检索结果-南通市图书馆

胶质瘤中arp2/3蛋白表达和其在胶质瘤细胞运动中作用的研究

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

胶质瘤中Arp2/3蛋白表达和其在胶质瘤细胞运动中作用的研究

作者：刘志峰天津医科大学

学位级别：硕士

胶质瘤是颅内最常见的脑肿瘤,而胶质母细胞瘤（glioblastoma multiforme, GBM）是最常见及恶性级别最高的原发恶性脑肿瘤,占到所有颅内肿瘤的12%-15%,星形细胞肿瘤的60%-75%。尽管手术切除及术后辅助同步放化疗方案应用于胶质母细胞瘤... 详细信息

胶质瘤是颅内最常见的脑肿瘤,而胶质母细胞瘤（glioblastoma multiforme, GBM）是最常见及恶性级别最高的原发恶性脑肿瘤,占到所有颅内肿瘤的12%-15%,星形细胞肿瘤的60%-75%。尽管手术切除及术后辅助同步放化疗方案应用于胶质母细胞瘤患者取得了一定效果,但胶质母细胞瘤患者的两年生存率仅约为25%。恶性胶质瘤广泛浸润到相邻脑组织以及容易复发的趋势使其难以根治。即使肿瘤在影像学全切之后,80%以上的胶质母细胞瘤会在原发肿瘤边缘2cm以内复发。因此,寻找更好的治疗方法,如：有效控制疾病进展和复发极为必要,其中方法之一就是控制胶质瘤细胞的侵袭和迁移。肌动蛋白相关蛋白2/3复合物（actin-related protein2/3complex, arp2/3complex）作为小Rho GTP酶-WAVE下游的一个重要效应器可以直接调节肌动蛋白的聚合作用,在细胞运动过程中起到不可或缺的作用。当细胞受到外界刺激（如：趋化因子）时,arp2/3接受Rho GTP酶-WAVE信号转导绑定到原有肌动蛋白丝侧面调节新的肌动蛋白丝形成,进而形成片状伪足,为细胞运动提供必要的动力支持。本课题主要研究arp2/3在胶质瘤中的表达和对胶质瘤细胞片状伪足形成的影响以及细胞运动的调节,分为以下两个部分： ***2/3在人胶质瘤中的表达情况。为探讨arp2/3在胶质瘤中的表达情况及arp2/3与胶质瘤恶性程度的相关性,我们收集了50例不同病理级别的胶质瘤标本以及8例颞叶癫痫手术患者的对照脑组织。本课题在实验过程中,首先采用免疫荧光技术检测不同标本中arp2/3的表达情况,结果显示在对照脑组织当中arp2/3荧光表达呈阴性或弱阳性,而在胶质瘤组织标本中荧光表达强度明显增强并且其荧光强度随着肿瘤级别的增高而增强（F=83.538,P=0.000）。 Western blot方法用于进一步半定量评估各组织中arp2/3的表达情况,结果显示对照脑组织当中arp2/3表达量为15.69±1.04%（n=8）,WHO Ⅰ级胶质瘤标本中表达量为31.17±4.30%（n=8）,WHO Ⅱ级胶质瘤标本中arp2/3表达量为40.51±2.12%（n=14）,WHO Ⅲ级胶质瘤标本中arp2/3表达量为48.68±2.69%（n=10）,WHO Ⅳ级胶质瘤标本中arp2/3表达量为55.42±3.45%（n=18）。数据分析显示胶质瘤中arp2/3表达量高于对照脑组织当中arp2/3表达量（P＜0.05）,并且arp2/3表达量与胶质瘤的病理级别呈正相关（r=0.686,P=0.02）。 ***2/3在胶质瘤细胞片状伪足形成及细胞迁移和侵袭中的作用。①我们通过arp2/3特异性抑制剂下调arp2/3活性,探讨arp2/3在胶质瘤细胞片状伪足形成及细胞迁移和侵袭中的作用。细胞免疫荧光技术和划痕实验观察片状伪足在细胞中的形成情况及其与细胞运动方向的关系;MTT实验检测arp2/3特异性抑制剂对胶质瘤细胞活性的影响;细胞免疫荧光技术观察arp2/3在胶质瘤细胞中的定位情况;倒置相差显微镜下观察抑制arp2/3活性后胶质瘤细胞形态的变化;体外划痕实验和transwell侵袭实验检测细胞的迁移和侵袭能力。结果：胶质瘤细胞的片状伪足朝向划痕区域;arp2/3定位到细胞的片状伪足,抑制arp2/3活性后细胞片状伪足逐渐变小甚至消失;划痕实验和transwell侵袭实验检测发现抑制arp2/3活性后细胞运动能力明显下降（P＜0.05）。②由于抑制药的特异性毕竟有限,我们通过RNA干扰技术沉默U251胶质瘤细胞中arp2/3的表达,进一步验证arp2/3在胶质瘤细胞片状伪足形成及细胞迁移和侵袭中的作用。逆转录PCR和western blot验证干扰效果;细胞免疫荧光实验、划痕实验和transwell侵袭实验检测敲低arp2/3后对胶质瘤细胞片状伪足形成和细胞运动的影响。结果：敲低arp2/3后,U251胶质瘤细胞中未见明显片状伪足形成,并且细胞的运动能力明显下降（P＜0.05）。结论： ***2/3在对照脑组织中无表达或弱表达,在不同级别胶质瘤中均有表达,并且表达水平与胶质瘤的病理级别呈正相关。 2.胶质瘤细胞的片状伪足朝向划痕区域;胶质瘤细胞中arp2/3与肌动蛋白共定位到胞质;通过特异性抑制剂下调arp2/3活性或RNA干扰技术敲低arp2/3表达后可以明显抑制胶质瘤细胞片状伪足的形成,并减弱其迁移和侵袭能力。

关键词：胶质瘤迁移侵袭片状伪足 arp2/3

丹芍颗粒Ⅲ号对紫癜性肾炎大鼠肾组织nephrin、p-nephrin及arp2/3的影响

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

丹芍颗粒Ⅲ号对紫癜性肾炎大鼠肾组织nephrin、p-nephrin及arp2/3...

作者：秦艳巧南京中医药大学

学位级别：硕士

过敏性紫癜性肾炎主要表现为不同程度的血尿、蛋白尿、皮肤紫癜、管型尿和水肿,已经发展成为儿童时期最为普遍的继发性肾病。中医古籍中没有记载“过敏性紫癜性肾炎”这个病名,主要将其归属于中医学“血证”、“斑疹”、“尿血”、“水... 详细信息

过敏性紫癜性肾炎主要表现为不同程度的血尿、蛋白尿、皮肤紫癜、管型尿和水肿,已经发展成为儿童时期最为普遍的继发性肾病。中医古籍中没有记载“过敏性紫癜性肾炎”这个病名,主要将其归属于中医学“血证”、“斑疹”、“尿血”、“水肿”等范畴。近些年,过敏性紫癜性肾炎患儿人数逐年增加,已成为严重危害儿童健康的主要肾脏病之一。到现在为止,现代医学以抗凝、免疫抑制剂、激素等治疗方法为主,但这些治疗方法存在毒副反应较大,疗效不理想等问题。中医药以临床辨证论治及整体观念为指导,以凉血化瘀为大法制成丹芍颗粒Ⅲ号,在广泛治疗HSPN方面取得了良好的疗效。近些年发现足细胞相关蛋白nephrin、 p-nephrin、arp2/3与HSPN蛋白尿相关,而丹芍颗粒Ⅲ号对其作用机制尚未研究。目的观察丹芍颗粒Ⅲ号对足细胞相关蛋白nephrin、p-nephrin、arp2/3表达的影响,以探讨丹芍颗粒Ⅲ号疗效的作用机制。方法1选取健康雄性SD大鼠25只,体重在(120-150)g范围内,喂养适应7天,造模前尿蛋白定性试验两次检测均呈现阴性。将实验大鼠按照随机数字表分为空白组、模型组和丹芍颗粒高剂量组、丹芍颗粒中剂量组、丹芍颗粒低剂量组,每组各5只。运用BSA+SEB方法造就IgA肾病模型,再以干姜水灌胃造就瘀热模型,从而复合为HSPN动物模型。2造模成功后丹芍颗粒低、中、高剂量组给予中药复方丹芍颗粒Ⅲ号治疗,处死大鼠后取肾组织,送病理观察;western blot法检测各组大鼠肾组织中nephrin、p-nephrin、 arp2/3蛋白水平。3处理数据用spss19.0软件。结果1光镜下模型组肾组织存在明显异常改变;模型组大鼠肾组织病变比丹芍颗粒Ⅲ号各组加重。2蛋白印迹技术示：与空白组相比,模型组nephrin、p-nephrin、arp2/3蛋白灰度值比率均显著下降(P(0.01);与模型组比,丹芍各组nephrin、p-nephrin、arp2/3蛋白灰度值比率均升高,差异有统计学意义(Parp2/3复合体的表达从而发挥对大鼠紫癜性肾炎的治疗作用。

关键词：丹芍颗粒Ⅲ号紫癜性肾炎 nephrin p-nephrin arp2/3

皮层蛋白和arp2/3蛋白复合物在文昌鱼原肠期胚胎表达图式的分析

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

海洋科学集刊 2004年第1期 142-147页

作者：喻丹张培军中国科学院海洋研究所青岛266071

脊椎动物胚胎发育过程中,经卵裂和囊胚期积累了一定数量的细胞后,在原肠期开始出现明显的细胞运动,囊胚表层的细胞通过一个称为组织者(Spemann and Mongald’sorganizer)的结构进入胚胎的内部,经过内陷、内卷、汇聚、延伸等一系列细胞运... 详细信息

脊椎动物胚胎发育过程中,经卵裂和囊胚期积累了一定数量的细胞后,在原肠期开始出现明显的细胞运动,囊胚表层的细胞通过一个称为组织者(Spemann and Mongald’sorganizer)的结构进入胚胎的内部,经过内陷、内卷、汇聚、延伸等一系列细胞运动,按照既定的方向迁移到达目的地,参与构建各个胚层,这一过程称为形态发生运动。形态发生运动是脊椎动物胚胎发育必不可少的重要步骤,在这一过程中,特定的单个细胞或成群细胞的定向迁移,对于三个胚层(外胚层、中胚层、内胚层),以及由这些胚层所产生的特定组织器官的发育与分化,具有决定性影响。

关键词： arp2/3 胚胎发育囊胚期形态发生运动细胞运动蛋白复合物胚孔肌动蛋白原肠作用原肠胚期

耐药性癫痫患者外周血Cdc42、N-WASP、arp2/3基因及其蛋白表达的研究

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

癫痫杂志 2020年第1期6卷 7-11页

作者：郭灿收王书新臧若思魏进朱春丽陈小奇黄建敏江汉大学附属医院神经内科武汉430015 右江民族医学院附属医院神经内科百色533000

目的通过检测Cdc42、N-WASP、arp2/3基因及其蛋白在耐药性癫痫(Drug-resistant epilepsy,DRE)患者外周血中的表达,探讨其预测耐药性癫痫发生的价值。方法收集2016年10月—2018年10月于右江民族医学院附属医院神经内科诊治的特发性癫痫患... 详细信息

目的通过检测Cdc42、N-WASP、arp2/3基因及其蛋白在耐药性癫痫(Drug-resistant epilepsy,DRE)患者外周血中的表达,探讨其预测耐药性癫痫发生的价值。方法收集2016年10月—2018年10月于右江民族医学院附属医院神经内科诊治的特发性癫痫患者72例,根据DRE的核心定义,分为DRE组(32例)和抗癫痫药物(AEDs)控制良好组(40例),另选取健康体检者32名作为正常对照组。采用实时荧光定量PCR(real-time RT-PCR,RT-PCR)及蛋白质免疫印迹(Western blot,WB)方法分别检测DRE组、AEDs控制良好组及正常对照组外周血中Cdc42、N-WASP、arp2/3基因及其蛋白表达量,分析3组人群之间的差异。结果与AEDs控制良好组及正常组相比,DRE组Cdc42、N-WASP、arp2/3基因及其蛋白表达水平显著升高(P均2、N-WASP、arp2/3基因及其蛋白表达水平显著升高(P均2、NWASP、arp2/3基因及其蛋白在DRE患者外周血中表达量显著升高,提示Cdc42、N-WASP、arp2/3及其蛋白可能参与DRE的发生、发展,其高表达可作为外周血生物学指标,对预测DRE的发生具有一定的预警价值。

关键词：耐药性癫痫 Cdc42 N-WASP arp2/3 外周血

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

家蚕arp2／3复合物功能研究

家蚕Arp2／3复合物功能研究

Cortactin mediated morphogenic cell movements during zebrafish (Danio rerio) gastrulation

华东六省一市生物化学与分子生物学学会2006年学术交流会

作者：倪忠张耀洲浙江理工大学生命科学学院生物化学研究所

arp2／3复合物是一种在肌动蛋白单体聚合成丝的信号通路中起关键作用的多亚基复合物,在很多物种中都有发现,且功能结构域比较保守。它通常由7个亚基紧密相联而成的,分别是arp2、arp3、 arpC1、arpC2、arpC3(P21)、arpC4、arpC5。该复合... 详细信息

arp2／3复合物是一种在肌动蛋白单体聚合成丝的信号通路中起关键作用的多亚基复合物,在很多物种中都有发现,且功能结构域比较保守。它通常由7个亚基紧密相联而成的,分别是arp2、arp3、 arpC1、arpC2、arpC3(P21)、arpC4、arpC5。该复合物在一些作用因子如WASp家族蛋白作用下得到活化,从而在母丝的一侧起始了肌动蛋白新丝的聚合。而在家蚕体内,功能尚不明确,从家蚕cDNA 中克隆到此复合物P21亚基的OIF基因并构建成重组表达质粒pGEX-4T-1／p21,将此重组表达质粒转化大肠杆菌BL21后用IPTG诱导,成功表达了一种分子量约为38kD融合蛋白,约占菌体总蛋白的 35％。此融合蛋白经纯化分离后免疫新西兰大白兔以制备多克隆抗体。用Western印迹法检测兔的抗血清,结果显示该多克隆抗体有较好的针对arp2／3复合物中p21亚基的专一性并且效价达到52000。通过细胞定位实验得到如下结果,arp2／3复合物主要分布在细胞质,越靠近细胞膜,其浓度越高。以P21的cDNA为模板,利用dsRNA体外合成试剂盒,合成针对p21的dsRNA后,对家蚕细胞Bm5 进行RNAi实验。MTT实验确实了RNAi的dsRNA的最佳使用量为2μ,得出结果为1．96μg／ml。 RNAi实验,脂质体转染。以PBS和随机RNA为阴性对照组,48h后,每隔24小时处理样品,PI染色后,流式细胞仪测凋亡,数据显示,经RNA干扰后细胞在96h时出现明显的凋亡现象,首先细胞停止分裂,且不同程度地出现死亡,经流活式细胞仪检测,经干扰72小时后,细胞产生凋亡。说明P21基因所表达的蛋白对家蚕细胞的生长是必不可少的。

关键词：家蚕 arp2/3 细胞定位基因沉默表达抗体

来源： cnki会议评论

在线全文

cnki会议

学校读者我要写书评

暂无评论

Science China(Life Sciences) 2005年第6期48卷 601-607页

作者： YU Dan1,2, ZHANG Peijun1 & ZHAN Xi3 1. Experimental Marine Biology Lab, Institute of Oceanology, Chinese Academy of Sciences, Qingdao 266071, China 2. Graduate School of the Chinese Academy of Sciences, Beijing 100039, China 3. Greenebaum Cancer Center, Department of Cancer Center, University of Maryland School of Medicine, MD 20855, USA Experimental Marine Biology Lab Institute of Oceanology Chinese Academy of Sciences Qingdao 266071 China Graduate School of the Chinese Academy of Sciences Beijing 100039 China Experimental Marine Biology Lab Institute of Oceanology Chinese Academy of Sciences Qingdao 266071 China Greenebaum Cancer Center Department of Cancer Center University of Maryland School of Medicine MD 20855 USA

Cell migration is essential to direct embryonic cells to specific sites at which their developmental fates are ultimately determined. However, the mechanism by which cell motility is regulated in embryonic development is largely unknown. Cortactin, a filamentous actin binding protein, is an activator of arp2/3 complex in the nucleation of actin cytoskeleton at the cell leading edge and acts directly on the machinery of cell motility. To determine whether cortactin and arp2/3 mediated actin assembly plays a role in the morphogenic cell movements during the early development of zebrafish, we initiated a study of cortactin expression in zebrafish embryos at gastrulating stages when massive cell migrations occur. Western blot analysis using a cortactin specific monoclonal antibody demonstrated that cortactin protein is abundantly present in em-bryos at the most early developmental stages. Immunostaining of whole-mounted embryo showed that cortactin immunoreactivity was associated with the embryonic shield, predominantly at the dorsal side of the embryos during gastrulation. In addition, cortactin was detected in the convergent cells of the epiblast and hypoblast, and later in the central nervous system. Im-munofluorescent staining with cortactin and arp3 antibodies also revealed that cortactin and arp2/3 complex colocalized at the periphery and many patches associated with the cell-to-cell junction in motile embryonic cells. Therefore, our data suggest that cortactin and arp2/3 medi-ated actin polymerization is implicated in the cell movement during gastrulation and perhaps the development of the central neural system as well.

关键词： cortactin, arp2/3 complex, zebrafish, cell movements, morphogenesis, gastrulation, neurulation.

E-选择素调控白细胞跨内皮转运中内皮细胞骨架重组动力学

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

医用生物力学 2019年第A1期34卷 143-144页

作者：黄丹丹龚一心章燕龙勉中国科学院力学研究所生物力学与生物工程中心/工程化构建与力学生物学北京市重点实验室中国科学院微重力重点实验室北京100190 中国科学院大学工程科学学院北京100049

目的以血管稳态及重建为切入点,研究E-选择素(E-selectin)通过调节微丝骨架网络的动态重组来调控内皮细胞低阻抗区的形成,从而导致白细胞跨膜迁移增强的信号调控网络和关键分子机制。方法采用Lifeact_GFP转染人脐静脉内皮细胞(Human Umb... 详细信息

目的以血管稳态及重建为切入点,研究E-选择素(E-selectin)通过调节微丝骨架网络的动态重组来调控内皮细胞低阻抗区的形成,从而导致白细胞跨膜迁移增强的信号调控网络和关键分子机制。方法采用Lifeact_GFP转染人脐静脉内皮细胞(Human Umbilical Vein Endothelial Cells,HUVEC),可使内皮细胞纤维状肌动蛋白(F-actin)可视化,并实时动态观察白细胞跨内皮迁移过程内皮细胞骨架重组动力学。采用荧光漂白后恢复技术(Fluorescence Recovery After Photobleaching,FRAP)量化E-选择素及其配体交联下,内皮细胞不同区域的细胞骨架重组能力。采用RNA干扰技术降低HUVEC上E-selectin表达,并利用AFM检测E-selectin干扰前后HUVEC各区域硬度分布,结合小分子抑制剂考察E-selectin调控细胞骨架重组从而介导白细胞跨内皮迁移的分子机制。结果白细胞跨内皮迁移过程,内皮细胞上可形成孔洞、且白细胞倾向于旁细胞迁移。FRAP结果表明内皮细胞胞体上微丝蛋白恢复速度更快,E-selectin与其配体交联可改变微丝蛋白骨架重组能力。干扰HUVEC内E-selectin表达可降低胞间连接的硬度,并增加胞间间隙的面积,有利于白细胞跨内皮迁移。采用Cyto D破坏细胞骨架、CK666抑制arp2/3活性均可增加白细胞在对照组内皮细胞上的迁移,但是干扰E-selectin后,这些小分子抑制剂的作用消失。结论 E-选择素通过arp2/3调节内皮细胞骨架的重组,降低胞间连接的硬度,增加胞间间隙的面积,并最终在胞间连接处形成低阻抗区,进而促进白细胞迁移。

关键词： E-选择素 arp2/3 细胞骨架重组低阻抗区白细胞迁移

小分子化合物抑制肿瘤血管新生的性质与机理研究

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

小分子化合物抑制肿瘤血管新生的性质与机理研究

作者：宋雅娟华东师范大学

学位级别：硕士

血管新生是指从已有的血管中产生新血管的过程,其通过向固体瘤供给营养和氧气及带走肿瘤床上的废物在肿瘤生长中发挥着重要的作用。血管新生在肿瘤的侵袭和转移中也起着必要的作用。血管新生信号通路是通过一系列血管生成促进因子和血... 详细信息

血管新生是指从已有的血管中产生新血管的过程,其通过向固体瘤供给营养和氧气及带走肿瘤床上的废物在肿瘤生长中发挥着重要的作用。血管新生在肿瘤的侵袭和转移中也起着必要的作用。血管新生信号通路是通过一系列血管生成促进因子和血管生成抑制因子共同调节的并最终导致新血管的形成。在这一过程中,VEGF起着主要作用,VEGF发挥其生物学功能主要是通过VEGFR-2介导的信号通路。因此,VEGF与其受体信号系统是抗肿瘤治疗的一个有效靶标。活化的VEGFR-2能够激活一系列下游信号转导蛋白,包括ERK、AKT、FAK、 Src家族激酶。丝氨酸/苏氨酸激酶AKT/PKB信号通路能够调节内皮细胞的迁移、增殖和凋亡。同时,ERK1/2活性也调控不同的细胞活性包括内皮细胞的增殖、分化、迁移和细胞死亡。我们利用我国丰富的中草药资源筛选中草药单体及对天然小分子化合物的有效改造,通过体外、体内模型筛选能够显著抑制肿瘤血管新生的小分子化合物,并深入研究其作用的分子机制。已有的研究表明,松萝酸具有抗炎症、抗增殖和抗肿瘤的活性,但是松萝酸能否抑制血管新生及其在内皮细胞中的相关机制并没有报道。在此,我们证实了在体内实验中,松萝酸能够显著抑制鸡胚尿囊膜血.管新生和VEGF诱导的小鼠角膜血管新生。在裸鼠荷瘤实验模型中,松萝酸能够抑制Bcap-37乳腺癌肿瘤生长同时对小鼠的体重没有影响。运用血.管染色试剂盒检测发现松萝酸对肿瘤生长的抑制作用与抑制肿瘤内的血管新生密切相关。与此同时,我们实验表明松萝酸不仅能显著抑制内皮细胞的增殖、迁移和成管,也能导致内皮细胞形态发生变化,诱导内皮细胞凋亡。对细胞信号分子进行蛋白免疫印迹试验,结果显示松萝酸阻断了内皮细胞中VEGFR-2介导的ERK1/2和AKT/P70S6K的信号通路。这些实验首次证明了松萝酸在肿瘤血管新生中的生物功能和分子机制中的作用。细胞的运动在细胞的增殖和迁移中起着非常重要的作用,微丝参与了细胞形态的维持及运动等多种重要的细胞过程。肌动蛋白相关蛋白2/3(arp2/3)复合体在细胞骨架相关的过程中起着重要作用,其所定向的肌丝聚合维持了细胞运动的许多类型,如细胞—细胞粘附及片足的形成。arp2/3复合物主要是通过其上游蛋白N-WASP激活的,N-WASP蛋白在肿瘤细胞中过量表达,且随着恶性程度的增强而升高,因此arp2/3复合物的抑制剂具有潜在的抑制肿瘤细胞增殖、迁移的作用。已有文献报道CK636能够靶向arp2/3,阻止二者形成活性构象,从而抑制actin聚合。因此,本实验室根据CK-636改造出一系列小分子化合物,通过体外、体内实验筛选出YR290进行研究。本研究建立了小黑鼠异种荷瘤模型,并着重于检测YR290对lewis肺癌肿瘤生长的影响,实验正在进行中。综上所述,我们发现了一种能够有效抑制肿瘤生长和肿瘤血管新生的中草药单体：松萝酸,并证实了松萝酸是通过抑制VEGFR-2介导的AKT、ERK1/2信号通路来达到抑制效果的。另外,我们还建立了一种小黑鼠荷瘤模型,并运用其检测小分子化合物YR290对lewis肺癌肿瘤生长的抑制情况。

关键词：血管新生肿瘤生长 VEGF VEGFR-2 松萝酸 ERK1/2 AKT/P70S6K arp2/3 YR290

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

微丝相关的微囊藻毒素毒性机理研究

微丝相关的微囊藻毒素毒性机理研究

作者：曾晶宁波大学

学位级别：硕士

目的：水体富营养化导致蓝藻水华频繁发生。蓝藻水华不仅严重降低水体利用价值，而且很多蓝藻（主要是铜绿微囊藻）还能产生毒素——微囊藻毒素（Microcystin, MC），对人类健康构成威胁，其中存在较多、毒性较大的是微囊藻毒素LR（Micr... 详细信息

目的：水体富营养化导致蓝藻水华频繁发生。蓝藻水华不仅严重降低水体利用价值，而且很多蓝藻（主要是铜绿微囊藻）还能产生毒素——微囊藻毒素（Microcystin, MC），对人类健康构成威胁，其中存在较多、毒性较大的是微囊藻毒素LR（Microcystin-LR, MC-LR）和RR。同位素示踪发现MC进入动物体内后主要分布在肝脏，提示肝脏可能是它的主要靶器官，可引起肝细胞损伤、原发性肝癌、肝细胞肿胀和坏死。MC肝脏毒性的分子机制到目前为止已有了比较广泛的研究，也取得了一定的研究成果，但其具体机制仍存在很多疑问，尤其是细胞骨架在MC毒性效应中的作用。因此，我们选择正常人来源的肝细胞系HL7702作为研究对象来研究细胞骨架中微丝参与MC-LR的具体毒性机理。方法：1、用MTT法检测MC-LR对HL7702细胞增殖的影响，不同浓度的MC-LR（0-10μM）染毒处理HL7702细胞。然后，根据MTT结果确定后续实验的染毒浓度。 2、用微丝特异染色剂荧光标记的鬼笔环肽对细胞进行染色，在激光共聚焦显微镜下观察其形态的变化。 3、再用荧光定量PCR和蛋白免疫印迹法分析微丝相关基因转录、翻译和磷酸化水平的变化，以及MAPK信号通路在此过程中的作用。结果：1、不同浓度MC-LR（0、0.001、0.01、0.1、1、10μM）暴露24h后，HL7702细胞的数量随着MC-LR染毒浓度的升高而逐渐减少，在染毒浓度达到1μM时开始有统计学意义。 2、MC-LR处理后，HL7702细胞的大小及形态仍保持完整，但微丝的正常纤维状结构逐渐消失，可见明显的致密束形成，微丝结构破坏、重组。 3、MC-LR处理后，微丝相关基因的转录和翻译水平没有发生明显改变，也不具有统计学意义。 4、MC-LR处理细胞后，微丝相关蛋白的磷酸化水平发生明显改变，p-VASP（Ser239）、p-VASP（Ser157）和p-Ezrin（Thr567）在染毒浓度达到10μM时显著升高并具有统计学意义，p-Cofilin（Ser3）无明显改变。 5、MC-LR处理后，MAPK信号通路中P38、ERK1/2和JNK的蛋白表达没有明显改变，但其磷酸化水平与MC-LR有剂量依赖关系，在高浓度时显著升高并具有统计学意义。 6、P38和ERK1/2抑制剂组的蛋白磷酸化水平向对照组恢复，与不加抑制剂的MC-LR处理组相比显著降低并具有统计学意义，说明P38和ERK1/2抑制剂能显著抑制MC-LR诱导的微丝相关蛋白过磷酸化，而JNK抑制剂无明显效果。结论：1、MC-LR能抑制HL7702细胞增殖，并引起微丝结构的紊乱和重组。 2、MC-LR可引起微丝相关蛋白VASP和Ezrin过磷酸化。 3、MC-LR可激活MAPK信号通路，且该信号通路中的P38和ERK1/2参与了MC-LR诱导的微丝相关蛋白过磷酸化。 4、MC-LR的肝细胞毒性可能是通过PP2A抑制、MAPK信号通路（尤其是P38和ERK1/2）的激活，引起微丝相关蛋白的过磷酸化，最终导致微丝结构的破坏和重组、肝细胞损伤。

关键词：微囊藻毒素LR HL7702细胞微丝重组 MAPK信号通路 arp2/3 Cofilin VASP Ezrin