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食品与发酵工业 2012年第6期38卷 43-47页

作者：朱家荣杨善岩陈丽芬杨光辉浙江工业大学生物与环境工程学院浙江杭州310014

为构建遗传稳定的ATP高产工程菌,利用PCR技术扩增酿酒酵母ATP合成关键酶基因apt1,并将其克隆至质粒pCB1004-Pgpd的相应位点,得到有强启动子Pgpd驱动的apt1基因超表达质粒pCB1004-Pgpd-apt1。在PEG-CaCl2介导下,超表达质粒转化雅致放射... 详细信息

为构建遗传稳定的ATP高产工程菌,利用PCR技术扩增酿酒酵母ATP合成关键酶基因apt1,并将其克隆至质粒pCB1004-Pgpd的相应位点,得到有强启动子Pgpd驱动的apt1基因超表达质粒pCB1004-Pgpd-apt1。在PEG-CaCl2介导下,超表达质粒转化雅致放射毛霉原生质体,获得ATP高产工程菌。其ATP产量及摩尔转化率比出发菌株提高44.04%。

关键词： apt1 雅致放射毛霉酿酒酵母

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apt1去棕榈酰化CD36影响其质膜定位

APT1去棕榈酰化CD36影响其质膜定位

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作者：孙慧慧厦门大学

学位级别：硕士

蛋白质的棕榈酰化是一种可逆的蛋白翻译后修饰,是指16碳的棕榈酸通过硫酯键的形式共价结合到蛋白质侧链的半胱氨酸残基上,进而调控蛋白质的稳定性、细胞内转运和定位等。蛋白质的动态棕榈酰化是由DHHC蛋白家族组成的棕榈酰化转移酶以及... 详细信息

蛋白质的棕榈酰化是一种可逆的蛋白翻译后修饰,是指16碳的棕榈酸通过硫酯键的形式共价结合到蛋白质侧链的半胱氨酸残基上,进而调控蛋白质的稳定性、细胞内转运和定位等。蛋白质的动态棕榈酰化是由DHHC蛋白家族组成的棕榈酰化转移酶以及由酰基蛋白硫酯酶apt和ABHD蛋白组成的去棕榈酰化酶催化的。aptI主要定位于线粒体,胞浆中也存在小部分,参与许多信号蛋白的去棕榈酰化,miRNA-138抑制大鼠突触体apt1的水平,增加其底物Gα13的膜定位,从而改变树突状棘的大小和突触传递。CD36是一种有4个棕榈醜化修饰位点的跨膜糖蛋白,作为B类清道夫受体,介导细胞对氧化型低密度脂蛋白的摄取,引发动脉粥样硬化和炎症级联效应,它还在关键组织调控脂肪酸吸收,进而影响脂代谢。目前蛋白质去棕榈酰化修饰的研究主要集中于神经生物学方面,在代谢生物学方面尚未见报道。实验室前期发表的文章报道了DHHC5能够阻止CD36的去棕榈酰化,进而维持它在质膜上的定位。本实验通过细胞免疫荧光技术和Acyl-RAC技术,首先筛选出CD36的去棕榈酰化酶apt1。接着在细胞中共转过表达aptI和CD36,CD36无法定位在质膜上,处理去棕榈酰化酶抑制剂CD36可恢复质膜定位。我们还发现,aptI第2位半胱氨酸和第119位丝氨酸影响CD36质膜定位和棕榈酰化水平。此外,我们还发现apt1调控着CD36对脂肪酸的吸收。本研究为进一步揭示CD36的动态棕榈酰化以及蛋白质去棕榈酰化对于代谢的调控提供了理论基础,我们目前的工作是探究apt1去棕榈酰化CD36的分子机制以及aptI酶活性的调控机制。

关键词：去棕榈酰化修饰 apt1 CD36

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Adenine Phosphoribosyl Transferase 1 is a Key Enzyme Catalyzing Cytokinin Conversion from Nucleobases to Nucleotides in Arabidopsis

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Molecular Plant 2013年第5期6卷 1661-1672页

作者： Xinyan Zhang Yutao Chen Xin Lin Xinyu Hong Ying Zhu Wenyang Li Wenrong He Fengying An Hongwei Guo State Key Laboratory of Protein and Plant Gene Research College of Life Sciences Peking-Tsinghua Center for Life Sciences Peking University Life Sciences Building 5 Yi He Yuan Road Haidian Beijing 100871 China

In plants, the cytokinin metabolic processes, including cytokinin biosynthesis, interconversion, inactivation, and degradation, play critical roles in the regulation of cytokinin homeostasis and plant development. Purine meta- bolic enzymes have been implied to catalyze the cytokinin interconversion in previous works. In this study, we report that Adenine Phosphoribosyl Transferase 1 （apt1） is the causal gene of the high-dose cytokinin-resistant mutants. apt1 catalyzes the cytokinin conversion from free bases to nucleotides, and is functionally predominant among the five members of the Arabidopsis Adenine Phosphoribosyl Transferase family. Loss of apt1 activity in plants leads to excess accumulation of cytokinin bases, thus evoking myriad cytokinin-regulated responses, such as delayed leaf senescence, anthocyanin accumulation, and downstream gene expression. Thus, our study defines apt1 as a key metabolic enzyme participating in the cytokinin inactivation by phosphoribosylation.

关键词： apt1 phosphoribosylation cytokinin plant hormone Arabidopsis thaliana.

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