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果树学报 2023年第6期40卷 1215-1225页

作者：陈荣鑫钟远闻孙鲁龙王辉王伯臣贾荣俭赵政阳西北农林科技大学园艺学院陕西杨凌712100

【目的】近年来,苹果病毒病的发生日趋严重,对产业的健康发展造成了严重影响,但是其在苹果新品种瑞阳、瑞雪、瑞香红上的发病状况尚不明确。【方法】在2021—2022年采用RT-PCR方法对白水地区198份新品种样品进行病毒病检测,并对感染苹... 详细信息

【目的】近年来,苹果病毒病的发生日趋严重,对产业的健康发展造成了严重影响,但是其在苹果新品种瑞阳、瑞雪、瑞香红上的发病状况尚不明确。【方法】在2021—2022年采用RT-PCR方法对白水地区198份新品种样品进行病毒病检测,并对感染苹果锈果类病毒(apple scar skin viroid,assvd)植株的果实症状进行了调查和基因克隆、测序。【结果】检测结果显示白水地区新品种潜隐性病毒的感病率显著高于非潜隐性病毒,其中苹果褪绿叶斑病毒(apple chlorotic leaf spot virus,ACLSV)的检出率最高,达到了91.72%,其次是苹果茎沟病毒(apple stem grooving virus,ASGV)和苹果茎痘病毒(apple stem pitting virus,ASPV),检出率分别达到了77.16%、37.13%,苹果坏死花叶病毒(apple necrotic mosaic virus,ApNMV)的检出率为30.31%,苹果锈果类病毒和苹果凹果类病毒(apple dimple fruit viroid,ADFVd)的检出率接近10%;通过对新品种携带病毒类型分析发现,新品种瑞阳整体的检出率低于瑞雪和瑞香红,且73.17%植株病毒复合侵染种类以2~3种为主,而瑞雪、瑞香红57.55%、69.39%的植株以3~4种为主;3个新品种感染苹果锈果类病毒后,瑞阳主要表现为“花脸型”,瑞雪、瑞香红表现为“花脸型”“果面凹凸不平”2种症状;通过对3个新品种assvd分离物进行测序、分析,发现新品种瑞阳分离物与伊朗苹果分离物(KM213397.1)同属一个分支,新品种瑞雪、瑞香红分离物序列与韩国、加拿大苹果分离物(AF421195.1、X71599.1)同属一个分支。【结论】检测结果表明,白水地区3个新品种苹果褪绿叶斑病毒、苹果茎沟病毒感病率较高,非潜隐性病毒的感病率相对较低,且新品种瑞阳对病毒的敏感性较低;新品种瑞雪、瑞香红苹果锈果类病毒分离物属于同一分支,而它们拥有共同的亲本(克氏粉红×秦富1号),这从寄主亲缘关系远近的角度表明assvd侵染存在寄主特异性。

关键词：苹果新品种病毒病 RT-PCR检测 assvd

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苹果花脸症状相关基因差异表达的分析

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果树学报 2023年第6期40卷 1109-1120页

作者：郑朋飞张学勇孙骞王楚堃杨钰莹芮麟宋来庆张振鲁由春香山东农业大学园艺科学与工程学院·作物生物学国家重点实验室山东泰安271018 烟台市农业科学研究院山东烟台265500 广饶县林业发展服务中心山东广饶257399

【目的】苹果花脸病主要由苹果锈果类病毒(apple scar skin viroid,assvd)引起,是一种严重危害苹果产量和果实品质的病害,通过分析苹果花脸症状相关基因表达,探索花脸症状形成的潜在机制。【方法】削取无症状且无assvd侵染的果皮和表现... 详细信息

【目的】苹果花脸病主要由苹果锈果类病毒(apple scar skin viroid,assvd)引起,是一种严重危害苹果产量和果实品质的病害,通过分析苹果花脸症状相关基因表达,探索花脸症状形成的潜在机制。【方法】削取无症状且无assvd侵染的果皮和表现花脸症状的弘前富士苹果果皮,提取果皮总RNA,通过高通量测序并进行转录组数据分析。【结果】利用RT-PCR方法从表现花脸症状的苹果果皮中得到两条assvd序列,其基因组长度分别为331 nt和330 nt,与已公布的assvd山东烟台苹果分离物SDYT-1(MW302328.1)和SDYT-3(MW315909.1)完全一致。转录组测序结果表明,与无症状果皮相比,表现花脸症状的果皮中共有差异表达基因6938个,其中有3331个基因显著上调,3607个基因显著下调。通过差异表达基因功能注释分析,表明这些差异基因参与到植物激素(茉莉酸、水杨酸和生长素)合成和信号转导、苯丙烷生物合成等代谢途径。此外,转录组数据分析发现与植物防御反应相关转录因子的编码基因,如MdWRKY18-like、MdWRKY71、MdNAC29、MdWRKY70等在表现花脸症状的苹果果皮中显著上调,而MdERF61等则显著下调。利用实时荧光定量PCR验证了显著差异表达基因变化情况。【结论】转录组分析结果表明,苹果花脸病果实与正常果实差异表达基因主要参与植物激素信号转导和苯丙烷合成途径。此外,植物抗病相关转录因子及防御相关激素信号可能参与调控苹果花脸病的抗病反应。

关键词：苹果 assvd 转录组分析差异表达基因转录因子

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几种苹果实生砧木种子传毒潜力检测

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果树学报 2014年第6期31卷 1164-1169页

作者：梁成林赵玲玲宋来庆姜中武烟台市农业科学研究院果树分院山东烟台265500 烟台大学农学院山东烟台264005

【目的】明确不同苹果实生砧木种子传毒的情况及各病毒的种传潜力。【方法】以八棱海棠、沙果、平邑甜茶、楸子和山定子5种苹果砧木母株和实生苗为试材,运用RT-PCR技术对母株和实生苗的苹果茎沟病毒(Apple stem grooving virus,ASGV)、... 详细信息

【目的】明确不同苹果实生砧木种子传毒的情况及各病毒的种传潜力。【方法】以八棱海棠、沙果、平邑甜茶、楸子和山定子5种苹果砧木母株和实生苗为试材,运用RT-PCR技术对母株和实生苗的苹果茎沟病毒(Apple stem grooving virus,ASGV)、苹果褪绿叶斑病毒(Apple chlorotic leaf spot virus,ACLSV)、苹果茎痘病毒(Apple stem pitting virus,ASPV)和苹果锈果类病毒(Apple scar skin viroid,assvd)的携带情况进行检测。【结果】八棱海棠母株携带ASGV、ACLSV和assvd,侵染率均为100%,其实生苗带ASGV和assvd,侵染率分别为3.3%和26.7%;沙果母株同时被4种病毒侵染,其中ASGV侵染率为40%,ACLSV为80%,ASPV和assvd侵染率均为100%,实生苗仅携带assvd,携带率为100%;平邑甜茶母株被ACLSV、ASPV和assvd复合侵染,实生苗被assvd侵染,侵染率均为100%;楸子母株同时携带ASGV、ACLSV和assvd,3种病毒携带率分别为60%、100%、100%,实生苗携带ACLSV、ASPV和assvd,侵染率分别为43.3%、70%、23.3%;山定子母株同时携带ACLSV和assvd,带毒率均达100%,实生苗仅检出assvd,带毒率为30%。【结论】苹果锈果类病毒可以通过种子传毒,而苹果褪绿叶斑病毒和苹果茎痘病毒不通过种子进行传播。

关键词：苹果实生砧木种子传毒 RT-PCR ASGV ACLSV ASPV assvd

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桃树类病毒发生率调查及PLMVd基因多样性分析

桃树类病毒发生率调查及PLMVd基因多样性分析

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作者：范宏艳吉林农业大学

学位级别：硕士

桃潜隐花叶类病毒(Peach latent mosaic viroid, PLMVd)是桃种苗中带有的一类危险性有害病原物,同时也是国内外桃树上发生率较高的类病毒之一,该类病毒在许多国家已被确定为最危险的系统性侵染病原之一,但该类病毒在我国研究相对较少。... 详细信息

桃潜隐花叶类病毒(Peach latent mosaic viroid, PLMVd)是桃种苗中带有的一类危险性有害病原物,同时也是国内外桃树上发生率较高的类病毒之一,该类病毒在许多国家已被确定为最危险的系统性侵染病原之一,但该类病毒在我国研究相对较少。苹果锈果类病毒(Apple scar skin viroid,assvd)在苹果树和梨树中均有发生,但还未在桃树中检测到。本文旨在通过分子生物学方法,从桃树上分离并鉴定PLMVd、assvd,对所得到的PLMVd分离物进行序列测定并利用生物学软件进行序列比对,分析其种群结构及遗传多样性,为研究类病毒的起源、进化及致病机制打下基础,同时为类病毒病害的传播流行与病害防治提供理论依据。(1)本研究对采自郑州国家桃种质资源圃内的486份桃样品中PLMVd和assvd的带毒情况进行调查。经斑点杂交检测后,结果表明：355个桃样品感染PLMVd,带毒率为73%。由此看出,PLMVd在桃资源圃内发生率很高。但在所采集样品中未检测到苹果锈果类病毒,其感染率为0。(2)为进一步了解和分析PLMVd的种群结构,从采自中国郑州桃种质资源圃、北京市农林科学院以及北京出入境检验检疫局的样品中各取10份经检测带有PLMVd的桃叶样品,通过RT-PCR方法扩增全序列并完成序列分析。结果表明：本文中所获得的400种PLMVd全序列中包含49条主流序列和351条单克隆序列。与GenBank中已登录的PLMVd参考序列(登录号NC003636)相比,44条主流序列相似性为93.81%-95.86%;而另外发现5条主流序列变异较大,相似性均低于90%,分别为82.65%、84.12%、85.04%、85.88%和85.92%。通过种群结构分析显示,在北京、日本和郑州地区桃分离物中分别获得13条、14条及22条PLMVd主流序列,并且主流序列所占百分比最多不超12%。分析二级结构,发现碱基变化主要体现在P1,P6,P7,P9,P10和P11这些茎-环上,还发现了在P6,P7,P10和P11茎-环上存在碱基共变现象。用MEGA软件分别构建了三个地区分离物的PLMVd不同主流序列系统进化树,通过国内外这三个地区分离物中所有主流序列的序列比较分析,所有主流序列分布在三个组群中,且来自国内北京和郑州,国外日本的所有主流序列变体明显的聚类在一起,另外同源性低于90%的五条主流序列与突尼斯变体独立划分一组。从遗传进化关系看,国内外分离物所得到这些序列变体在地里位置上不存在明显差异性。

关键词：桃树 PLMVd assvd 检测序列分析

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