL-F)对10份自然杂种及其伴生物种、可能的亲本供体和小麦族基本二倍体供体种进行系统发育分析,探究10份自然杂种可能的亲本供体,探讨杂种形成机制,为下一步杂种的育种利用及恢复杂种育性提供基础理论资料。主要结果如下:1.从10份自然杂种(SH01-SH10)中共克隆了45条acc1序列以及42条Pgk1序列以及10条trn L-F序列。2.五倍体自然杂种(SH01-SH08)具有两种不同来源的St和H基因组,一个Y基因组,基因组组成为StStHHY;四倍体自然杂种(SH09&SH10)具有两种不同来源的St基因组,一个H基因组,基因组组成为StStHH。3.根据2个细胞核基因(acc1与Pgk1)和1个叶绿体基因(trn L-F)系统发育分析的结果表明:(1)SH01、SH02、SH03、SH05、SH06这5份自然杂种的亲本分别来自短芒曲穗草和老芒麦,且短芒曲穗草为母本;(2)SH04和SH07这2份自然杂种的亲本来自垂穗曲穗草和老芒麦,且垂穗曲穗草为母本;(3)SH08的亲本是麦宾草和老芒麦,且麦宾草为母本;(4)2份四倍体自然杂种SH09和SH10的亲本是老芒麦与一个尚不明确的披碱草属物种,且老芒麦为母本。

关键词：小麦族披碱草属自然杂交起源 acc1 Pgk1 trnL-F

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LncRNA CTD-2245E15.3通过调节合成代谢酶acc1和PC促进非小细胞肺癌的细胞生长

LncRNA CTD-2245E15.3通过调节合成代谢酶ACC1和PC促进非小细胞肺...

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作者：孟祥凤南京大学

学位级别：硕士

长链非编码RNA(long noncoding RNAs,lncRNAs)是一类长度大于200bp的调控型非编码RNA(noncoding RNAs,nc RNAs),通常没有蛋白质编码功能或具有较低的蛋白质编码潜力。目前已发现lncRNAs是分化、发育和疾病的新兴调节因子,通过与DNA、RN... 详细信息

长链非编码RNA(long noncoding RNAs,lncRNAs)是一类长度大于200bp的调控型非编码RNA(noncoding RNAs,nc RNAs),通常没有蛋白质编码功能或具有较低的蛋白质编码潜力。目前已发现lncRNAs是分化、发育和疾病的新兴调节因子,通过与DNA、RNA和蛋白质的相互作用,参与转录和转录后水平的基因表达调控。随着高通量测序的广泛应用,许多lncRNAs被鉴定出具有肿瘤抑制或致癌功能,可驱动细胞增殖、迁移或基因组不稳定等多种重要的癌症表型。Lnc RNAs的功能具有多样性,目前lncRNAs的科研工作仍处于鉴定与功能研究阶段,其与肿瘤发生发展相关的作用机制亟需进一步阐明。肺癌(lung cancer,LC)是全球癌症相关死亡的主要原因,依据组织学特征,可分为小细胞肺癌(small cell lung cancer,SCLC)和非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC),其中非小细胞肺癌为主要的肺癌类型。早期非小细胞肺癌无明显症状,多数患者确诊时已表现为局部晚期或发生肿瘤转移;临床上对于早期非小细胞肺癌患者多采用手术为主的治疗原则,而晚期非小细胞肺癌患者则仅进行放化疗及免疫治疗。然而晚期非小细胞肺癌患者的预后较差,其5年生存率不足15%,因此,发展新型有效的早期诊断标志物对于非小细胞肺癌的治疗至关重要。在本研究中,我们应用lncRNA表达微阵列技术,鉴定了一组在非小细胞肺癌中差异表达的lncRNAs,并报道了一种新的lncRNA,CTD-2245E15.3;该lncRNA长度为685bp,在肺癌样本中表达显著上调,主要分布在细胞质中。我们发现CTD-2245E15.3是一种致癌的lncRNA,在体内外均能促进NSCLC的细胞生长。CTD-2245E15.3的敲降导致细胞代谢过程中富集的基因被抑制,我们的研究发现CTD-2245E15.3的致癌作用是通过与合成代谢关键酶乙酰辅酶A羧化酶1(acc1)和丙酮酸羧化酶(PC)的结合来实现的,这两种酶是快速增殖的肿瘤细胞中生物合成的关键调控因子。CTD-2245E15.3的敲降增加了acc1蛋白在酶活性抑制位点(Ser117)的磷酸化,并通过泛素化作用促进了PC蛋白的降解,补充棕榈酸酯或草酰乙酸(分别为acc1和PC的催化合成产物)可以恢复CTD-2245E15.3基因敲降后抑制的细胞生长。综上所述,我们的研究发现了一种新的lncRNA,CTD-2245E15.3;揭示了CTD-2245E15.3作为致癌的lncRNA在肿瘤生长的合成代谢过程中的重要作用,为非小细胞肺癌的治疗提供了新的靶点和思路。

关键词：非小细胞肺癌长链非编码RNA CTD-2245E15.3 细胞生长合成代谢 acc1 PC

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基于单拷贝核Pgk1和acc1基因序列对中国赖草属植物的系统发育研究

基于单拷贝核Pgk1和Acc1基因序列对中国赖草属植物的系统发育研究

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作者：王静四川农业大学

学位级别：硕士

赖草属Leymus Hochst.是小麦族Triticeae(Poaceae)的一个重要多年生属,全世界有约32个种和19个亚种,从北极寒温带到南亚热带均有分布。中国是赖草属物种分布最多的国家。该属植物的大多数物种为草原和草甸的主要组成成分,许多种类是优... 详细信息

赖草属Leymus Hochst.是小麦族Triticeae(Poaceae)的一个重要多年生属,全世界有约32个种和19个亚种,从北极寒温带到南亚热带均有分布。中国是赖草属物种分布最多的国家。该属植物的大多数物种为草原和草甸的主要组成成分,许多种类是优良的牧草,具有较高的饲用价值。同时,赖草属植物的许多优良性状(如耐盐碱、耐旱、抗病虫等)已成为麦类作物和牧草遗传改良的重要基因资源。然而,目前赖草属植物的系统地位、种间亲缘关系、基因组来源、起源仍然存在较大的分歧。本研究利用编码质体乙酰-CoA羧化酶(plastid acetyl-CoA carboxylase)和磷酸甘油酸激酶的(phosphoglycerate kinase)的两个单拷贝核acc1和Pgk1基因序列,对中国分布的赖草属植物及其近缘属冰草属(P)、澳冰草属(W)、新麦草属(Ns)、拟鹅观草属(St)、大麦属(H)、Thinopyrum(E)和Lophopyrum(E)植物共32个类群进行了系统发育重建,探讨中国赖草属的属内种间及其与近缘属间的系统关系、Ns基因组供体来源和Xm基因组可能的起源。主要结果如下: 1.在基于Pgk1和acc1基因序列的系统发育树中,绝大多数赖草属植物都与3个新麦草属植物聚为一支,表明赖草属植物与新麦草属关系密切,支持赖草属植物的Ns基因组来源于新麦草属。Pgk1基因数据还显示,不同的赖草属植物分别与不同的新麦草属植物聚在一起,暗示可能不同的新麦属植物参与了不同的赖草属植物的物种形成。 ***1和acc1基因系统发育树显示除***外,赖草属植物没有和拟鹅观草属、Thinopyrum和Lophopyrum形成分支,表明拟鹅观草属、Thinopyrum和Lophopyrum与赖草属植物亲缘关系不密切。然而,在Pgk1基因系统发育树中,*** A与***植物聚在一起,*** B与***和2个冰草属植物聚为一支,暗示***可能存在基因渗入现象。 ***1基因系统发育树显示acc1基因的Xm基因组拷贝类型与冰草属植物形成一个自展支持率为92%的分支。Pgk1基因系统发育树显示,除了***外,其它赖草属植物的Pgk1基因的Xm基因组拷贝类型没有与任何一个供试的二倍体植物聚在一起,这些结果表明赖草属植物的Xm基因组来源至少涉及到P基因组和一个未知来源的基因组。 ***1和acc1基因系统发育树中,来自青藏高原的***、***、***、***、***、***、***、***、***形成一支,表明来它们具有较近的亲缘关系;来自新疆的***、***和***聚在一起,表明三者的亲缘关系较近。 ***1基因数据显示同一个赖草属物种具有两种不同的Ns序列,且分别与不同的赖草属植物聚在一起,推测不同赖草属物种间可能由于杂交导致了物种间存在多重起源,不同赖草属植物间可能存在遗传交流。 ***1和acc1基因序列的系统发育分析显示青藏高原赖草属植物形成一个独立的分支,推测青藏高原赖草在长期的演化中已处于相对独立的状态。Pgk1和acc1基因数据也表明青藏高原赖草属植物与东北亚赖草属植物亲缘关系较近。

关键词：赖草属分子系统学核基因 acc1 Pgk1 亲缘关系地理分化

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敲低acc1在胶质瘤细胞迁移侵袭中的作用及其机制研究

敲低ACC1在胶质瘤细胞迁移侵袭中的作用及其机制研究

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作者：王阳新乡医学院

学位级别：硕士

背景胶质瘤是中枢神经系统常见的恶性肿瘤,且极易脑内转移,为根治性切除及有效的局部放疗带来极大困难。肿瘤细胞代谢及相关代谢酶的变化已证明与肿瘤的发生发展密切相关。虽然TCGA数据库显示,乙酰辅酶A羧化酶1（Acetyl-CoA carboxylati... 详细信息

背景胶质瘤是中枢神经系统常见的恶性肿瘤,且极易脑内转移,为根治性切除及有效的局部放疗带来极大困难。肿瘤细胞代谢及相关代谢酶的变化已证明与肿瘤的发生发展密切相关。虽然TCGA数据库显示,乙酰辅酶A羧化酶1（Acetyl-CoA carboxylation1,acc1）mRNA在胶质瘤表达水平较正常脑组织显著降低,但acc1如何影响胶质瘤的发生发展尚未见报道。本文旨在探讨acc1对胶质瘤细胞迁移和侵袭的影响及其可能的机制,为胶质瘤细胞的能量代谢与肿瘤发生发展间的关系提供更全面的理论基础。目的本研究通过敲低胶质瘤细胞U251中acc1,阐明acc1与胶质瘤细胞迁移和侵袭的相关性,为认识细胞的能量代谢与胶质瘤发生发展间的关系提供新视角。方法选择人神经胶质瘤U251细胞系。首先,通过慢病毒转染技术敲低U251细胞中的acc1,并通过Transwell迁移/侵袭实验及划痕实验检测敲低acc1后对细胞迁移和侵袭的影响;通过Western blot实验检测相关迁移和侵袭蛋白Vimentin,Fibronectin及uPA的表达水平;然后,通过流式细胞仪检测细胞中活性氧（Reactive oxygen species,ROS）水平,并通过具有自由基清除功能的抗氧化剂N-乙酰基-L-半胱氨酸（N-Acetyl-L-cysteine,NAC）验证ROS与敲低acc1后U251细胞迁移和侵袭改变间的关系;最后通过相关抑制剂的处理,探讨敲低acc1导致的ROS水平的升高而影响胶质瘤细胞迁移和侵袭的相关信号通路。结果敲低acc1促进胶质瘤细胞迁移和侵袭;Western blot结果表明,敲低acc1后相关蛋白acc1,Vimentin,Fibronectin及uPA表达水平升高,同时细胞中乙酰化组蛋白H3（Acetylated histone3,acH3）的表达水平也升高。通过流式细胞仪检测细胞中ROS水平,结果表明,敲低acc1使U251细胞中ROS的水平升高,进一步验证ROS与胶质瘤细胞迁移和侵袭的相关性,发现具有自由基清除功能的抗氧化剂NAC可以降低细胞中ROS的水平,并且抑制敲低acc1介导的胶质瘤细胞的迁移和侵袭;Western blot结果表明NAC作用后相关蛋白Vimentin,Fibronectin和uPA表达水平降低;在实验中发现敲低acc1后ERK1/2的磷酸化水平（p-ERK1/2）升高,通过相关抑制剂U0126的应用,发现U0126可以抑制敲低acc1的U251细胞的迁移,Western blot检测相关蛋白发现U0126作用后敲低acc1的U251细胞中Vimentin,Fibronectin和uPA表达水平降低,这表明升高的ROS可能通过磷酸化ERK1/2促进U251细胞的迁移和侵袭。结论敲低acc1增加胶质瘤细胞U251中的ROS水平,并通过磷酸化ERK1/2促进胶质瘤细胞的迁移和侵袭。

关键词： acc1 胶质瘤细胞 ROS 迁移侵袭

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敲低acc1通过上调HSP27促进食管鳞癌KYSE-450细胞迁移的机制研究

敲低ACC1通过上调HSP27促进食管鳞癌KYSE-450细胞迁移的机制研究

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作者：钱河新乡医学院

学位级别：硕士

背景食管鳞状细胞癌（esophageal squamous cell carcinoma,ESCC）是我国最常见的食管癌病理类型。转移是ESCC患者预后差,死亡率高的主要原因。至今,尚缺乏有效治疗ESCC转移的方案,因此阐明ESCC转移机制对于改善ESCC患者预后、提高患者... 详细信息

背景食管鳞状细胞癌（esophageal squamous cell carcinoma,ESCC）是我国最常见的食管癌病理类型。转移是ESCC患者预后差,死亡率高的主要原因。至今,尚缺乏有效治疗ESCC转移的方案,因此阐明ESCC转移机制对于改善ESCC患者预后、提高患者生存率具有重要意义。研究显示,调节脂肪酸合成的限速酶—乙酰辅酶A羧化酶1（acetyl-Co A carboxylase 1,acc1）,其表达水平与癌症转移关系密切。我们前期临床研究发现,acc1低表达与ESCC患者预后差,早期转移有关,但分子机制尚不明确。目的探究acc1低表达对食管鳞癌KYSE-450细胞迁移的影响及其分子机制,为ESCC转移的诊疗提供潜在的生物标记物和药物靶标。方法应用人食管鳞癌KYSE-450细胞系进行研究。首先,应用慢病毒转染法建立对照组细胞系sh-NC和敲低acc1的细胞系sh-acc1,应用垂直迁移实验（Transwell）方法检测迁移细胞数,应用蛋白免疫印迹技术实验的方法（western blot,WB）检测acc1和上皮-间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）相关性蛋白E-cadherin、Vimentin的表达水的平变化;其次,通过细胞转录组测序选择了敲低acc1蛋白后下游分子热休克蛋白27（heat shock protein 27,HSP27）,在敲低acc1的食管鳞癌KYSE-450细胞中,通过脂质体法转染人HSP27 si RNA建立对照及敲低HSP27的细胞系si-NC和si-HSP27,应用Transwell迁移实验检测细胞迁移能力,应用WB检测acc1、HSP27、E-cadherin,Vimentin表达水平;最后,应用荧光法检测胞内乙酰辅酶A水平（acetyl-Co A,Acetyl-Co A）,应用选择性乙酰基转移酶p300/CBP抑制剂C646抑制H3K9乙酰化水平,应用Transwell迁移实验检测细胞迁移能力,Western blot检测acc1、H3K9ac、HSP27和E-cadherin、Vimentin蛋白表达。结果Western blot证实在食管鳞癌KYSE-450细胞中敲低acc1,Transwell结果显示,较sh-NC组,sh-acc1组细胞迁移能力增加,Western blot结果显示,较sh-NC组,sh-acc1组细胞E-cadherin表达水平上调,Vimentin表达水平下调;细胞转录组测序数据显示,HSP27 m RNA胞内水平最高且差异表达（fold change=2.057）,通过转染人HSP27 si RNA,将HSP27敲低后,Transwell结果显示,较si-NC组,si-HSP27组细胞迁移能力降低,Western blot结果显示,si-NC组,si-HSP27组细胞E-cadherin表达水平上调,Vimentin表达水平下调;敲低acc1后胞内Acetyl-Co A水平上调,C646处理敲低acc1的KYSE-450细胞后,Transwell结果显示,较sh-NC组,sh-acc1组细胞迁移能力增加,Western blot结果显示,较sh-acc1+DMSO组,sh-acc1+C646组细胞迁移能力降低,Western blot结果显示,较sh-acc1+DMSO组,sh-acc1+C646组H3K9ac、HSP27、Vimentin表达水平下调,E-cadherin表达水平上调。结论敲低acc1后食管鳞癌KYSE-450细胞内乙酰辅酶A水平升高,上调组蛋白乙酰化修饰水平,增加HSP27蛋白表达,促进KYSE-450细胞的迁移。

关键词： acc1 HSP27 组蛋白乙酰化迁移食管鳞癌

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