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基于ar通路及Wnt通路探讨固本清源方联合雄激素剥夺治疗去势抵抗性前列腺癌的机制

中华中医药杂志 2024年第3期39卷 1480-1484页

作者：陈浩然方素萍张迪王家政陈亚飞刘浩中国中医科学院广安门医院北京100053

目的:从前列腺癌ar通路及肿瘤干细胞Wnt通路探讨固本清源方联合雄激素剥夺(ADT)治疗控制去势抵抗性前列腺癌(CRPC)的作用机制。方法:建立CRPC荷瘤小鼠模型,采用RT-PCR、WesternBlot检测固本清源方联合ADT治疗肿瘤组织中ar、NKX3.1、PSA... 详细信息

目的:从前列腺癌ar通路及肿瘤干细胞Wnt通路探讨固本清源方联合雄激素剥夺(ADT)治疗控制去势抵抗性前列腺癌(CRPC)的作用机制。方法:建立CRPC荷瘤小鼠模型,采用RT-PCR、WesternBlot检测固本清源方联合ADT治疗肿瘤组织中ar、NKX3.1、PSA的表达;分选前列腺癌干细胞,观察固本清源方联合ADT治疗对接种前列腺癌干细胞荷瘤小鼠的抑瘤率,采用WesternBlot检测肿瘤组织中Wnt、β-catenin的表达。结果:中、高剂量固本清源方联合ADT治疗组ar、PSAmRNA及蛋白表达水平下调,而NKX3.1mRNA及蛋白表达水平上调,与ADT组治疗比较差异有统计学意义(Par通路及肿瘤干细胞Wnt/β-catenin通路有关。

关键词：去势抵抗性前列腺癌固本清源方雄激素剥夺治疗 ar通路肿瘤干细胞 Wnt通路

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甲基莲心碱下调雄激素介导上皮间质转化作用抗良性前列腺增生机制研究

甲基莲心碱下调雄激素介导上皮间质转化作用抗良性前列腺增生机制...

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作者：邵子辰宜春学院

学位级别：硕士

目的:良性前列腺增生(Benign prostatic hyperplasia,BPH)是一种50岁以上中老年男性常见的泌尿系统疾病。良性前列腺增生导致前列腺间质和腺体增生,进而压迫尿道产生尿潴留和炎症。中草药治疗前列腺相关疾病近年来逐步受到重视。甲基莲... 详细信息

目的:良性前列腺增生(Benign prostatic hyperplasia,BPH)是一种50岁以上中老年男性常见的泌尿系统疾病。良性前列腺增生导致前列腺间质和腺体增生,进而压迫尿道产生尿潴留和炎症。中草药治疗前列腺相关疾病近年来逐步受到重视。甲基莲心碱是从天然产物莲子心中提取的二苄基异喹啉类生物碱,具有抗氧化、抗炎、抗抑郁等多种药理作用,同时作用温和且不良反应甚微。但对于甲基莲心碱(Neferine,Nef)抑制前列腺增生的机制尚未被深入探讨。本实验的目的是研究甲基莲心碱是否通过调节雄激素及相关通路来抑制良性前列腺增生和上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transitions,EMT)的产生。方法:本实验首先建立小鼠前列腺增生模型,观察甲基莲心碱对增生前列腺的药理作用。丙酸睾酮诱导增生模型形成,同时给予不同浓度甲基莲心碱和非那雄胺处理14或28天后收集前列腺组织。采用苏木精-伊红染色法(hematoxylin-eosin染色法,H&E染色法)观察不同组别细胞形态的变化;采用酶联免疫吸附测定(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)试剂盒的方法,测定血清中前列腺特异性抗原(Prostate spwecific antigen,PSA)的具体含量。此外本研究以正常人前列腺基质永生化细胞株WPMY-1与人前列腺癌上皮细胞株LNCa P为研究对象,建立体外增生模型,探讨甲基莲心碱抗间质及上皮增生各自的作用机制。采用MTT法检测甲基莲心碱对雄激素诱导后基质细胞和癌上皮细胞的抗增殖作用。采用流式细胞术检测甲基莲心碱对ROS(reactive oxygen species)的影响。采用免疫印迹法(Western Blot,WB)检测甲基莲心碱在小鼠BPH模型以及体外BPH模型(WPMY-1,LNCa P)中对雄激素/ar通路蛋白的影响,包括:第Ⅱ型5α-还原酶(5α-reductase)、雄激素受体(androgen receptor,ar)、前列腺特异性抗原(Prostate spwecific antigen,PSA)。对凋亡的影响,包括:pro-caspase-3、cleaved caspase-3、uncleaved ParP、cleaved ParP。对TGF-β/Smads信号通路的影响,包括:TGF-β、TGFBR2、p-Smad2/3、Smad2/3。检测甲基莲心碱对EMT的抑制作用。N-Cadherin、E-Cadherin、Vimentin为标志蛋白。另外免疫印迹法(Western Blot)还检测了甲基莲心碱作用于TGF-β诱导下的癌上皮及间质细胞各通路蛋白的表达情况。结果:丙酸睾酮(7.5 mg/kg)诱导良性前列腺增生模型,甲基莲心碱(2、5 mg/kg),非那雄胺(10 mg/kg)作用,小鼠增生的前列腺体积缩小,脏器指数减少。血清PSA水平呈下降的趋势。H&E染色切片结果显示用药组上皮细胞厚度程度减轻。睾酮(1μmol/L)诱导细胞增生模型,甲基莲心碱(10、100μmol/L),非那雄胺(10、100μmol/L)作用后,前列腺增生间质细胞及癌上皮细胞活力下降。与睾酮组相比,甲基莲心碱(10、100μmol/L)下调间质细胞ROS水平。在体内实验中,与诱导组相比,pro-caspase-3和uncleaved ParP表达下调,cleaved caspase-3和cleaved ParP表达上升。体内外实验均显示ar通路,TGF-β/Smads通路,EMT蛋白表达的显著改变,5α-reductase、ar、PSA表达下降。Smad2/3表达无明显变化,TGF-β、TGFBR2、p-Smad2/3表达下降。EMT中N-Cadherin、Vimentin受到抑制,E-Cadherin表达恢复。TGF-β在WPMY-1和LNCa P细胞中诱导增生,甲基莲心碱和非那雄胺作用后干扰ar通路,TGF-β/Smads通路,EMT相关蛋白的改变。结论:本研究报道了雄激素在小鼠,上皮和间质细胞中诱导增生的效力,同时也证实了甲基莲心碱抑制雄激素诱导的良性前列腺增生的作用。甲基莲心碱可以通过阻断雄激素/ar通路,TGF-β/Smads通路,逆转EMT的产生,防止良性前列腺增生的进展,被认为是治疗BPH的潜在药物。

关键词：良性前列腺增生雄激素甲基莲心碱上皮间质转化 ar通路 TGF-β/Smads通路

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复方斑蝥注射液抑制人胃癌SGC-7901细胞增殖相关通路的研究

复方斑蝥注射液抑制人胃癌SGC-7901细胞增殖相关通路的研究

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作者：李琳哈尔滨商业大学

学位级别：硕士

复方斑蝥注射液(Compound Cantharide Injection,CCI),活血化瘀中药斑蝥和扶正理气中药人参、黄芪、刺五加组方而成。有益气养阴、清热解毒、消瘀散结的功效,对人肝癌、肺癌、直肠癌等均有较好的治疗作用,在肿瘤临床治疗中应用较为广泛... 详细信息

复方斑蝥注射液(Compound Cantharide Injection,CCI),活血化瘀中药斑蝥和扶正理气中药人参、黄芪、刺五加组方而成。有益气养阴、清热解毒、消瘀散结的功效,对人肝癌、肺癌、直肠癌等均有较好的治疗作用,在肿瘤临床治疗中应用较为广泛,但复方斑蝥注射液对胃癌的药学研究及相应的作用机理研究较少,相关机制不明确。本课题组前期采用网络药理学采用大数据的方法,对复方斑蝥注射液的作用机理进行了分析和预测。本文在此基础上对网络药理学预测的复方斑蝥注射液抗胃癌的机制进行实验验证。本论文以人胃癌SGC-7901细胞为研究对象,首先对复方斑蝥注射液抑制人胃癌SGC-7901细胞增殖的药效学进行了考察,其次对其诱导人胃癌SGC-7901细胞发生周期阻滞的机制进行研究,最后对抑制胃癌细胞增殖的相关蛋白通路进行了验证。本文主要开展了五个方面的研究,分别为:(1)复方斑蝥注射液对人胃癌SGC-7901细胞细胞毒作用的影响;(2)复方斑蝥注射液对人胃癌SGC-7901细胞周期阻滞的影响;(3)复方斑蝥注射液对胃癌SGC-7901细胞TNF-α通路的影响;(4)复方斑蝥注射液对胃癌SGC-7901细胞ar通路的影响;(5)复方斑蝥注射液对胃癌SGC-7901细胞TGF-β通路的影响。在复方斑蝥注射液对人胃癌SGC-7901细胞细胞毒作用的研究中,MTT法和绘制细胞生长曲线的方法观察复方斑蝥注射液对人胃癌SGC-7901细胞的增殖抑制作用,发现复方斑蝥注射液对人胃癌SGC-7901细胞具有较好的增殖抑制作用。倒置显微镜法和荧光显微镜法观察复方斑蝥注射液对人胃癌SGC-7901细胞形态的影响,发现复方斑蝥注射液能够显著改变人胃癌SGC-7901细胞形态,破坏细胞膜和细胞核结构促进人胃癌SGC-7901细胞死亡。通过这部分研究表明复方斑蝥注射液对人胃癌SGC-7901细胞有明显的增殖抑制作用。网络药理学的研究结果表明,复方斑蝥注射液抑制人胃癌作用于引起人胃癌细胞周期阻滞、调控人胃癌细胞TNF-α信号通路、ar信号通路和TGF-β信号通路密切相关,因此接下来我们观察了复方斑蝥注射液对人胃癌SGC-7901细胞周期、TNF-α信号通路、ar信号通路和TGF-β信号通路的影响。复方斑蝥注射液对人胃癌SGC-7901细胞周期阻滞的研究中,应用流式细胞术和PI单染法测定复方斑蝥注射液对人胃癌SGC-7901细胞周期的影响,发现复方斑蝥注射液能够将人胃癌SGC-7901细胞阻滞在S期;检测复方斑蝥注射液对人胃癌SGC-7901细胞周期调控相关蛋白表达的影响,发现CDK4和cyclinD1的表达量随着药物浓度的增加,呈现上升趋势,促使处在G/G期的细胞逐渐向S期细胞转变,CDK2和cyclin A的表达量呈现下降趋势,阻滞S期细胞进入G期。复方斑蝥注射液对人胃癌SGC-7901细胞TNF-α通路的影响中,检测复方斑蝥注射液对人胃癌SGC-7901细胞TNF-α、IKB-α、NF-κB、MEKK1、MKK7、JNK、caspase 8、caspase 3和caspase7蛋白表达的影响,发现随着复方斑蝥注射液浓度的增加,可以上调TNF-α、P-IKBα、MEKK1、P-MKK7、P-JNK、cleaved caspase 8、cleaved caspase 3和cleaved caspase 7的表达,下调IKB-α、NF-κB、JNK和caspase 3的表达,而对MKK7、caspase 8和caspase 7三种蛋白表达量无明显影响,表明复方斑蝥注射液通过调控人胃癌SGC-7901细胞caspase家族介导的细胞凋亡途径、NF-κB参与转录调控的信号通路以及JNK信号转导途径这三条TNF-α经典通路起到抑制人胃癌SGC-7901细胞增殖的作用。复方斑蝥注射液对人胃癌SGC-7901细胞ar通路影响过程中,检测复方斑蝥注射液对人胃癌SGC-7901细胞ar和STEAP1蛋白表达的影响,发现复方斑蝥注射液可以上调ar(cytoplasmic)蛋白的表达,下调ar(nucleus)和STEAP1蛋白的表达,表明复方斑蝥注射液通过促进人胃癌SGC-7901细胞ar蛋白在胞浆和胞核间的分布,调控ar蛋白通路发挥抑制人胃癌SGC-7901细胞增殖的作用。最后研究了复方斑蝥注射液对人胃癌SGC-7901细胞TGF-β蛋白通路的影响,检测复方斑蝥注射液对胃癌SGC-7901细胞TGF-β、smad2/3和smad4蛋白表达水平的影响,发现复方斑蝥注射液浓度能够上调smad4蛋白的表达,下调TGF-β和p-smad2/3蛋白的表达,而对smad2/3蛋白表达无明显影响。表明复方斑蝥注射液通过调控人胃癌SGC-7901细胞TGF-β蛋白发挥细胞增殖抑制作用。本文研究发现复方斑蝥注射液能够抑制人胃癌SGC-7901细胞增殖,这一作用与阻滞人胃癌SGC-7901细胞于S

关键词：复方斑蝥注射液人胃癌SGC-7901细胞 TNF-α通路细胞周期 ar通路 TGF-β通路

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