检索结果-南通市图书馆

MicroRNA-181a-5p促进乳腺上皮细胞MCF10A失巢凋亡的机理研究

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

MicroRNA-181a-5p促进乳腺上皮细胞MCF10A失巢凋亡的机理研究

作者：李渊成上海大学

学位级别：硕士

失巢凋亡(Anoikis)是正常上皮或内皮细胞失去与细胞外基质(extracellular matrix,ECM)黏附时发生的特异性死亡现象。肿瘤转移是引起癌患者死亡的主要因素。失巢凋亡作为肿瘤转移的早期屏障,在保持细胞内平衡和组织形成的过程中具有重要... 详细信息

失巢凋亡(Anoikis)是正常上皮或内皮细胞失去与细胞外基质(extracellular matrix,ECM)黏附时发生的特异性死亡现象。肿瘤转移是引起癌患者死亡的主要因素。失巢凋亡作为肿瘤转移的早期屏障,在保持细胞内平衡和组织形成的过程中具有重要作用。获得失巢凋亡的抗性则会促进肿瘤形成和肿瘤转移。MicroRNA(miRNA)是一类长约21-22核苷酸的单链非编码RNA,通过与靶基因3′UTR结合,在转录水平调控基因表达。近来的研究表明,miRNA在细胞自噬、失巢凋亡、肿瘤转移等途径中发挥着重要的调控作用。在本研究中我们检测了自噬相关的mi RNA在失巢凋亡过程中表达量的变化,发现miR-181a-5p,mi R-30b,miR-338-5p等表达量变化明显的miRNA。利用慢病毒包装系统获得了miR-181a-5p稳定表达的细胞株MCF10A-miR-181a-5p,发现过量表达miR-181a-5p可以弱化乳腺表皮细胞MCF10A对失巢凋亡的抗性。进一步的研究发现在失巢凋亡的过程中miR-181a-5p能够抑制细胞自噬。同时,我们发现miR-181a-5p可以直接靶向抑制自噬相关基因atg5的表达。在MCF10A-miR-181a-5p细胞中过表达atg5可以回复自噬效果,并弱化miR-181a-5p对失巢凋亡的促进作用。综上所述,本研究首次提出并证明miR-181a-5p通过直接靶向抑制atg5的表达抑制细胞自噬,从而促进失巢凋亡。我们建立的miRNA调节失巢凋亡新通路,将为肿瘤转移的临床治疗提供新的策略。

关键词：失巢凋亡自噬 miR-181a-5p atg5 癌症

PINK1通过磷酸化修饰作用调控线粒体自噬进程的研究

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

PINK1通过磷酸化修饰作用调控线粒体自噬进程的研究

作者：叶美娜福州大学

学位级别：硕士

帕金森症(Parkinson’s Disease,PD),是一种典型的神经系统变异性疾病。PD的主要病理特征为中脑多巴胺(dopamine,DA)能神经元出现变异退化,纹状体内神经递质,即多巴胺数量显著减少。帕金森症的发病机理至今仍不清晰,但近几年的多项研究... 详细信息

帕金森症(Parkinson’s Disease,PD),是一种典型的神经系统变异性疾病。PD的主要病理特征为中脑多巴胺(dopamine,DA)能神经元出现变异退化,纹状体内神经递质,即多巴胺数量显著减少。帕金森症的发病机理至今仍不清晰,但近几年的多项研究揭示,线粒体功能障碍及异常的形态在帕金森症发病机理上扮演重要角色。PINK1被证明是一种神经保护激酶,在各种帕金森症、阿尔茨海默症和亨廷顿等神经变性疾病模型中,具有一定的保护作用。PINK1蛋白通过维持线粒体的正常形态与膜电势,保证线粒体功能,以对抗细胞内的氧化应激反应,促进线粒体正常能量代谢,维护细胞正常生命活动。但其具体的调控机制尚不完全清楚。实验室前期通过串联亲和层析联用质谱的方法找到部分与PINK1相关的作用蛋白,其中包括一种线粒体蛋白TF1,并从生化及遗传学等实验证实PINK1与TF1存在相互作用。本课题首先利用特异性磷酸化抗体发现PINK1激酶可对TF1蛋白进行磷酸化修饰,并确定TF1的磷酸化位点。在细胞免疫荧光实验中发现过表达非磷酸化状态的TFI会使线粒体数量减少,进一步利用LC3标记证实非磷酸化状态的TF1可促进线粒体自噬。在atg5-KO细胞系中,通过免疫共沉淀实验发现TF1与自噬相关因子atg5单体存在相互作用。分级离心得到的线粒体组分中,非磷酸化状态的TF1结合的atg5单体量少,提示更多atg5单体可能形成atg5-atg12复合体于线粒体上参与自噬过程,即TF1介导的线粒体自噬依赖于atg5。模拟磷酸化状态的TF1结合较多的单体atg5,表明PINK1不仅通过PINK1/Parkin通路激活线粒体自噬途径,同时还可通过磷酸化TF1对线粒体自噬起负调控作用以维持细胞内线粒体稳态。另外,通过转基因果蝇品系的病理表型挽救实验,如翅膀损伤、爬行能力、飞行能力等,证实TF1不能挽救Parkin缺陷的果蝇表型,反之亦然,表明TF1与PINK1调控线粒体自噬不依赖于Parkin。因此,本课题揭示了PINK1与TF1调控线粒体自噬的新途径,为自噬小体形成的分子生物学机制提供了基本信息。同时,这些发现还可能为精准的基因定点靶向疗法调控细胞内线粒体的自噬水平提供新思路,为控制帕金森症等神经退行性疾病的发展提供更有效的理论依据。

关键词：帕金森症 PINK1 atg5 线粒体自噬

铁离子在大鼠大脑中诱导自噬性细胞死亡的研究

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

铁离子在大鼠大脑中诱导自噬性细胞死亡的研究

作者：鲍武乔浙江大学

学位级别：硕士

目的脑内铁离子聚积是包括出血性脑卒中在内的众多神经系统疾病重要的病理表现之一。有研究报道铁离子超载可通过凋亡与坏死机制导致脑损伤的发生与发展。本研究旨在探讨铁离子超载对神经细胞自噬的发生是否有促进作用。方法向普通SD大... 详细信息

目的脑内铁离子聚积是包括出血性脑卒中在内的众多神经系统疾病重要的病理表现之一。有研究报道铁离子超载可通过凋亡与坏死机制导致脑损伤的发生与发展。本研究旨在探讨铁离子超载对神经细胞自噬的发生是否有促进作用。方法向普通SD大鼠脑室内注射氯化亚铁溶液或者安慰剂盐水后,应用Western blot检测脑内自噬标记蛋白的表达水平,采用免疫荧光法辨识表达Beclin1的神经细胞类型。结果Western blot检测显示在向脑室内注射氯化亚铁溶剂的6小时后LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的比率、atg5及Beclin1的表达水平均显著升高,在24小时达到最高水平并持续3天时间;免疫荧光检测显示Beclin1主要表达在神经元及星形胶质细胞中。结论我们的结果显示提高脑内铁离子水平会导致神经细胞自噬性死亡。这个发现提示自噬性神经细胞程序性死亡可能是铁离子超载引发的神经系统疾病重要的发病机制。

关键词：自噬性细胞死亡铁离子微管相关性轻链蛋白-3 atg5 Beclin1

EFTU蛋白的磷酸化修饰与线粒体自噬机制的研究

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

EFTU蛋白的磷酸化修饰与线粒体自噬机制的研究

作者：高军福州大学

学位级别：硕士

帕金森病是一种神经退行性疾病,其与环境因素、遗传因素、年龄因素、线粒体异常等有一定的关联。帕金森病患者的黑质多巴胺能神经元出现进行性缺失,导致脑内多巴胺合成的减少,多巴胺表达下降会引起兴奋性和抑制性神经递质缺失平衡,从而... 详细信息

帕金森病是一种神经退行性疾病,其与环境因素、遗传因素、年龄因素、线粒体异常等有一定的关联。帕金森病患者的黑质多巴胺能神经元出现进行性缺失,导致脑内多巴胺合成的减少,多巴胺表达下降会引起兴奋性和抑制性神经递质缺失平衡,从而出现静止性震颤和步态障碍等病理表现。线粒体功能或结构的异常可导致多巴胺能神经元的进行性缺失。这主要是因为受损的线粒体长时间积累在多巴胺能神经元内,导致有毒物质的累积以及细胞内物质资源浪费,最终导致神经元细胞的凋亡坏死,而神经元的死亡则容易引发帕金森病。PINK1是一种神经保护激酶,在帕金森病等神经变性疾病模型中具有一定的保护作用。而且,PINK1蛋白对线粒体的膜电势、电子呼吸链、ROS水平和线粒体的正常代谢都有调控能力。EFTU在自噬和先天性免疫中具有重要的调控功能,能够招募atg5-atg12到线粒体上发挥作用。EFTU也能够抑制RLR介导的I型干扰素同时促进自噬。因此,PINK1与EFTU在线粒体自噬的调控中具有重要的意义。实验室在前期通过免疫共沉淀和质谱实验,确定了PINK1和EFTU存在互作关系,且EFTU的第4XX位氨基酸可以被PINK1特异性磷酸化。此外,PINK1与EFTU都含有定位到线粒体的信号序列,都参与调控线粒体自噬。过表达PINK1可以促进线粒体自噬,EFTU的第4XX位氨基酸被磷酸化后,能够抑制线粒体自噬。这也说明EFTU的磷酸化状态和亚细胞定位对线粒体自噬具有重要意义。本课题则致力于研究EFTU的亚细胞定位、PINK1与EFTU的联系、EFTU通过第4XX位氨基酸的磷酸化来调控线粒体自噬的机制。本课题首先通过western blot证明了在线粒体和细胞质中皆存在EFTU,并通过蛋白酶K实验证明线粒体外膜上存在EFTU。然后通过免疫共沉淀实验验证了PINK1与EFTU的互作,且发现PINK1和EFTU的互作场所是在线粒体上。我们也通过果蝇表型实验证明EFTU与PINK1存在遗传相互作用,且EFTU位于PINK1的下游。然后我们通过免疫共沉淀实验发现EFTU的第4XX位氨基酸被磷酸化后会抑制p-S4XX-EFTU-atg5-atg12蛋白复合物的形成。我们通过m Keima表征线粒体自噬,使用流式细胞术证明atg5位于EFTU的下游,且有调控线粒体自噬的作用。说明EFTU通过自身的第4XX位氨基酸处于磷酸化状态来抑制p-S4XX-EFTU-atg5-atg12蛋白复合物的形成,进而抑制线粒体自噬。此后,我们通过数学建模分析线粒体自噬相关蛋白的动力学参数,认为依赖于PINK1的磷酸化反应p-S65-Ubiquitin和p-S4XX-EFTU,他们共同参与了PINK1对线粒体自噬的调节,而且p-S4XX-EFTU可以增强PINK1调控线粒体自噬的抗干扰能力。因此,本课题完善了EFTU蛋白的磷酸化修饰对线粒体自噬的调控机制,加深了人们对线粒体自噬的认知,为帕金森病的治疗提供一种思路。

关键词： PINK1 EFTU atg5 磷酸化线粒体自噬

MiR-665-3p介导的自噬调节在真菌性角膜炎中的作用机制研究

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

MiR-665-3p介导的自噬调节在真菌性角膜炎中的作用机制研究

作者：郭群钦福建医科大学

学位级别：硕士

目的探讨miR-665-3p通过靶向atg5介导的自噬调节在小鼠真菌性角膜炎中的作用。方法1.筛选目标miRNA并初步证实自噬通量作用:首先,建立小鼠茄病镰刀菌性角膜炎模型,采用基因芯片分析感染角膜组织差异表达的miR-665-3p,并用q PCR验证;多... 详细信息

目的探讨miR-665-3p通过靶向atg5介导的自噬调节在小鼠真菌性角膜炎中的作用。方法1.筛选目标miRNA并初步证实自噬通量作用:首先,建立小鼠茄病镰刀菌性角膜炎模型,采用基因芯片分析感染角膜组织差异表达的miR-665-3p,并用q PCR验证;多种生物信息学软件预测miR-665-3p的靶基因,并选择atg5为目标基因;Western blot和双荧光素酶法在体外培养的小鼠原代角膜基质细胞中验证miR-665-3p对atg5的调控作用;透射电子显微镜观察感染角膜组织中自噬小体形态;Western blot检测自噬相关蛋白LC3B、P62的表达。2.细胞实验:体外培养小鼠原代角膜基质细胞,并分为7组:感染组(control组)、自噬抑制组(CQ组)、自噬激活组1(Rapa1组)、自噬激活组2(Rapa2组)、miRNA对照组(miR-NTC组)、miR-665-3p antagomir组(Ant-665组)和miR-665-3p agomir(miR-665组)。分别用50u M氯喹处理CQ组12h,100nM雷帕霉素处理Rapa1组2h,1uM雷帕霉素处理Rapa2组2h,100nM miR-NTC处理miR-NTC组48h,100nM miR-665-3p antagomir处理ant-665组48h,miR-665-3p agomir处理miR-665组48h。各组加药并按上述时间处理后,均用茄病镰刀菌感染6小时(MOI=3),提取细胞蛋白,Western blot检测自噬相关蛋白LC3B、P62蛋白的表达情况;自噬双标腺病毒共定位法检测细胞中LC3B及溶酶体;荧光显微镜观察细胞中自噬蛋白atg5、P62的表达情况。3.动物实验:建立小鼠茄病镰刀菌性角膜炎模型,分为6组:感染组(control组)、自噬抑制组(CQ组)、自噬激活组(Rapa组)、miRNA对照组(miR-NTC组)、miR-665-3p antagomir组(Ant-665组)和miR-665-3p agomir(miR-665组)。后5组分别予结膜下注射7ul的50u M CQ、1uM Rapa、100nM miR-NTC、100nM miR-665-3p antagomir和100nM miR-665-3p agomir,1h后用改良表层镜法建立小鼠茄病镰刀菌角膜炎模型。分别于感染后1、3、5、7天裂隙灯显微镜下观察角膜病变特点并对溃疡面积、浑浊程度、溃疡形态进行临床评分;HE染色观察角膜组织的病理变化;自噬双标病毒共定位检测LC3B及溶酶体;免疫荧光显微镜观察角膜组织自噬蛋白atg5、P62的表达情况;Western blot检测角膜自噬相关蛋白LC3B、P62、atg5,炎症相关蛋白IL-1β和凋亡相关蛋白Caspase3的表达情况。结果1.基因芯片结果提示miR-665-3p在真菌性角膜炎中上调表达,并经过qPCR验证(P5)。多种生物信息学软件提示atg5是miR-665-3p的作用靶点之一。Western blot验证miR-665-3P对atg5具有负调控作用(P5);荧光素酶报告系统证实miR-665-3p与atg5的3’UTR存在直接的结合位点(P5天表达明显减少,而p62蛋白表达均增多(P均5),且在第5天最为明显,提示真菌性角膜炎中自噬通量受损。2.细胞实验Western blot结果发现:与对照组相比,CQ组LC3B-Ⅱ/Ⅰ、P62蛋白明显增多;Rapa组和ant-665组的LC3B-Ⅱ/Ⅰ蛋白增多,而P62蛋白减少;miR-665组的LC3B-Ⅱ/Ⅰ蛋白减少,而P62蛋白增多(P均5)。自噬双标病毒共定位检测结果提示:CQ组、miR-665组细胞里黄色或红色斑点较对照组减少,而Rapa组、Ant-665组较细胞里黄色或红色斑点对照组增多。免疫荧光的结果发现:atg5蛋白在CQ组、miR-665组表达的荧光强度减弱,在Rapa组、Ant-665组表达荧光强度增强;P62蛋白在CQ组、miR-665组表达的荧光强度增强,而在Rapa组、Ant-665组表达的荧光强度减弱。3.动物实验裂隙灯观察发现:与对照组相比,CQ、Rapa组和Ant-665组的角膜水肿程度降低、混浊程度、混浊面积均减少,临床评分降低;而miR-665组病理损害较重,水肿程度、混浊程度、混浊面积较对照组加重,临床评分较高(n=5)。HE染色结果显示:与对照组相比,CQ组、Rapa组角膜组织完整性尚有缺损,基质层空泡数较少,浸润的炎性细胞较少;Ant-665组角

关键词：真菌性角膜炎 miR-665-3p 自噬 atg5 凋亡炎症

太平洋鳕发育早期干扰素通路相关基因的克隆分析及表达规律的研究

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

太平洋鳕发育早期干扰素通路相关基因的克隆分析及表达规律的研究

作者：孙航大连海洋大学

学位级别：硕士

太平洋鳕(Gadus macrocephalus)是我国重要的海水经济鱼类。随着海洋渔业的快速发展,太平洋鳕野生资源不断下降,人工繁育亟待展开。本实验室太平洋鳕人工育苗技术日渐成熟,并在育苗过程中发现太平洋鳕在仔鱼期出现大批量死亡现象。为探... 详细信息

太平洋鳕(Gadus macrocephalus)是我国重要的海水经济鱼类。随着海洋渔业的快速发展,太平洋鳕野生资源不断下降,人工繁育亟待展开。本实验室太平洋鳕人工育苗技术日渐成熟,并在育苗过程中发现太平洋鳕在仔鱼期出现大批量死亡现象。为探究这一现象,本实验对干扰素系统的信号通路进行初步研究,并通过对干扰素系统相关基因TLR3,MDA5,IPS1,IRF3,IRF7和atg5基因的转录水平的测定来衡量干扰素系统在太平洋鳕早期发育中的表达规律,为太平洋鳕人工育苗早期的疾病防治提供理论基础。本实验根据实验室已获得的转录组信息对TLR3,MDA5,IPS1,IRF3,IRF7和atg5基因设计扩增引物,以太平洋鳕成鱼的肾组织为实验材料,通过基因克隆测序,获得目的基因片段。为探究干扰素系统在太平洋鳕早期发育中的作用特点,本实验建立了绝对荧光定量PCR检测方法,分别对6个目的基因在太平洋鳕各组织和太平洋鳕仔鱼期中的表达规律进行了检测。此外,本实验利用Poly(I:C)分别对太平洋鳕2日龄和12日龄仔鱼进行浸泡,分别对目的基因进行诱导表达,并对相同基因的表达差异进行了分析。实验结果如下:太平洋鳕TLR3基因cDNA序列长3322bp,不包含完整阅读框(Open reading frame,ORF),序列中最长阅读框编码377个氨基酸。通过绝对荧光定量PCR检测太平洋鳕各组织中TLR3的表达水平结果显示,标准曲线的回归方程以及回归系数为:y=-3.1475x+36.756 R2=0.9962;TLR3基因在太平洋鳕的各组织中均出现了表达,其中肝中TLR3的的表达量显著高于其他组织,在心脏和胸腺中表达量其次,在鳃,脑和肌肉中表达量较少。太平洋鳕MDA5基因cDNA序列长2604bp,不包含完整阅读框,序列中最长阅读框编码844个氨基酸。通过绝对荧光定量PCR检测太平洋鳕各组织中MDA5的表达水平结果显示,标准曲线的回归方程以及回归系数为:y=-3.2154x+36.154 R2=0.9949;MDA5基因在太平洋鳕的各组织中均出现了表达,其中肾中MDA5的表达量显著高于其他组织,在心脏,肠和脾中表达量其次,在脑和肌肉中表达量较少。太平洋鳕atg5序列长895bp,含有完整的开放阅读框,编码275个氨基酸,其编码的蛋白质分子量约为32.2kDA。经核苷酸序列比对发现,太平洋鳕atg5与半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)、尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)atg5的相似性均高达87.27%。利用太平洋鳕与其它物种atg5核苷酸序列构建系统进化树,结果表明atg5系统进化树反映的亲缘关系基本符合传统分类学观点,氨基酸序列分析结果显示了atg5具有较高的保守性。通过绝对荧光定量PCR检测太平洋鳕各组织中atg5的表达水平结果显示,标准曲线的回归方程以及回归系数为:y=-2.8646X+31.989 R2=0.998;atg5基因的转录在太平洋鳕的各组织中都有表达,肝、脾和肾表达量高于其他组织。太平洋鳕IPS1基因cDNA序列长1539bp,不包含完整阅读框,序列中最长阅读框编码161个氨基酸。通过绝对荧光定量PCR检测太平洋鳕各组织中IPS1的表达水平结果显示,标准曲线的回归方程以及回归系数为:y=-3.1287x+34.206 R2=0.9868其中肾和肝中IPS1的的表达量显著高于其他组织,在胸腺,肌肉中表达量其次,在脑和鳃中表达量较少,其中在脑中的表达量最少。太平洋鳕IRF3序列长1878bp,包含完整开放阅读框,长1377bp,编码459个氨基酸,其编码的蛋白质分子量约为51kDa。经氨基酸序列比对发现太平洋鳕IRF3的氨基酸序列包括1个含有5个保守色氨酸残基的DNA结合域(DNA binding domain,DBD)和1个保守的C端IRF关联域(IRF association domain,IAD);系统进化树分析表明太平洋鳕IRF3与其他物种的IRF3亲缘关系较近。通过绝对荧光定量PCR检测太平洋鳕各组织中IRF3的表达水平结果显示,标准曲线的回归方程以及回归系数为:y=-3.3449X+41.001 R2=0.9896;各组织绝对定量结果显示性腺,肝和胸腺表达量高于其他组织。太平洋鳕IRF7序列长为2032bp,包括一个38bp的5'UTR和一个668bp的3'UTR,含有完整ORF,长度为1323bp,编码440个氨基酸,分子量约为50118Da,序列中含有一个polyA加尾信号(AATAAA),5个mRNA不稳定信号(ATTTA);经氨基酸序列比对发现太平洋鳕IRF7 N端有个保守的DNA结合域,包含4个保守的色氨酸(W)重复,C端具有一个较保守的IRF关联域,羧基末端具有丝氨酸富含域(

关键词：太平洋鳕干扰素 TLR3 MDA5 atg5 IPS1 IRF3 IRF7

Perifosine的抗白血病作用及慢性粒细胞白血病细胞株对其耐药机制的体外研究

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

Perifosine的抗白血病作用及慢性粒细胞白血病细胞株对其耐药机制...

作者：刘燕燕浙江大学

学位级别：硕士

第一部分：研究PRF对AML和CML细胞株的生长抑制及诱导凋亡的情况目的：研究和比较PRF对AML和CML细胞株的生长抑制作用及诱导凋亡的情况。从而为进一步研究PRF的抗白血病作用机制打下基础。方法：MTT法检测PRF对白血病细胞株的生长抑制作... 详细信息

第一部分：研究PRF对AML和CML细胞株的生长抑制及诱导凋亡的情况目的：研究和比较PRF对AML和CML细胞株的生长抑制作用及诱导凋亡的情况。从而为进一步研究PRF的抗白血病作用机制打下基础。方法：MTT法检测PRF对白血病细胞株的生长抑制作用,AV/PI流式细胞检测术检测PRF诱导白血病细胞株的凋亡情况,Hoechst染色法观察PRF诱导白血病细胞凋亡的形态学改变,Western-blot法检测PRF作用后caspase-3、caspase-9和PARP蛋白的表达变化,Western-blot法检测白血病细胞株相关基因蛋白的表达情况。结果：(1)0～20gmol/L的PRF作用CML细胞株K562、K562/G以及AML细胞株Kasumi-1、HL-6024小时后,IC50分别是121.74、311.3、11.08、11.14μmol/L,作用48小时后IC50分别是56.28、141.75、4.24、3.62μmol/L。表明AML细胞株对PRF敏感,而CML细胞株则不敏感。(2)10μmol/L的PRF分别作用K562、K562/G、Kasumi-1和HL-60细胞株24小时后,AV/PI流式术检测显示凋亡率分别为8.23%、7.37%、26.72%、25.80%,表明PRF可显著诱导AML细胞株凋亡,而对CML细胞株不敏感。(3)10μmol/L的PRF作用24H后,AML细胞株Kasumi-1和HL-60的细胞核内可见明显的凋亡小体,而CML细胞株K562和K562/G中则未见凋亡小体,从形态学上证明PRF可以诱导AML细胞发生凋亡,但基本不诱导CML细胞凋亡。(4)PRF诱导AML细胞凋亡时,caspase-3、caspase-9、PARP蛋白激活,而CML细胞株的caspase-3、caspase-9、PARP则未见激活。(5)AML细胞株Kasumi-1和HL-60在经PRF作用24小时后,AKT和P-AKT的表达有明显的下调,JNK和P-JNK可见明显的上调,而对PRF不敏感的CML细胞株K562和K562/G中这些蛋白的表达水平无明显变化。第二部分：研究CML细胞株对PRF耐药的机制以及自噬在其中的作用目的：进一步研究CML细胞株K562和K562/G对PRF耐药的潜在机制,以及自噬在其中的作用。从而为CML的治疗提供更为有效的药物打下基础。方法：通过吖啶橙染色、透射电镜和LC3-GFP-K562荧光改变检测PRF诱导CML细胞K562产生自噬,Western-blot法检测PRF作用K562细胞后LC3及自噬相关蛋白的表达变化,MTT法检测PRF联合CQ对CML细胞株的生长抑制作用。结果：(1)PRF可以诱导CML细胞株发生自噬,且呈浓度依赖性。(2)PRF诱导CML细胞发生的自噬伴随atg-5的上调,却未见Beclin-1和atg-7的上调,为非Beclin-1依赖性的。(3)PRF诱导CML细胞产生的自噬被抑制后,可以增强PRF对CML细胞的杀伤作用,表明该种自噬起保护性作用。结论：PRF可以下调Akt,显著抑制AML细胞株Kasumi-1和HL-60生长并诱导凋亡,但对CML细胞株K562和K562/G则无此作用。PRF对CML耐药可能与其诱导CML细胞产生保护性自噬有关,该种自噬为非Beclin-1依赖性的,抑制自噬可以增强PRF对CML细胞的杀伤作用,诱导凋亡。

关键词：白血病 Perifosine 细胞自噬凋亡 beclin1 atg5

“三补一活”方干预兔激素性股骨头坏死作用机制研究

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

时珍国医国药 2021年第10期32卷 2369-2373页

作者：杜晨阳李慧英汪利合孟东方马博河南中医药大学河南郑州450000 河南中医药大学第一附属医院河南郑州450000

目的进一步阐释激素性股骨头坏死(Steroid-induced avascular necrosis of femoral head,SANFH)的分子机制,系统探究"三补一活"方治疗SANFH的物质基础和生物效应靶点,为临床防治SANFH提供新的治疗方法。方法采用改进的马血清加甲强龙的... 详细信息

目的进一步阐释激素性股骨头坏死(Steroid-induced avascular necrosis of femoral head,SANFH)的分子机制,系统探究"三补一活"方治疗SANFH的物质基础和生物效应靶点,为临床防治SANFH提供新的治疗方法。方法采用改进的马血清加甲强龙的方法诱导制备兔SANFH动物模型,将实验随机分成3组:正常组、模型组、实验组,每组6只,给予实验组"三补一活"中药方剂灌胃,给予正常组和模型组实验动物以生理盐水灌胃,1次/天,连续灌胃6周后,针对三组实验动物分别在光镜下进行组织形态学观察即空骨陷窝率计数,采用western blot法检测细胞自噬相关蛋白Beclin-1、atg5及凋亡相关蛋白caspase-3的表达水平,及PCR定量检测上述分子mRNA含量。结果光镜下空骨陷窝率计数,实验组和模型组较正常组均明显上升(P5),但实验组低于模型组(P5)。经灌胃6周后western blot检测三组兔股骨头组织中自噬相关蛋白Beclin-1和atg5表达水平情况,实验组与正常组水平相当且明显高于模型组(P5),凋亡相关蛋白caspase-3表达水平情况,实验组与正常组水平相当且明显低于模型组(P5)。经灌胃6周后PCR定量检测三组兔股骨头组织中Beclin-1和atg5mRNA表达量,实验组与正常组水平相当且明显高于模型组(P5),caspase-3mRNA表达量,实验组与正常组水平相当且明显低于模型组(P5)。结论"三补一活"方能显著提高兔激素性股骨头坏死模型中自噬相关蛋白Beclin-1和atg5的表达,降低凋亡相关蛋白caspase-3表达,降低空骨陷窝率,对维持细胞稳态,延缓骨坏死进程起到了积极作用,为临床采用"三补一活"方治疗激素性股骨头坏死提供一定依据。

关键词：三补一活方激素性股骨头坏死细胞自噬 Beclin-1 atg5 Caspase-3

抑制自噬增强睾丸癌I-10/DDP细胞对顺铂的敏感性

维普期刊数据库

同方期刊数据库评论

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

抑制自噬增强睾丸癌I-10/DDP细胞对顺铂的敏感性

作者：武丹丹蚌埠医学院

学位级别：硕士

目的:1.观察自噬水平在睾丸癌细胞对顺铂耐药中的变化。2.明确自噬在睾丸癌细胞对顺铂耐药产生中的作用。方法:*** blotting法检测细胞内LC3、p62、atg5、atg7蛋白表达。***-GFP-LC3B质粒转染检测细胞自噬水平。3.透射电子显微镜观察自... 详细信息

目的:1.观察自噬水平在睾丸癌细胞对顺铂耐药中的变化。2.明确自噬在睾丸癌细胞对顺铂耐药产生中的作用。方法:*** blotting法检测细胞内LC3、p62、atg5、atg7蛋白表达。***-GFP-LC3B质粒转染检测细胞自噬水平。3.透射电子显微镜观察自噬体。***法检测细胞存活。***单染法检测细胞死亡。6.集落克隆法检测细胞克隆形成能力。***转染对自噬相关基因atg5、atg7进行干扰,G418筛选培养基建立稳转株。8.统计学方法:采用SPSS 16.0统计软件进行相关实验数据资料的分析,实验结果以均数±标准差(Mean±SD)表示,两组之间均数比较采用两样本t检验,两组以上均数比较采用单因素方差(One-way ANOVA)分析和SNK-q检验。统计图表采用GraphPad Prism 5.0绘制,P5差异具有统计学意义。结果:1.使用顺铂处理后,耐顺铂睾丸癌细胞I-10/DDP中自噬水平增加,而在亲代睾丸癌细胞I-10中自噬水平无明显变化。Western blotting结果显示相比于亲代睾丸癌细胞I-10,耐顺铂睾丸癌细胞I-10/DDP经顺铂处理后,LC3-II蛋白表达量明显增加(P5);透射电子显微镜观察发现相比于亲代睾丸癌细胞I-10,耐顺铂睾丸癌细胞I-10/DDP经顺铂处理后自噬体的数量明显增加;激光共聚焦显微镜观察发现经mCherry-GFP-LC3B瞬时转染的耐顺铂睾丸癌细胞I-10/DDP在顺铂处理后可见细胞内自噬体和自噬溶酶体的数量均增加。2.氯喹抑制顺铂介导的自噬作用透射电子显微镜观察发现氯喹与顺铂合用组细胞中的自噬体的数量较单用顺铂组细胞明显增加;激光共聚焦显微镜观察发现氯喹与顺铂合用组细胞内自噬体和自噬溶酶体的数量较单用顺铂组细胞中增加。3.氯喹增强耐顺铂睾丸癌细胞I-10/DDP对顺铂的敏感性。MTT结果表明与单用顺铂组相比,氯喹与顺铂合用组的细胞存活率降低(P5);PI单染法结果表明与单用顺铂组相比,氯喹与顺铂合用组的细胞死亡率增加(P5)。4.沉默atg5和atg7可特异性抑制顺铂介导的自噬作用透射电子显微镜观察发现沉默atg5和atg7后应用顺铂组细胞中的自噬体的数量较单用顺铂组细胞明显降低;激光共聚焦显微镜观察发现沉默atg5和atg7后应用顺铂组细胞内自噬体和自噬溶酶体的数量较单用顺铂组细胞中降低。5.沉默atg5和atg7增强耐顺铂睾丸癌细胞I-10/DDP对顺铂的敏感性。MTT结果表明与单用顺铂组相比,沉默atg5和atg7后应用顺铂组的细胞存活率降低(Patg5和atg7后应用顺铂组的细胞死亡率增加(Patg5和atg7后应用顺铂组的细胞克隆形成率降低(P<0.01,P<0.01)。结论:1.顺铂可以诱导耐顺铂睾丸癌细胞I-10/DDP发生自噬。2.抑制自噬能增强耐顺铂睾丸癌细胞I-10/DDP对顺铂的敏感性。

关键词：顺铂睾丸癌氯喹 atg5 atg7 自噬