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acta Biochimica et Biophysica Sinica 2002年第6期34卷 707-711页

作者：张萍杨波代小江庞义钟江苏德明上海200433 中山大学生物防治国家重点实验室复旦大学生命科学学院病毒学研究室复旦大学生命科学学院病毒学研究室广州510275

苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒 (Autographacalifornicamulticapsidnucleopolyhedrovirus,acmnpv)感染可诱导斜纹夜蛾 (Spodopteralitura)离体细胞Sl zsu 1发生典型的细胞凋亡。通过细胞松弛素 (cytochalasinD)和NH4Cl的抑制实验 ,分别排除病毒粒子结合细胞受体蛋白 ,和病毒在核内体运输过程启动细胞凋亡信号发生的可能性。RT PCR实验证实 ,病毒基因组进入了细胞核 ,极早期基因ie 1开始了转录 ;而DNA聚合酶抑制剂 (芽栖菌素 )的存在对病毒诱导的细胞凋亡程度与进程均没有明显的影响。这说明细胞凋亡的信号是先于病毒晚期复制事件启动的。单独转染acmnpv极早期基因ie 1可诱导斜纹夜蛾离体细胞系Sl zsu 1细胞发生部分凋亡 ,转染 2 4h后出现凋亡小体 ,4 8h达到高峰。提取转染细胞的总DNA电泳 ,可检测到典型的DNA梯形条带 (DNAladder)。另外 ,acmnpv的ie 1基因温度敏感突变株tsB82 1在非受纳温度感染细胞时 ,细胞不发生凋亡。这些结果暗示 ,在acmnpv感染诱导的Sl zsu 1细胞凋亡中 ,ie 1基因是一个凋亡信号的直接或间接诱导因子。

关键词： Spodoptera litura ac mnpv ie-1基因细胞凋亡

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杆状病毒acmnpv microRNA MR40 的鉴定及其靶基因初探

杆状病毒AcMNPV microRNA MR40 的鉴定及其靶基因初探

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作者：黎润彩中山大学

学位级别：硕士

杆状病毒是一类专门寄生于节肢动物的具有囊膜包被的环状双链DNA病毒,基因组大小为80-180kb。其病毒粒子呈杆状,宿主主要是鳞翅目昆虫幼虫。苜蓿丫纹夜蛾核型多角体病毒(Autographa californica multiple nucleopolyhedrovirus,acmnpv)... 详细信息

杆状病毒是一类专门寄生于节肢动物的具有囊膜包被的环状双链DNA病毒,基因组大小为80-180kb。其病毒粒子呈杆状,宿主主要是鳞翅目昆虫幼虫。苜蓿丫纹夜蛾核型多角体病毒(Autographa californica multiple nucleopolyhedrovirus,acmnpv)是杆状病毒的代表种,其基因组大小为134kbp,编码约151个开放阅读框(open reading frame,ORF),在所有杆状病毒中最早被测出全基因组序列,也是目前为止被研究得最为深入、应用最为广泛的杆状病毒。因此研究acmnpv microRNAs对认识杆状病毒的基因调节机制,以及杆状病毒与宿主细胞之间相互作用具有重要的参考价值。microRNAs(microRNAs)是一类长度约为19-24nt的内源性非编码小分子RNA,通过碱基序列匹配的方式,识别、结合靶基因mRNA的靶位点,抑制靶基因mRNA的翻译或促使其部分或完全降解,从而实现其对蛋白编码基因表达水平的转录后调控。microRNA已在多种真核生物中发现,参与细胞增殖、分化、代谢、凋亡等一系列重要生理过程的调控。越来越多的研究表明,病毒也能编码microRNA以调控自身基因或宿主基因的表达。本实验室通过生物信息学的方法预测出6条候选acmnpv microRNAs,其中一条的验证及靶基因和功能的研究已发表报道。本研究对另一条候选microRNA——MR40进行探究。首先通过Northern blot实验证实了microRNA MR40是一条真实存在的microRNA。采用Real Time PCR的方法对MR40在感染sf-9细胞6 h,12 h,24 h,48 h后不同时间点的表达情况进行了分析,实验表明,MR40在病毒感染6 h后开始表达,且表达量最大,6 h p.i.后逐渐降低。随后用mi Randa软件预测出MR40的5个候选靶基因,其中ac-lef6基因的分值最高。双荧光素酶报告实验结果显示,MR40对lef-6,lef11,ac-orf49,ac-orf63基因的表达有下调的作用。过表达MR40能够降低BV的感染力,而对病毒粒子多角体的形成没有明显的影响。

关键词：杆状病毒 ac mnpv microRNA MR40 靶基因

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