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miR-15b-5p对大鼠的胰腺外分泌细胞ar42j凋亡的影响

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miR-15b-5p对大鼠的胰腺外分泌细胞AR42J凋亡的影响

作者：王福贵安徽医科大学

学位级别：硕士

目的急性胰腺炎(Acute pancreatitis,AP)是一种伴有胰脏腺泡细胞损伤凋亡、胰脏炎症及强烈的全身炎症反应的胃肠疾病。细胞凋亡的调节在整个生物体生长发育及疾病发展方面起着重要作用。mi R-15b-5p在多种疾病中有着调控细胞凋亡继而影... 详细信息

目的急性胰腺炎(Acute pancreatitis,AP)是一种伴有胰脏腺泡细胞损伤凋亡、胰脏炎症及强烈的全身炎症反应的胃肠疾病。细胞凋亡的调节在整个生物体生长发育及疾病发展方面起着重要作用。mi R-15b-5p在多种疾病中有着调控细胞凋亡继而影响疾病发展的作用。而mi R-15b-5p在急性胰腺炎细胞凋亡中的作用尚未被研究,因此本文旨在探究mi R-15b-5p是否参与对急性胰腺炎细胞凋亡的调控。方法在体外将ar42j细胞培养至对数生长期,加入浓度100n M的雨蛙素进行AP造模,造模完成后提取mi RNA进行采用q RT-PCR检测mi R-15b-5p相对表达量。随后利用转染试剂将mi R-15b-5p mimics、mi R-15b-5p mimics NC、mi R-15b-5p inhibitor、mi R-15b-5p inhibitor NC转染进ar42j细胞中,转染24小时后提取mi RNA采用q RT-PCR检测mi R-15b-5p的相对表达量。接着将处于对数生长期的细胞种于六孔板中,按照上述分组对细胞进行转染,24小时后,每孔细胞中加入雨蛙素处理24小时构建体外急性胰腺炎模型,采用q RT-PCR检测mi R-15b-5p的相对表达量,同时采用q RT-PCR检测Caspase-3及Caspase-9的m RNA相对表达水平,提取细胞蛋白采用Western blot测定Caspase-3及Caspase-9蛋白相对表达水平,采用流式细胞术来测定各组细胞的凋亡状况。结果(1)在AP模型中,q RT-PCR结果显示AP组mi R-15b-5p相对表达量较空白对照组增加(P细胞凋亡有关基因Caspase-3和Caspase-9的m RNA相对表达水平下降(P细胞凋亡有关基因Caspase-3和Caspase-9的蛋白质相对表达水平下降(P细胞术测定提示使用mi R-15b-5p inhibitor后,细胞凋发生率下降(P细胞凋亡发生率上升(P细胞凋亡,而在使用mi R-15b-5p mimics以后,增加了细胞凋亡。mi R-15b-5p可能通过活化Caspase-9激活下游Caspase-3,诱发细胞凋亡。故mi R-15b-5p可能是防治急性胰腺炎有效的潜在靶点。

关键词： miR-15b-5p ar42j细胞急性胰腺炎细胞凋亡

p38MAPK信号通路在雨蛙素诱导的胰腺ar42j细胞炎症反应中的作用

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中国病理生理杂志 2011年第9期27卷 1832-1835页

作者：陆邦超邹大进第二军医大学南京临床医学院南京军区南京总医院内分泌科江苏南京210002 南京鼓楼医院老年科306病区江苏南京210008

目的:探讨p38 MAPK信号通路在急性胰腺炎体外模型中的作用。方法:ar42j细胞随机分为3组:正常对照组、雨蛙素组(10-8mol/L雨蛙素)和SB203580组(10μmol/L SB203580+10-8mol/L雨蛙素)。于3h收集细胞,检测淀粉酶分泌率;免疫荧光染色观察p-p... 详细信息

目的:探讨p38 MAPK信号通路在急性胰腺炎体外模型中的作用。方法:ar42j细胞随机分为3组:正常对照组、雨蛙素组(10-8mol/L雨蛙素)和SB203580组(10μmol/L SB203580+10-8mol/L雨蛙素)。于3h收集细胞,检测淀粉酶分泌率;免疫荧光染色观察p-p38 MAPK核移位;Western blotting印迹检测p-p38 MAPK和TNF-α蛋白表达;EMSA检测NF-κB活性。结果:与正常对照组比较,雨蛙素组淀粉酶分泌率和TNF-α蛋白水平增高(P细胞内的炎症反应,其机制可能涉及NF-κB通路的活化。

关键词： p38MAPK通路胰腺炎 ar42j细胞 NF-κB 肿瘤坏死因子

miR-19b-3p促进胰腺腺泡ar42j细胞增殖

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基因组学与应用生物学 2021年第9期40卷 3372-3376页

作者：李旭艳翟文君付娜王锂韫文菁岭南师范学院生命科学与技术学院湛江524000 东北林业大学生命科学学院哈尔滨150040

为探讨miR-19b-3p对胰腺腺泡ar42j细胞增殖的影响,本研究采用脂质体介导转染方法将miR-19b-3p模拟物转染到大鼠胰腺腺泡ar42j细胞,q PCR检测miR-19b-3p基因过表达,CCK8试剂盒检测细胞的增殖能力,Western blotting检测表达的STAT3蛋白情... 详细信息

为探讨miR-19b-3p对胰腺腺泡ar42j细胞增殖的影响,本研究采用脂质体介导转染方法将miR-19b-3p模拟物转染到大鼠胰腺腺泡ar42j细胞,q PCR检测miR-19b-3p基因过表达,CCK8试剂盒检测细胞的增殖能力,Western blotting检测表达的STAT3蛋白情况。CCK8结果显示,与对照组相比,miR-19b-3p转染组ar42j细胞的吸光度值明显升高(P细胞内STAT3蛋白上调。表明miR-19b-3p过表达促进ar42j细胞增殖,其分子机制可能与STAT3蛋白上调有关。本研究为理解胰腺外分泌细胞发育和功能调控机理提供理论参考依据。

关键词： miR-19b-3p ar42j细胞细胞增殖

IRF9基因沉默对雨蛙素诱导的大鼠胰腺腺泡细胞ar42j细胞凋亡的影响

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安徽医科大学学报 2020年第4期55卷 508-512页

作者：薛彬华余维丽王小蝶刘奕安徽医科大学第二附属医院重症医学科合肥230601

目的探讨干扰素调节因子IRF9基因沉默对雨蛙素诱导的大鼠胰腺腺泡细胞ar42j细胞凋亡的影响,阐述IRF9在急性胰腺炎(AP)发生发展中的作用。方法 ar42j细胞培养至对数期,分为空白对照组、阴性对照组及IRF9沉默组。成功转染siRNA后应用雨蛙... 详细信息

目的探讨干扰素调节因子IRF9基因沉默对雨蛙素诱导的大鼠胰腺腺泡细胞ar42j细胞凋亡的影响,阐述IRF9在急性胰腺炎(AP)发生发展中的作用。方法 ar42j细胞培养至对数期,分为空白对照组、阴性对照组及IRF9沉默组。成功转染siRNA后应用雨蛙素诱导ar42j细胞构建体外急性胰腺炎模型。采用qRT-PCR和Western blot方法检测ar42j细胞中IRF9基因、Caspase 3及Caspase 9的mRNA及蛋白的表达水平;流式细胞术检测ar42j细胞凋亡率。结果①雨蛙素诱导24 h后,各组中的IRF9基因的mRNA及蛋白水平均较雨蛙素诱导前升高,Caspase 3及Caspase 9的mRNA及蛋白的表达水平亦明显升高,说明发生AP时IRF9及凋亡相关基因的表达水平均上调。②与空白对照组相比,雨蛙素诱导后IRF9沉默组ar42j细胞的凋亡率有明显降低,差异有统计学意义(P细胞凋亡率增加,IRF9基因沉默降低了雨蛙素诱导的体外AP细胞模型的细胞凋亡。

关键词： IRF9基因沉默 ar42j细胞雨蛙素细胞凋亡

LncRNA H19对大鼠胰腺腺泡细胞ar42j细胞凋亡的影响

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安徽医科大学学报 2021年第8期56卷 1273-1276页

作者：王小蝶余维丽王福贵孙昀安徽医科大学第二附属医院重症医学科合肥230601

目的研究长链非编码RNA(LncRNA)H19对雨蛙素刺激的大鼠胰腺腺泡细胞ar42j细胞凋亡的影响。方法在体外通过用雨蛙素刺激ar42j细胞建立AP模型,采用qRT-PCR和Western blot检测沉默以及过表达H19后凋亡相关基因Caspase 3及Caspase 9的mRNA... 详细信息

目的研究长链非编码RNA(LncRNA)H19对雨蛙素刺激的大鼠胰腺腺泡细胞ar42j细胞凋亡的影响。方法在体外通过用雨蛙素刺激ar42j细胞建立AP模型,采用qRT-PCR和Western blot检测沉默以及过表达H19后凋亡相关基因Caspase 3及Caspase 9的mRNA和蛋白表达水平;流式细胞术检测各组细胞的凋亡率。结果H19沉默后,凋亡相关基因Caspase 3及Caspase 9的mRNA和蛋白水平下降,细胞凋亡率也相对减少(P细胞凋亡率也是升高的(P细胞凋亡,提示其可能成为治疗急性胰腺炎的潜在有效靶点。

关键词： LncRNA H19 ar42j细胞急性胰腺炎细胞凋亡

TOLL样受体7及TOLL样受体9在脂多糖诱导的ar42j细胞炎症效应中的表达及作用

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TOLL样受体7及TOLL样受体9在脂多糖诱导的AR42J细胞炎症效应中的...

作者：张露艺广西医科大学

学位级别：硕士

目的观察TOLL样受体7(Toll Like Receptor7, TLR7)、TOLL样受体9(Toll Like Receptor9, TLR9)、核因子-κB P65（Nuclear Factor-κB P65, NF-κBP65）、肿瘤坏死因子-α（Tumor Necrosis Factor-α，TNF-α）在脂多糖诱导的ar42j细胞急性胰腺炎模型中的表达变化，探讨TLR7、TLR9在急性胰腺炎发病机制中的作用及可能的作用机制。方法取对数生长期的ar42j细胞用6孔细胞培养板传代培养24小时后，分别用含脂多糖浓度为0mg/L、1mg/L、10mg/L、100mg/L的培养液刺激ar42j细胞，构建体外急性胰腺炎细胞模型,孵育24小时后，收集细胞培养上清液，离心留取上清，用ELISA法检测细胞培养上清液中TNF-α的含量;收集细胞，提取细胞总RNA，用RT-PCR法分别检测细胞中TLR7、TLR9、NF-κB P65mRNA的表达量变化;提取细胞总蛋白，用Western Blot法分别检测细胞中TLR7、TLR9、NF-κB P65蛋白质表达水平变化。结果与脂多糖浓度为0mg/L的空白对照组相比，其余各组TLR7、TLR9、NF-κB P65的mRNA和蛋白表达量都随着脂多糖浓度升高而增加，脂多糖浓度为100mg/L时达到最大值，各组间的差异有统计学意义（均P＜0.05）。TLR7、TLR9与NF-κB P65在mRNA、蛋白的表达水平上皆有正相关性（mRNA：r=0.786，0.762;蛋白：r=0.801，0.720;均P＜0.05）。细胞培养上清液中TNF-α的含量呈脂多糖浓度依赖性增加，当脂多糖浓度为100mg/L时达到最大值，各组间的差异有统计学意义（P＜0.05）。结论（1）脂多糖诱导的ar42j细胞急性胰腺炎模型中，TLR7及TLR9表达明显上调，提示两者可能在急性胰腺炎疾病发展中发挥重要作用。（2）TLR7、TLR9可能通过作用于NF-κB上调下游炎症因子的产生，而参与急性胰腺炎的炎症反应。

关键词： Toll样受体7 Toll样受体9 核因子-κB 损伤相关性分子模式 ar42j细胞急性胰腺炎

下调PKR基因对胰腺细胞ar42j增殖、凋亡的影响及机制

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重庆医科大学学报 2019年第6期44卷 734-739页

作者：李勇权刚李孝琼肖云峰吴妮莎徐黎明周国俊李建水冷政伟川北医学院附属医院肝胆外科二南充637000

目的:探讨下调PKR基因对大鼠胰腺腺泡细胞ar42j增殖、凋亡的影响及机制。方法:利用雨蛙素作用ar42j细胞建立急性胰腺炎细胞模型,在细胞模型中通过慢病毒载体下调PKR基因为实验组,对照病毒转染组为对照组。平板克隆形成和CCK-8法检测细... 详细信息

目的:探讨下调PKR基因对大鼠胰腺腺泡细胞ar42j增殖、凋亡的影响及机制。方法:利用雨蛙素作用ar42j细胞建立急性胰腺炎细胞模型,在细胞模型中通过慢病毒载体下调PKR基因为实验组,对照病毒转染组为对照组。平板克隆形成和CCK-8法检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡情况,qRT-PCR及流式细胞术分别检测核因子-κB (nuclear factor-κB,NF-κB)通路关键基因表达变化。结果:相较于对照组,实验组中NF-κB通路关键基因NF-κB、肿瘤坏死因了-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白介素-6(interleukin-6,IL-6)、iNOS相对表达量为0.45±0.08、0.26±0.05、0.51±0.25、0.38±0.04,相对表达下降(t=7.64,t=16.41,t=6.67,t=10.15,均P细胞克隆数为(275.33±7.02)个,对照组克隆数为(36.00±4.00)个,克隆形成能力明显增强(t=51.29,P=0.00);CCK-8数据:在24 h、48 h、72 h,实验组细胞增殖率为(25.00±3.00)%、(50.33±4.04)%、(62.33±4.51)%,对照组为(12.33±1.53)%、(17.00±1.00)%、(24.00±2.00)%,实验组增殖能力明显增强(t=6.52,t=13.87,t=13.46,均P细胞早期凋亡率分别为(6.2±0.6)%和(13.4±0.9)%,实验组凋亡明显减少(t=11.53,P=0.00);晚期凋亡率分别为(4.1±0.2)%和(12.2±0.5)%,实验组凋亡明显减少(t=26.05,P=0.00)。结论:下调PKR基因可以抑制NF-κB通路减缓细胞炎症反应,致ar42j细胞凋亡减少、增殖能力增强。

关键词：急性胰腺炎 PKR ar42j细胞 NF-κB通路

稳定表达EGFP-LC3的ar42j细胞系的建立

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中华胰腺病杂志 2015年第2期15卷 112-115页

作者：吴敏李洁刘晓李钦芳郭晓榕湛先保第二军医大学长海医院消化内科上海200433

目的建立稳定表达增强型GFP （EGFP）-LC3的ar42j细胞.方法利用慢病毒过表达载体Lentiviral-EGFP-LC3包装成慢病毒,感染大鼠胰腺腺泡细胞ar42j.以Lentiviral-EGFP感染作为阴性对照.通过倒置荧光显微镜观察及流式细胞分析仪检测病毒感... 详细信息

目的建立稳定表达增强型GFP （EGFP）-LC3的ar42j细胞.方法利用慢病毒过表达载体Lentiviral-EGFP-LC3包装成慢病毒,感染大鼠胰腺腺泡细胞ar42j.以Lentiviral-EGFP感染作为阴性对照.通过倒置荧光显微镜观察及流式细胞分析仪检测病毒感染效率,蛋白质印迹法检测稳定传代细胞株的LC3蛋白表达.用毒胡萝卜素处理细胞建立内质网应激模型,采用蛋白质印迹法检测应激的ar42j细胞的LC3、PERK蛋白表达.结果 ar42j细胞的Lentiviral-EGFP-LC3感染效率＞85％,并能稳定传代.Lentiviral-EGFP-LC3感染的ar42j细胞的LC3 mRNA表达量为未感染细胞的（9.14±0.32）倍;LC3蛋白阳性表达并有EGFP-LC3融合蛋白的表达.Lentiviral-EGFP感染的ar42j细胞的LC3 mRNA表达量为未感染细胞的（1.08 ±0.07）倍,无LC3蛋白表达,仅有GFP表达.与未感染组比较,EGFP-LC3组的LC3 mRNA表达显著升高,差异有统计学意义（P＜0.05）,而EGFP组的差异无统计学意义.结论成功构建了稳定表达EGFP-LC3的大鼠胰腺外分泌细胞ar42j,为进一步研究急性胰腺炎与自噬的关系提供了新的细胞模型.

关键词：慢病毒感染自噬细胞系 ar42j细胞

脂多糖对ar42j细胞Toll样受体7、9表达的影响

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中华胰腺病杂志 2014年第3期14卷 163-166页

作者：张露艺唐国都唐曦平梁志海詹媛广西医科大学第一附属医院广西南宁530021

目的探讨Toll样受体（TLR）7、9在急性胰腺炎（AP）发病机制中的作用。方法用含1、10、100mg／L脂多糖的培养基处理正常大鼠胰腺腺泡细胞株ar42j，构建AP体外细胞模型，以不加脂多糖处理的细胞作为对照组。培养24h后收集细胞及培养上清... 详细信息

目的探讨Toll样受体（TLR）7、9在急性胰腺炎（AP）发病机制中的作用。方法用含1、10、100mg／L脂多糖的培养基处理正常大鼠胰腺腺泡细胞株ar42j，构建AP体外细胞模型，以不加脂多糖处理的细胞作为对照组。培养24h后收集细胞及培养上清液。采用RT-PCR法和蛋白质印迹法分别检测细胞TLR7、TLR9mRNA及蛋白的表达，ELISA法检测培养上清液中TNF-α、IL-10含量。结果对照组及1、10、100mg／L脂多糖处理组细胞TLR7mRNA表达量分别为0．12±0．09、0．28±0．06、0．49±0．04、0．78±0．04；TLR9mRNA表达量为0．06±0．02、0．32±0．03、0．56±0．14、0．84±0．12；TLR7蛋白表达量为0．04±0．01、0．26±0．05、0．49±0．04、0．77±0．16；TLR9蛋白表达量为0．10±0．14、0．62±0．23、1．21±0．26、1．75±0．13。培养上清液中TNF-α含量分别为（8．01±5．32）、（25．64±8．71）、（49．06±10．23）、（75．83±6．65）ng／L；IL-10含量分别为（155．54±25．47）、（105．16±10．49）、（69．36±8．19）、（14．07±9．06）ng／L。细胞TLR7和TLR9的mRNA及蛋白表达量、培养上清液中TNF-α含量均随脂多糖浓度升高而逐渐升高，而培养上清液中IL-10含量随脂多糖浓度增加逐渐下降，各组间的差异均具有统计学意义（P值均〈0．01）。结论脂多糖处理ar42j细胞后细胞的TLR7、TLR9基因表达明显上调，提示两者在AP疾病发展中可能发挥重要作用。

关键词：胰腺炎 Toll样受体脂多糖损伤相关性分子模式 ar42j细胞