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加味丹参饮含药血清预处理对缺氧/复氧H9C2心肌细胞自噬相关基因atg5和Beclin1 mRNA表达的影响

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中国老年学杂志 2017年第8期37卷 1821-1824页

作者：饶春梅成细华任婷孙彦波彭霞黄政德湖南中医药大学湖南长沙410208

目的探讨加味丹参饮含药血清预处理对缺氧/复氧H9C2心肌细胞自噬及其相关基因atg5、Beclin1 mRNA表达的影响。方法将体外培养的H9C2心肌细胞随机分为空白血清组(CG)、缺氧/复氧组(HRG)、加味丹参饮含药血清组(JDG)、JDG+自噬抑制剂(3-MA... 详细信息

目的探讨加味丹参饮含药血清预处理对缺氧/复氧H9C2心肌细胞自噬及其相关基因atg5、Beclin1 mRNA表达的影响。方法将体外培养的H9C2心肌细胞随机分为空白血清组(CG)、缺氧/复氧组(HRG)、加味丹参饮含药血清组(JDG)、JDG+自噬抑制剂(3-MA)组(JIG)、JDG+自噬激动剂(RAPA)组(JAG)。倒置显微镜观察各组心肌细胞生长及形态变化;MTT比色法测定心肌细胞存活率;透射电子显微镜观察心肌细胞自噬体形态及数量;实时荧光定量PCR检测自噬相关基因atg5、Beclin1 mRNA表达。结果与CG比较,HRG镜下心肌细胞变性坏死程度增加,细胞存活率下降(Patg5、Beclin1 mRNA表达上调;与HRG相比,JDG及JAG镜下心肌细胞变性坏死程度减轻,细胞存活率显著升高(Patg5、Beclin1 mRNA表达进一步上调(P5)。结论加味丹参饮预处理通过上调自噬相关基因atg5、Beclin1 mRNA表达,增强细胞自噬,保护缺氧/复氧损伤H9C2心肌细胞。

关键词：加味丹参饮含药血清 H9C2心肌细胞缺氧/复氧损伤自噬 atg5 mRNA Beclin1 mRNA

自噬相关基因atg5沉默增加鼻咽癌裸鼠移植瘤的放射敏感性

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上海医学 2015年第2期38卷 151-154,I0005页

作者：卢小迪朱小东赵伟曲颂梁霞广西医科大学附属肿瘤医院放射治疗科广西南宁530021

目的通过构建自噬相关基因atg5沉默的人鼻咽癌低分化鳞癌细胞(CNE-2细胞)裸鼠移植瘤模型,研究自噬与鼻咽癌放射敏感性的关系。方法选取24只裸鼠,随机分入对照组、NC组和atg5组,每组8只。对照组裸鼠接种CNE-2细胞,NC组裸鼠接种转染阴性... 详细信息

目的通过构建自噬相关基因atg5沉默的人鼻咽癌低分化鳞癌细胞(CNE-2细胞)裸鼠移植瘤模型,研究自噬与鼻咽癌放射敏感性的关系。方法选取24只裸鼠,随机分入对照组、NC组和atg5组,每组8只。对照组裸鼠接种CNE-2细胞,NC组裸鼠接种转染阴性对照载体的CNE-2细胞,atg5组裸鼠接种稳定沉默atg5基因的CNE-2细胞。每组各取4只裸鼠给予10Gy射线照射,观察各组裸鼠移植瘤的生长情况,并应用Western印迹法检测自噬相关蛋白atg5和LC3Ⅱ的表达。结果自噬相关基因atg5沉默的人鼻咽癌CNE-2细胞裸鼠移植瘤模型构建成功,成瘤率为100%。atg5组的LC3Ⅱ、atg5蛋白相对表达量显著低于对照组和NC组(P值均5),atg5+10Gy组也均显著低于对照+10Gy组和NC+10Gy组(P值均5)。结论自噬相关基因atg5沉默可以增加鼻咽癌CNE-2细胞裸鼠移植瘤的放射敏感性,推断自噬与鼻咽癌放射敏感性呈负相关。

关键词：自噬 atg5 鼻咽癌放射敏感性裸鼠

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重庆医科大学学报 2016年第3期41卷 223-227页

作者：汪玉姮穆欣艺苏燕谢翼王应雄何俊琳刘学庆陈雪梅高茹菲重庆医科大学公共卫生与管理学院生殖生物学研究室重庆400016

目的：探讨自噬相关蛋白atg5及P62在邻苯二甲酸二乙基己酯（diethylhexyl phthalate,DEHP）引起新生鼠卵巢卵泡发育异常这一过程中的作用。方法：将健康6-8周龄清洁级成年雌性昆明鼠随机分为对照组（玉米油）和DEHP组,每组30只,均不做... 详细信息

目的：探讨自噬相关蛋白atg5及P62在邻苯二甲酸二乙基己酯（diethylhexyl phthalate,DEHP）引起新生鼠卵巢卵泡发育异常这一过程中的作用。方法：将健康6-8周龄清洁级成年雌性昆明鼠随机分为对照组（玉米油）和DEHP组,每组30只,均不做任何处理。成年雌鼠生产后的新生鼠分为对照组（玉米油）和DEHP组,采用腹腔注射方式,DEHP组按0.62 mg/kg浓度对新生鼠进行注射,对照组注射相同体积玉米油,从新生鼠出生第1天开始注射,每天1次,连续5 d,注射结束后收集新生鼠卵巢组织,HE染色观察卵巢各级卵泡的发育情况,q RT-PCR及Western blot检测卵泡发育标志分子GDF9及自噬相关蛋白atg5、P62的表达情况。结果：与对照组比较,HE染色结果显示DEHP组原始卵泡数量明显减少（P=0.005）,而初级卵泡数量无明显改变（P=0.555）;q RT-PCR结果显示DEHP组新生鼠卵巢组织中卵泡发育标志分子GDF9 m RNA表达明显降低（P=0.034）,而自噬标志分子atg5、P62 m RNA表达明显增加（P值分别为0.001、0.024）。Western blot结果显示DEHP组新生鼠卵巢中自噬相关蛋白atg5及P62均明显增加,差异有统计学意义（P值分别为0.008、0.001）。结论：在DEHP暴露引起新生鼠卵巢卵泡发育异常这一过程中,自噬标记蛋白atg5及P62可能发挥着重要作用。

关键词：邻苯二甲酸二乙基己酯自噬卵泡发育 atg5 P62

自噬相关基因atg5在感染和炎症性疾病中的作用

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生理科学进展 2020年第5期51卷 337-341页

作者：王雪松寿松涛姚咏明天津医科大学总医院急诊医学科天津300052 解放军总医院第四医学中心创伤研究中心北京100048

自噬对生物体维持细胞内环境具有至关重要的作用。目前已经证实自噬广泛参与多种疾病的发生发展过程,例如肿瘤、免疫性疾病以及炎症性疾病等,其与炎症性疾病相关性更加密切,也是近年来的研究热点。自噬相关基因(atgs)参与调节自噬的许... 详细信息

自噬对生物体维持细胞内环境具有至关重要的作用。目前已经证实自噬广泛参与多种疾病的发生发展过程,例如肿瘤、免疫性疾病以及炎症性疾病等,其与炎症性疾病相关性更加密切,也是近年来的研究热点。自噬相关基因(atgs)参与调节自噬的许多方面,其中atg5主要参与自噬小体的双层膜弯曲,对自噬的发生起决定性作用。本文主要概述近年研究发现atg5在炎症性疾病中的机制,并探讨自噬其作为炎症性疾病治疗方向的可能性,为炎症性疾病的诊治提供新的思路。

关键词：自噬炎症性疾病自噬相关基因 atg5

褐黄血蜱atg4和atg5的全长克隆与载体表达水平分析

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褐黄血蜱ATG4和ATG5的全长克隆与载体表达水平分析

作者：唐维仁湖南农业大学

学位级别：硕士

蜱是一类以吸血为生的寄生虫,对人和动物有着直接和间接的危害。因此,控蜱防病越来越来受到人们重视。目前,采用化学药物灭蜱仍然是控蜱的主要措施。但该措施具有造成环境污染、产生耐药虫株等诸多缺点。而探索新的控蜱策略显得尤为重... 详细信息

蜱是一类以吸血为生的寄生虫,对人和动物有着直接和间接的危害。因此,控蜱防病越来越来受到人们重视。目前,采用化学药物灭蜱仍然是控蜱的主要措施。但该措施具有造成环境污染、产生耐药虫株等诸多缺点。而探索新的控蜱策略显得尤为重要。自噬是一个正常的细胞所必需的、受自噬相关基因调控的生理过程。如今,许多学者已对长角血蜱、微小扇头蜱、肩突硬蜱和镰形扇头蜱的一些自噬相关基因及其表达水平进行了分析研究。本研究以褐黄血蜱为研究对象,通过RACE法克隆出Hfatg4和Hfatg5的全长序列,并采用RT-PCR法测定Hfatg4和Hfatg5在不同生长阶段、不同饱血状态和不同组织器官的表达水平,为开发广谱抗蜱疫苗提供依据。主要的研究内容、方法、结果如下:1.以蛋白质组学分析结果为线索,从褐黄血蜱卵巢转录组文库(PRJNA600997)搜到9个atg蛋白序列(atg3、atg4、atg5、atg6、atg7、atg8、atg13、atg16、atg101)。分析发现:不同atg蛋白的序列差异极大;但来自不同蜱的同种atg的序列高度相似。2.以RACE法扩增Cluster-24081.57394和Cluster-24081.6376的5’和3’端,获得Hfatg4和Hfatg5全长c DNA。分析显示:Hfatg4全长为1361bp,其中ORF框为1164bp,编码387aa;Hfatg5全长为1813 bp,ORF框大小813 bp,编码序列长270aa。3.以RT-PCR法测定atg4和Hfatg5在幼、若、成三阶段的表达水平均为:幼蜱>雌蜱>雄蜱>若蜱。在四种不同饱血状态下表达量为:Hfatg4在1/4饱血雌蜱表达量最高,Hfatg5在4/4饱血雌蜱表达量最高。Hfatg4在唾液腺、卵巢、中肠和体壳的表达情况是:饱血的高于半饱血的;Hfatg5在唾液腺、卵巢、中肠的表达情况是:饱血的高于半饱血的,在体壳的表达情况是,半饱血的高于饱血的。在胚胎发育前期Hfatg4上调,Hfatg5下调,后期基本稳定。研究结果表明:褐黄血蜱的自噬蛋白种类丰富,可为筛选蜱传病防治的候选分子提供物质基础。Hfatg4和Hfatg5基因在不同生长阶段以及不同饱血状态下不同的组织器官的差异表达。提示其可能参与蜱虫生长发育和吸血消化的过程,具有作为抗蜱疫苗候选分子潜质。

关键词：褐黄血蜱 atg4 atg5 RACE RT-PCR

上皮性卵巢癌组织中atg5、Beclin1、P53的表达及相关性研究

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上皮性卵巢癌组织中Atg5、Beclin1、P53的表达及相关性研究

作者：曹蒙郑州大学

学位级别：硕士

卵巢癌是我们在妇科日常的临床工作中最经常遇见的恶性肿瘤之一,发病率位于宫颈癌与子宫内膜癌之下,但由于缺乏有效的早期诊断方法且卵巢癌具有易播散转移、早期患者无明显症状等特点,发现时大多数已处于晚期,因此其病死率较高。对于卵... 详细信息

卵巢癌是我们在妇科日常的临床工作中最经常遇见的恶性肿瘤之一,发病率位于宫颈癌与子宫内膜癌之下,但由于缺乏有效的早期诊断方法且卵巢癌具有易播散转移、早期患者无明显症状等特点,发现时大多数已处于晚期,因此其病死率较高。对于卵巢癌的治疗方案在不断改进,肿瘤细胞减灭术加上铂类与紫杉醇联合化疗可改善卵巢癌患者疗效,但总的5年生存率仍徘徊在30%-40%。因此研究卵巢癌发生发展的相关机制、寻找新的有效治疗靶点,改善预后仍然是卵巢癌研究的重点和难点。自噬,是继凋亡后发现的细胞内物质代谢的一条重要途径,被称作“II型程序性细胞死亡”,目前许多研究发现自噬调控机制的失活与多项器官组织肿瘤的发生发展密切相关。atg5(Autophagy related gene 5,自噬相关基因5)是自噬过程中发挥重要作用的基因,在自噬体的形成过程中,须要atg5-atg12-atg16L结合系统和atg8-PE结合系统两个类泛素化蛋白质系统介导,atg5与atg12形成的共价复合物,定位于自噬体膜表面利于自噬体膜的伸张,促进自噬体的形成,是自噬体形成所必须的重要因素。Beclinl(BECNI)是一种与自噬有关的抑癌基因,有研究提示BECNI的等位基因的缺失导致自噬活性减弱从而促进肿瘤的发生。目前研究显示Beclin1基因编码的蛋白与Ⅲ型PI3K(phosphatidylinositol 3,kinase,磷脂-3-羟激酶)形成一个复合体,调控atg1、atg3等其他atg蛋白定位于自噬前体结构中,因而能够调控自噬的活性。基因是迄今发现与人类肿瘤相关性最高的基因之一,可以分为野生型p53(wildtypep53)和突变型p53(mutanttypep53)两种类型,wp53蛋白非常不稳定半衰期很短(20-60min),而且含量极低,因此我们平常所采用的免疫组化方法检测到的p53为突变型p53,是基因突变的产物。野生型p53通过编码转录因子蛋白、抑制细胞增殖、诱导凋亡及促进细胞分化成熟达到抑制肿瘤的作用。突变型p53除了干扰野生型p53的抑癌作用外,还与其他致癌基因相互作用促进肿瘤的发生发展。本研究采用免疫组织化学及rt-pcr技术检测atg5、beclin1及p53在上皮性卵巢癌、良性卵巢肿瘤组织及正常卵巢组织中的表达情况,分析其与卵巢癌患者临床病理因素的关系及三者表达的相关性,探讨三者在卵巢癌发生发展过程中的作用,为更深一步了解卵巢癌发生进展的分子机制、判断卵巢癌患者预后情况提供理论支持,更为指导临床治疗提供新的思路。目的检测自噬相关基因atg5、beclin1与p53在上皮性卵巢癌、良性卵巢肿瘤组织及正常卵巢组织的表达情况,探讨其与卵巢癌发生、发展的相关性及意义,为研究卵巢癌的发病机制及治疗提供新的方向。材料及方法1.研究对象:收集郑州大学第三附属医院和郑州大学第一附属医院2013年9月-2015年6月住院因各种原因行手术切除卵巢的84例标本,将其分为三组:恶性组:上皮性卵巢癌标本34例(浆液性卵巢癌18例、粘液性卵巢癌10例、其它类型卵巢癌6例);年龄22-78岁,平均年龄51岁;按国际妇产科(figo2000)临床分期及病理分级标准:i期5例;ii期9例;iii期9例;iv期11例;病理学分级:g19例;g211例;g314例;有淋巴转移18例、无淋巴转移16例。良性组:良性卵巢肿瘤组织25例。正常组:正常卵巢组织25例,正常卵巢组织取自因乳腺癌去势手术、子宫肌瘤、卵巢非瘤样囊肿等疾病行子宫及单/双附件切除者的卵巢。标本均取自第一次手术,经两位以上病理学老师双盲证实,术前都没有接受放疗、化疗。2.研究方法:应用免疫组织化学sp法和rt-pcr(实时定量-多聚集链反应半定量法realtime-polymerasechainreaction)技术检测25例正常卵巢组织、25例良性卵巢肿瘤组织及34例上皮性卵巢癌组织中atg5、beclin-1及p53蛋白和mrna的表达,并结合临床病理因素进行分析。3.统计学方法:应用spss18.0统计软件分析实验所得数据。计量资料用sx?表示,恶性组、良性组、正常组atg5、beclin1、p53mrna表达的定量比较采用单因素方差分析,两两比较采用lsd-t检验;免疫组织化学结果的定性资料分析采用?2检验;相关性分析采用pearson列联相关,检验水准为α=0.05。组间两两比较:检验水准α=α/比较次数=0.0167。结果***5在恶性组、良性组及正常组的mrna的相对表达量分别为:0.256、0.514、0.613;atg5蛋白在恶性组、良性组及正常组的阳性表达率分别为:20.6%(7/34)、60%(15/25)、88%(22/25)。atg5的mrna及蛋白阳性表达率从正常组、良性组、恶性组表达依次降低,

关键词：上皮性卵巢癌 atg5 Beclin1 P53 免疫组化 RT-PCR 自噬

Beclin1 mRNA和atg5 mRNA在多囊卵巢综合征患者冠丘颗粒细胞中的表达及其意义

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Beclin1 mRNA和Atg5 mRNA在多囊卵巢综合征患者冠丘颗粒细胞中的...

作者：张信贤河北医科大学

学位级别：硕士

目的:探究多囊卵巢综合征与非多囊卵巢综合征患者放射冠及卵丘颗粒细胞(冠丘颗粒细胞)中自噬相关基因Beclin1 m RNA和atg5 m RNA的表达是否存在差异及其意义,为研究多囊卵巢综合征(Polycystic Ovarian Syndrome,PCOS)发生、发展中潜在... 详细信息

目的:探究多囊卵巢综合征与非多囊卵巢综合征患者放射冠及卵丘颗粒细胞(冠丘颗粒细胞)中自噬相关基因Beclin1 m RNA和atg5 m RNA的表达是否存在差异及其意义,为研究多囊卵巢综合征(Polycystic Ovarian Syndrome,PCOS)发生、发展中潜在的分子机制提供新线索。方法:对照组入组标准:女方年龄5岁;月经规律;主要因男方因素要求行卵胞浆内单精子显微注射(Intracytoplasmic sperm injection,ICSI)助孕;无盆腔手术史;无子宫内膜异位症;且术前检查各项指标均无异常;无烟酒嗜好吸毒史。多囊卵巢综合征组入组标准(根据2003年鹿特丹标准):女方年龄5岁;主要因男方因素要求行ICSI助孕;无盆腔手术史;无子宫内膜异位症;且术前检查各项指标均无异常;无烟酒嗜好吸毒史;稀发排卵或无排卵;超声表现为双侧卵巢有12个以上直径为2-9mm卵泡;有或无高雄激素的临床表现和(或)高雄激素血症(除外其他高雄激素疾病)。按以上入组标准收取2016年3月1日至2016年6月30日于河北医科大学第二医院生殖医学科首次接受助孕且新鲜周期可移植的患者,多囊卵巢综合征患者组17例和对照组25例废弃的冠丘颗粒细胞及相应患者的临床资料:年龄,身体质量指数(Body Mass Index,BMI),促排方案,扳机日血清促黄体生成素(Luteotropic hormone,LH)、雌性激素(Estrogen,E2)、孕激素(Progesterone,P),获卵数,受精率,是否妊娠(移植后28天经阴道超声提示宫内孕,并探及胚芽及心管搏动视为妊娠)。用Real-Time PCR(Polymerase Chain Reaction)测定冠丘颗粒细胞中Beclin1 m RNA和atg5 m RNA的表达,根据荧光定量原始检测结果,按照2-△△ct相对定量计算公式计算出各样品的目的基因相对定量结果。用SPSS 17.0统计学分析软件进行数据处理。符合正态分布的计量资料用均数±标准差表示,不符合正态分布的计量资料用中位数(四分位数间距)表示;符合正态分布且方差齐的两样本比较用t检验,不符合正态分布的两样本比较用秩和检验;计数资料的比较用X2检验;两资料均为正态分布的相关采用Pearson相关,不满足条件者采用Spearman秩相关分析。以上均以P5为差异有统计学意义。结果:1 Beclin1 m RNA和atg5 m RNA在两组中均有表达。Beclin1 m RNA和atg5 m RNA在多囊卵巢综合征组的相对表达量分别是1.612±1.068和0.990(0.96),其中Beclin1 m RNA在多囊卵巢综合征组的表达量高于对照组,差异有统计学意义(P5)。2将两组患者的临床资料(BMI,扳机日血清LH、E2、P,获卵数,受精率,妊娠情况)进行分析。与对照组相比,多囊卵巢综合征组BMI值25.048±3.557高于对照组22.660(3.580),且有统计学差异(P5);扳机日血清LH在对照组和多囊卵巢综合征组的统计结果分别为1.910(1.140)、1.190(0.620),且在对照组表现出相对高水平,此差异有统计学意义(P5);两组妊娠率(妊娠例数/该组总例数)的比较,对照组为15/25,多囊卵巢综合征组为4/17,对照组妊娠率高于多囊卵巢综合征组,差异有统计学意义(P5)。扳机日血清E2、P,获卵数、受精率两组资料无统计学差异(P>0.05)。用Pearson相关分别分析Beclin1 m RNA的表达与多囊卵巢综合征组中BMI、血清P值、受精率之间的相关性;用Spearman秩相关分别分析Beclin1 m RNA的表达与多囊卵巢综合征组中血清LH值、血清E2值、获卵数之间的相关性。研究显示Beclin1 m RNA的表达与多囊卵巢综合征组中BMI、获卵数的相关系数分别为ρ=0.332、r=0.310,均有正相关关系,但是均无统计学意义(P>0.05);Beclin1 m RNA的表达与多囊卵巢综合征组中其他临床资料无相关性。比较19例妊娠者与23例非妊娠者Beclin1 m RNA和atg5 m RNA的表达情况,在非妊娠组中两基因表达活性较高,且Beclin1 m RNA在两组中表达差异有统计学意义(P5)。结论:1 Beclin1 m RNA和atg5 m RNA在两组中均有表达,提示细胞自噬普遍存在于冠丘颗粒细胞中。2 Beclin1 m RNA在两组之间的表达差异有统计学意义(P5),且在多囊卵巢综合征组的表达量高于对照组,可从一个方面提示多囊卵巢综合征组的自噬活性高于对照组,推测颗粒细胞可通过增强自噬活性,对抗和修复卵巢微环境变化

关键词：多囊卵巢综合征自噬颗粒细胞 Beclin1 atg5

COX-2抑制剂尼美舒利通过mTOR途径上调脂变肝细胞自噬基因atg5的表达

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COX-2抑制剂尼美舒利通过mTOR途径上调脂变肝细胞自噬基因Atg5的...

作者：易栋谦南华大学

学位级别：硕士

目的:研究COX-2抑制剂尼美舒利与脂变肝细胞自噬基因atg5及m TOR信号通路的关系,揭示COX-2抑制剂尼美舒利对脂变肝细胞自噬的作用机制。方法:(1)体外培养L-O2细胞,利用MTT法结合油红染色、TG含量检测筛选油酸对L-O2最为有效的作用浓度... 详细信息

目的:研究COX-2抑制剂尼美舒利与脂变肝细胞自噬基因atg5及m TOR信号通路的关系,揭示COX-2抑制剂尼美舒利对脂变肝细胞自噬的作用机制。方法:(1)体外培养L-O2细胞,利用MTT法结合油红染色、TG含量检测筛选油酸对L-O2最为有效的作用浓度及时间;利用MTT法筛选不同浓度尼美舒利及雷帕霉素对L-O2活性的影响,确定尼美舒利及雷帕霉素最为有效的作用浓度;(2)实验分为5组:正常对照组、脂变模型组、尼美舒利组、雷帕霉素组、尼美舒利+雷帕霉素组,运用Q-PCR法检测自噬基因atg5及m TOR信号通路m TOR基因的表达。结果:1、结合MTT、油红染色、TG含量结果确定油酸20μg/m L为诱导肝细胞脂变的最佳浓度,72h为最佳时间,尼美舒利200μg/m L为抑制COX-2最佳浓度,雷帕霉素30nmol/L为抑制m TOR信号通路最佳浓度。2、与尼美舒利组比较,尼美舒利+雷帕霉素组m TOR基因的表达量明显降低,且有统计学意义(P5)3、与脂变模型组比较,尼美舒利组m TOR基因的表达量明显降低,且有统计学意义(P5)。4、与脂变模型组比较,尼美舒利组自噬基因atg5表达量明显增加,且有统计学意义(P5)。5、与脂变模型组比较,雷帕霉素组自噬基因atg5的表达量明显增高,且有统计学意义(P5)结论:1、COX-2抑制剂尼美舒利可以上调非酒精性脂肪肝细胞自噬基因atg5的表达。2、COX-2抑制剂尼美舒利可以下调非酒精性脂肪肝细胞m TOR基因的表达。3、COX-2抑制剂尼美舒利上调非酒精性脂肪肝细胞自噬基因atg5的表达:可能通过下调m TOR信号通路m TOR基因的表达。

关键词：环氧合酶2 肝细胞自噬 mTOR atg5

自噬基因atg3和atg5在儿童急性白血病骨髓单个核细胞中的表达及临床意义

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自噬基因Atg3和Atg5在儿童急性白血病骨髓单个核细胞中的表达及临...

作者：敖苗郑州大学

学位级别：硕士

白血病是造血组织的恶性疾病,在儿童肿瘤中较为常见,其发病率呈逐年增高的趋势,随着治疗方案的进一步完善,大部分患儿尚能获得长期无病生存,但仍有较高的复发率或死亡率;目前的化疗只能有限的延缓白血病患儿的生命,很难从根本上扼制白... 详细信息

白血病是造血组织的恶性疾病,在儿童肿瘤中较为常见,其发病率呈逐年增高的趋势,随着治疗方案的进一步完善,大部分患儿尚能获得长期无病生存,但仍有较高的复发率或死亡率;目前的化疗只能有限的延缓白血病患儿的生命,很难从根本上扼制白血病细胞的复发与播散,因此有必要寻找更好的方法靶向治疗白血病,提高患儿总体的生存质量和生存率。自噬(autophagy)与肿瘤的关系是近几年来研究的热点,大量的研究发现,自噬对肿瘤有抑制及促进的双重作用,一方面,在肿瘤发生早期,自噬可通过增强自噬性细胞死亡,清除或修复受损的蛋白质或DNA,来抑制肿瘤的发生;另一方面,自噬在缺血缺氧的肿瘤细胞中,通过降解受损的细胞器及蛋白质为其存活提供能量,促进肿瘤细胞逃逸,利于肿瘤细胞的长期存活。在不同的肿瘤以及肿瘤发生的不同阶段,自噬的作用不同;因此,自噬与肿瘤关系密切,研究二者之间的联系为肿瘤的治疗提供了新的可行方向。目前,国内外对自噬与白血病关系的研究已逐渐深入,可通过药物诱导或抑制自噬来治疗白血病,有研究发现,在儿童ALL中自噬活性增高,通过抑制自噬来达到治疗白血病的目的,但自噬是如何诱发或抑制白血病细胞,其分子机制目前仍未明确。自噬发生过程严格受自噬相关基因(atg)调控。随着研究的深入,已经发现大量新的自噬基因,如beclin1、ambra1、atg3、atg5等,检测这些基因在肿瘤中的作用,可能成为治疗肿瘤和解决耐药的新策略。自噬体的形成是自噬的关键,依赖于两个泛素样结合系统,atg12-atg5共轭系统和atg3、atg4、atg7、atg8脂化系统。其中atg3、atg5在自噬体的形成中起关键作用。atg5在自噬过程中起调控作用,与保守蛋白atg12结合,形成atg12-atg5蛋白结合系统,利于自噬体膜的延伸。atg3在整个自噬过程起E2酶催化作用,促进atg8与磷脂酰肌醇结合,参与自噬体形成的各阶段。通过检测atg3及atg5在儿童AL细胞中的表达,来推断自噬在儿童AL白血病中的作用,为其治疗提供新的方向及策略。目的检测初治组、缓解组、复发组急性白血病(AL)患儿及对照组患儿骨髓单个核细胞(bone marrow mononuclear cell, BMMNC)的自噬率,同时检测自噬相关基因atg3、atg5的表达情况,探讨自噬与儿童AL发生发展、复发的关系,揭示自噬相关基因在儿童急性白血病细胞肿瘤逃逸机制中的作用,为儿童AL提供新的治疗靶点和治疗策略。方法收取2011年3月至2012年5月期间在郑州大学第一附属医院儿科血液病区确诊AL的患儿骨髓标本74例,初治组患儿37例(男21例,女16例),中位年龄6岁(2-12岁),经化疗完全缓解组28例(男16例,女12例),中位年龄5岁(2-10岁);难治复发组9例(男7例,女2例),中位年龄6岁(2-10岁)。对照组选取非肿瘤性疾病(如：免疫性血小板减少症、过敏性紫癜)患儿骨髓标本28例(男17例,女11例),中位年龄6岁(3-13岁)。各组患儿的年龄、性别、细胞免疫分型差异无统计学意义(P>0.05),资料具有可比性。用淋巴细胞分离液分离出骨髓单个核细胞,经单丹磺酰尸胺(MDC)染色后制备玻片,于Olympus EX-71荧光显微镜下观察细胞自噬现象;采用流式细胞仪检测细胞自噬率;采用RT-PCR技术检测自噬基因atg3mRNA和atg5mRNA的表达。结果 1.荧光显微镜下观察到初治组、难治复发组的细胞自噬现象较多见,而对照组、缓解组自噬现象较少见。流式细胞术检测结果发现,初治组、难治复发组的自噬率分别为(17.07±2.31)%、(15.37±1.59)%,明显高于对照组的(2.71±1.57)%,差异有统计学意义(P5),缓解自噬率为(3.48±1.94)%,与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05);难治复发组的自噬率显著高于缓解组,差异有统计学意义(P5)。 2. atg3mRNA和atg5mRNA在初治组和难治复发组的表达均高于对照组,差异均有统计学意义(P0.008);二者在难治复发组的表达值明显高于缓解组,差异具有统计学意义(Patg3mRNA、atg5mRNA的表达均上调,揭示atg3、atg5基因激活诱导的自噬活性增强可能与儿童白血病的发生、发展和耐药机制有关。 2.自噬活性增强可能促进白血病细胞逃逸,维持白血病细胞的长久存活。

关键词：急性白血病自噬相关基因 atg3 atg5 骨髓单个核细胞儿童