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ape1/ref-1表达在小鼠放射性肺损伤形成中的变化特点

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重庆医学 2009年第18期38卷 2301-2303,F0002页

作者：余舒亮王东林俐卿毅杨宇馨廖玲李梦侠曾林立李增鹏第三军医大学大坪医院野战外科研究所肿瘤中心重庆400042 第三军医大学大坪医院野战外科研究所病理科重庆400042

目的观察小鼠放射性肺损伤过程中DNA损伤修复关键酶脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶/氧化还原因子(apurinic/aprimidinic endonuclease/redox factor-1,ape1/ref-1)表达的动态变化,初步探讨ape1/ref-1在放射性肺损伤发生、发展中的作用。方法... 详细信息

目的观察小鼠放射性肺损伤过程中DNA损伤修复关键酶脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶/氧化还原因子(apurinic/aprimidinic endonuclease/redox factor-1,ape1/ref-1)表达的动态变化,初步探讨ape1/ref-1在放射性肺损伤发生、发展中的作用。方法雌性昆明小鼠30只,随机分为照射组18只和对照组12只。照射组用8MV直线加速器给予小鼠全胸20Gy单次照射,对照组佯装照射。在照射后1、3、7、14、28、56d共6个时相点,分批活杀小鼠(照射组3只,对照组2只),观察其全肺大体形态改变,取右肺组织,光镜下观察组织形态学变化,免疫组化SP法检测ape1/ref-1;取左肺组织,Western blot方法检测ape1/ref-1蛋白表达。结果正常小鼠肺组织上皮细胞和内皮细胞中ape1/ref-1呈胞核表达为主,而在小鼠放射性肺损伤不同阶段肺组织上皮细胞和内皮细胞中ape1/ref-1表达特征有所改变,呈核浆共同表达和胞浆表达为主;并且ape1/ref-1表达呈现先增高后降低的趋势,照射后1d开始升高,3d达高峰,且明显高于对照组,此后随着小鼠放射性肺损伤发展逐渐降低,28d降至对照组水平,56d明显低于对照组。结论电离辐射可以刺激ape1/ref-1蛋白的表达并使其表达发生由核内转向浆内和先增高后降低的特征改变,表明ape1/ref-1可能在放射性肺损伤修复过程中起着重要作用。

关键词： ape1/ref-1 电离辐射放射性肺损伤

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ape1/ref-1线粒体定位机制的研究

重庆医学 2010年第16期39卷 2125-2127,2124页

作者：朱剑武李梦侠王东第三军医大学大坪医院野战外科研究所肿瘤中心

ape1/ref-1是一种重要的多功能蛋白,主要功能是DNA修复和转录因子的氧化还原调控。目前认为,核编码基因的线粒体主动转运主要依靠线粒体外膜和内膜上一系列转运酶复合体,称为外膜转运酶（translocase of outer membrane,TOM）和内膜转... 详细信息

ape1/ref-1是一种重要的多功能蛋白,主要功能是DNA修复和转录因子的氧化还原调控。目前认为,核编码基因的线粒体主动转运主要依靠线粒体外膜和内膜上一系列转运酶复合体,称为外膜转运酶（translocase of outer membrane,TOM）和内膜转运酶（translocase of inner membrane,TIM）。基本过．程为线粒体外膜TOM复合体中的受体亚基，包括TOM20、TOM22和TOM70识别前体蛋白上的线粒体定位信号，而后通过TOM40等亚基形成的共同转运通道（general import pore，G1P）进入线粒体。

关键词： ape1/ref-1 MTS TOM 线粒体定位

ape1/ref-1和NPM1在卵巢高级别浆液性腺癌中的表达及其与预后的关系

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APE1/Ref-1和NPM1在卵巢高级别浆液性腺癌中的表达及其与预后的关...

作者：温利绚河北医科大学

学位级别：硕士

目的:女性生殖系统常见的恶性肿瘤包括卵巢癌、宫颈癌和子宫内膜癌,根据2013年美国癌症协会调查显示,在这三大恶性肿瘤中,卵巢癌死亡率最高,究其根本原因还是对卵巢癌分子发病机制认识不足。卵巢上皮性肿瘤并非单一疾病,而是包括多种组... 详细信息

目的:女性生殖系统常见的恶性肿瘤包括卵巢癌、宫颈癌和子宫内膜癌,根据2013年美国癌症协会调查显示,在这三大恶性肿瘤中,卵巢癌死亡率最高,究其根本原因还是对卵巢癌分子发病机制认识不足。卵巢上皮性肿瘤并非单一疾病,而是包括多种组织学类型,且不同组织学类型之间在多方面都存在显著差异。单独以卵巢癌最常见的组织学类型卵巢高级别浆液性腺癌作为研究对象,排除不同级别、不同组织学类型对卵巢癌的影响,能更准确的反应其发生和发展的客观过程,为临床更准确判断预后提供可靠依据。最新研究表明,卵巢浆液性腺癌中普遍存在DNA修复机制缺陷,ape1/ref-1和NPM1是DNA修复机制中两个重要基因,且ape1/ref-1残基Lys27/31/32/35与NPM1 N端的寡聚区存在相互作用,这不仅可以显著的降低ape1/ref-1在碱基切除修复中的活性,而且还可以促进肿瘤细胞的增殖。本研究以卵巢高级别浆液性腺癌组织为实验组,正常输卵管组织为对照组,利用免疫组织化学方法检测ape1/ref-1和NPM1蛋白在两种组织中表达情况,分析两者与卵巢高级别浆液性腺癌发生、进展、化疗耐药和预后的关系,筛选影响卵巢高级别浆液性腺癌预后的相关因素及各因素的预测价值,进一步确定独立预后因素。方法:1研究对象选取2003年7月至2009年1月河北医科大学第二医院临床资料和随访记录完整,术前未给予任何治疗、经手术切除并经病理证实的卵巢高级别浆液性腺癌50例作为实验组,因其他良性疾病切除的正常输卵管20例作为对照组。2免疫组织化学严格按照免疫组织化学三步法检测ape1/ref-1、NPM1和PCNA指标蛋白表达情况。以磷酸盐缓冲液(PBS)代替一抗作为阴性对照,以已知上述基因强阳性表达的组织切片作为阳性对照。3生存分析对50例卵巢高级别浆液性腺癌患者进行随访并总结分析,分别以36个月和60个月作为截止点,通过比较50例卵巢高级别浆液性腺癌患者3年和5年的生存率,筛选卵巢高级别浆液性腺癌预后因素和各自预测价值,确定独立预后因素。4统计学处理及分析采用SPSS13.0软件进行统计学分析,计数资料采用行×列表的x2检验,等级资料采用Mann-Whitney秩和检验,各指标之间的相关关系采用Spearman等级相关分析,Kaplan-Meier单因素生存分析和Log-Rank检验筛选预后相关因素,Cox多因素生存分析判断独立预后因素及各因素的预测价值,确定各因素风险系数。检验水准α=0.05。结果:1 ape1/ref-1、NPM1和PCNA蛋白在卵巢高级别浆液性腺癌中的表达情况1.1 ape1/ref-1蛋白表达根据免疫组化结果判定(以细胞浆出现棕黄色染色颗粒为阳性表达),ape1/ref-1蛋白在50例卵巢高级别浆液性腺癌和20例正常输卵管组织中阳性表达率分别为98%和0%。统计学分析表明,卵巢高级别浆液性腺癌中ape1/ref-1蛋白阳性表达率明显高于正常输卵管组织,差异有统计学意义(P1.2 NPM1蛋白表达根据免疫组化结果判定(以细胞浆出现棕黄色染色颗粒为阳性表达),NPM1蛋白在50例卵巢高级别浆液性腺癌和20例正常输卵管组织中阳性表达率分别为96%和0%。统计学分析表明,卵巢高级别浆液性腺癌中NPM1蛋白阳性表达率明显高于正常输卵管组织,差异有统计学意义(P1.3 PCNA蛋白表达根据免疫组化结果判定,PCNA蛋白在50例卵巢高级别浆液性腺癌和在20例正常输卵管组织中的高表达(核增殖指数>40%)率分别为68%和10%。统计学分析表明,卵巢高级别浆液性腺癌PCNA蛋白高表达率明显高于正常输卵管组织,差异有统计学意义(Pape1/ref-1和NPM1蛋白表达与卵巢高级别浆液性腺癌临床病理特征的关系ape1/ref-1和NPM1蛋白表达水平在卵巢高级别浆液性腺癌的年龄、家族史、腹水中的差异无统计学意义(P>0.05);淋巴结转移、远处转移和化疗不敏感组ape1/ref-1和NPM1蛋白表达水平高于无淋巴结转移、无远处转移和化疗敏感组,FIGO分期晚期(ⅢⅣ)卵巢高级浆液性腺癌ape1/ref-1和NPM1蛋白表达水平高于早期(ⅠⅡ)高级别浆液性腺癌,且差异均有统计学意义(Pape1/ref-1、NPM1和PCNA蛋白表达的相关性3.1 ape1/ref-1和PCNA蛋白表达的相关性卵巢高级别浆液性腺癌ape1/ref-1蛋白高表达(++和+++)32例中PCNA蛋白高表达(核增殖指数>40%)28例,提示ape1/ref-1和PCNA蛋白表达呈正相关(r=0.797 P1和PCNA蛋白表达的相关性卵巢高级别浆液性腺癌NPM1蛋白高表达(++和+++)32例中PCNA

关键词： ape1/ref-1 NPM1 卵巢高级别浆液性腺癌 PCNA 预后免疫组化

人胰腺癌吉西他滨耐药细胞株ape1/ref-1表达升高

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胃肠病学 2015年第7期20卷 403-406页

作者：聂佳佳熊光苏吴叔明上海交通大学医学院附属仁济医院消化内科上海市消化疾病研究所 200001

背景:吉西他滨是中晚期胰腺癌的主要化疗药物,但由于胰腺癌对吉西他滨存在高度先天性和获得性耐药,吉西他滨不能明显改善胰腺癌患者的预后。目的:探讨DNA损伤修复及其碱基切除修复途径中的关键酶人脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶1/氧化还原因... 详细信息

背景:吉西他滨是中晚期胰腺癌的主要化疗药物,但由于胰腺癌对吉西他滨存在高度先天性和获得性耐药,吉西他滨不能明显改善胰腺癌患者的预后。目的:探讨DNA损伤修复及其碱基切除修复途径中的关键酶人脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶1/氧化还原因子-1(ape1/ref-1)表达与胰腺癌吉西他滨耐药之间的关系。方法:应用前期研究建立的人胰腺癌吉西他滨耐药细胞株SW1990-0.5(耐药指数9.32)及其亲本细胞株SW1990,以彗星实验评估两者经吉西他滨作用后的DNA损伤程度,real-time PCR和蛋白质印迹法检测ape1/ref-1 mRNA和蛋白表达。结果:经吉西他滨作用24 h,SW1990-0.5和SW1990细胞的彗星实验OTM值分别为0.32±0.13和26.96±6.83,相对于SW1990细胞,SW1990-0.5细胞的ape1/ref-1 mRNA表达量为2.48±0.49,两者ape1/ref-1蛋白相对表达量分别为1.57±0.08和0.84±0.06,组间差异均有统计学意义(P均ape1/ref-1表达上调可能是通过修复DNA损伤参与胰腺癌对吉西他滨耐药。

关键词：胰腺肿瘤吉西他滨抗药性,肿瘤 DNA修复 ape1/ref-1

三黄茵赤汤通过ape1/ref-1抑制p53调控凋亡相关蛋白防治慢加急肝衰竭的研究

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三黄茵赤汤通过APE1/Ref-1抑制p53调控凋亡相关蛋白防治慢加急肝...

作者：刁建新南方医科大学

学位级别：硕士

目的:应用B超方法监测慢加急性肝衰竭造模制作的过程,探讨该方法筛选慢加急性肝衰竭模型的可行性;通过该方法筛选出成功的动物模型,进一步研究三黄茵赤汤高、中、低剂量对慢加急性肝衰竭大鼠生存率,肝脏功能,凝血功能,血清炎症相关因子... 详细信息

目的:应用B超方法监测慢加急性肝衰竭造模制作的过程,探讨该方法筛选慢加急性肝衰竭模型的可行性;通过该方法筛选出成功的动物模型,进一步研究三黄茵赤汤高、中、低剂量对慢加急性肝衰竭大鼠生存率,肝脏功能,凝血功能,血清炎症相关因子的影响;研究三黄茵赤汤对ape1/ref-1在肝细胞不同部位的表达意义及其对p53等凋亡相关蛋白的调控;最终阐明三黄茵赤汤通过ape1/ref-1抑制p53调控凋亡相关蛋白防治慢加急肝衰竭。方法:1、CCL4联合D-GalN和LPS复制慢加急性肝衰竭并用B超筛选成功模型SPF级SD大鼠,180-200g（合格证号:4402102032）,购买于南方医科大学实验动物中心。在新的环境下适应性饲养1周后进行实验,除正常对照组（n=12）以外,模型组大鼠以2ml/kgbw腹腔注射40%CCL4花生油溶液,每周2次,连续10周。每天观察大鼠的活动状态并记录死亡情况。从第6周开始,应用B超每周检查大鼠腹部1次,观察肝大小变化及腹水情况。通过B超的结果筛选出肝硬化模型。造模前禁食不禁水12小时,除对照组外,模型腹腔注射400 mg/kg的D-GalN联合10mg/mlLPS急性打击,复制慢加急性肝衰竭模型,对照组腹腔注射等体积生理盐水,自由供给饲料及水。观察大鼠的的活动状态并记录死亡情况,分析生存率,48小时后,行腹主动脉采血,检测血清中AST,ALT,TBIL的水平;取肝脏组织制作病理切片;综合分析慢加急性肝衰竭模型。2、中药的制备及分组给药三黄茵赤汤由15 g大黄,15g姜黄,30 g黄芪,30 g茵陈蒿,30 g赤芍组成（此为成人1日剂量）,购于南方医科大学南方医院中药房,按传统方法将中药加水960ml（按现代药理学方法,煎药水量是中药质量的8倍）浸泡30min,武火煮沸,文火再煎煮40min,连续两次,去渣合并,60℃浓缩成含生药2g/mL的浓缩液,4 ℃冰箱储存;通过高效液相色谱,以芍药苷、大黄素、绿原酸、姜黄素为标准品对三黄茵赤汤浓缩液进行质量控制,保证药物的质量。按上述的方法筛选出成功的动物模型,随机分成5组,分别为模型组、三黄茵赤汤高、中、低剂量组及安宫牛黄丸组,正常对照组除外。三黄茵赤汤以30g/kg生药浓度灌胃给药,连续给药7天后复制慢加急性模型,造模前禁食不禁水12小时。除对照组外,其它5组腹腔注射400 mg/kg的D-GalN联合10mg/ml LPS急性打击,复制慢加急性肝衰竭造模,对照组腹腔注射等体积生理盐水,造模4小时后继续给药干预,自由供给饲料及水。观察大鼠的的活动状态并记录死亡情况,分析生存率。48小时后处死大鼠,收集各种标本。3、肝脏功能、凝血功能、血氨指标检测全自动生化检测仪检测各组大鼠血清中丙氨酸转氨酶（ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）、总胆红素（TBIL）的含量,全自动凝血分析仪检测各组大鼠凝血酶原时间（PT）、凝血时间国际标准比率（INR）、血浆纤维蛋白原（FIB）三项凝血指标。酶法检测血氨（NH3）的含量。4、HE染色,电镜观察肝脏组织结构的变化HE染色:10%甲醛液固定肝大叶部分组织,石蜡包埋,4微米厚度切片,烤片,脱蜡,水化,进行苏木精一伊红（HE）染色,每只大鼠肝脏组织制作2张病理切片,随机选择1张切片,应用尼康Eoipse Ti-s倒置显微镜在高倍镜下选取5个视野观察肝组织病理变化并分析图像结果。电镜标本制作:取2毫米的肝脏组织浸泡在2.5%戊二醛磷酸盐缓冲液（0.1 M）和2%多聚甲醛磷酸盐缓冲液（0.1 M）中固定4小时。1%四氧化锇再次固定2小时,通过一系列梯度乙醇脱水,嵌入环氧树脂中,然后通过超微切片机把嵌入环氧树脂块切成60纳米到80纳米超薄切片。超薄的切片放在碳涂层镍网格并用H-7500透射电镜在80千伏的条件下观察超薄切片。分析肝脏亚细胞结构的病理变化。5、液相芯片检测血清中TNF-α,IL-1,IFN-α,IL-6,IL-10炎症相关因子。通过Millipore公司合成含有TNF-α,IL-1,IFN-α,IL-6,IL-10因子的液相芯片试剂盒。按说明书进行实验操作。A.准备磁珠;B.准备质控对照品;C.准备洗脱液;D.准备标准品。1、每孔加200ul分析缓冲液,常温（20-25℃）浸泡1Omin。2、倒掉分析缓冲液,吸干。3、标准品、质控对照品,每孔加入相应的浓度25ul,空白对照及样品孔每孔加25ul分析缓冲液。4、除样品孔外,其它孔再加25ul分析缓冲液。5、样品孔加25ul血清样品。6、最后加混匀好的磁珠25ul,（注意:在添加珠子时,应间歇性地混匀磁珠瓶,避免结晶）。7、4℃避光、震荡孵育过夜。8、用磁力架吸住微磁珠,甩去里面的液体,再加洗脱液,常温洗脱30s,吸住微磁珠1min,再次甩掉液体,重复2次。9、每孔加50ul反应抗体

关键词：三黄茵赤汤慢加急性肝衰竭 ape1/ref-1 p53 半胱氨酸蛋白酶3

三羟异黄酮调控ape1/ref-1和wtp53交互作用对A549细胞放疗的影响及机制研究

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三羟异黄酮调控Ape1/Ref-1和wtp53交互作用对A549细胞放疗的影响...

作者：张翀第三军医大学

学位级别：硕士

研究背景：肺癌的发生率与死亡率均占恶性肿瘤首位，其中80～85%为非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer, NSCLC)。目前以手术、放疗、化疗和靶向治疗为主的肺癌综合治疗疗效仍然欠佳，进一步提高NSCLC疗效是当前肿瘤学领域亟待解... 详细信息

研究背景：肺癌的发生率与死亡率均占恶性肿瘤首位，其中80～85%为非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer, NSCLC)。目前以手术、放疗、化疗和靶向治疗为主的肺癌综合治疗疗效仍然欠佳，进一步提高NSCLC疗效是当前肿瘤学领域亟待解决的问题。氧化应激与肿瘤进展关系密切,研究表明脱嘌呤脱嘧啶核酸内切酶（apurinic/apyrimidinic endonuclease, ape1/ref-1）和wtp53作为众多的氧化应激因子之一具有突出作用。ape1/ref-1是一种独特的DNA损伤修复、氧化还原和参与RNA代谢的多功能蛋白，除了与肿瘤发生发展有关外，它还涉及氧化应激、细胞周期调控及凋亡等多种关键细胞功能，其表达升高能明显增加NSCLC的放射敏感性从而促进细胞凋亡。抑癌基因p53作为“基因卫士”能编码序列特异性转录因子，从而诱导细胞逃逸和凋亡，维持细胞周期完整、DNA损伤修复和基因的稳定性。三羟异黄酮（genistein, GEN）是大豆中的主要异黄酮成分，研究报道其能有效降低氧化应激诱导的ape1/ref-1蛋白表达却上调野生型p53蛋白表达。目前研究发现野生型p53作为ape1/ref-1的转录负调节因子，可以抑制ape1/ref-1蛋白的表达，而ape1/ref-1可通过氧化还原依赖和氧化还原非依赖两条途径调节p53蛋白的DNA结合活性，从而促进下游p21,BAX,Bcl-2等凋亡基因的转录激活。故ape1/ref-1和p53交互作用可能是三羟异黄酮介导非小细胞肺癌放疗增敏的重要核心事件。然而，ape1/ref-1和p53不仅具有相互调控作用，在肺腺癌和宫颈癌细胞中还存在内源性和外源性结合作用，故研究并阐明二者的结合情况及其机制以及三羟异黄酮介导ape1/ref-1和p53相互调控作用对A549细胞放疗的影响及机制，对以ape1/ref-1为靶分子的三羟异黄酮增敏肺癌放射治疗研究，探讨与肿瘤放化疗抵抗之间的关系进一步提供实验基础。研究目的： 1．研究三羟异黄酮(genistein, GEN)下调肺腺癌A549细胞ape1/ref-1(apurinic/apyrimidinic endonuclease1/redox factor-1)、上调p53表达以及三羟异黄酮对A549细胞增殖凋亡的作用,探讨三羟异黄酮调节ape1/ref-1和p53交互作用对肺癌放疗的影响及机制,为以ape1/ref-1为靶分子的三羟异黄酮增敏肺癌放射治疗转化研究提供实验基础。 2．研究ape1/ref-1(apurinic/apyrimidinic endonuclease1/redox factor-1)和p53蛋白相互结合及结合的分子机制，从而进一步探讨相互间转录调控与肿瘤放化疗抵抗的关系并奠定实验基础。研究方法： 1．三羟异黄酮(genistein,GEN)单独及联合放疗对A549细胞增殖凋亡的影响观察：细胞存活实验检测不同浓度三羟异黄酮单独作用A549细胞不同时间，细胞的生长抑制情况;锥虫蓝染色计数三羟异黄酮和放疗联合或不联合处理A549细胞后第2-6天的存活数量。 2．三羟异黄酮调节ape1/ref-1和p53蛋白表达对三羟异黄酮单独及联合放疗促进A549细胞照射后凋亡的影响观察：Western blot检测不同浓度三羟异黄酮单独作用A549细胞不同时间，三羟异黄酮单独及联合放疗作用A549细胞后， ape1/ref-1蛋白和p53蛋白的表达。 ***1/ref-1和p53的相互调控作用：共转染ape1/ref-1启动子荧光报告基因载体和不同量WTp53表达质粒于A549细胞，Western blot实验检测细胞内ape1/ref-1表达，双荧光素酶报告基因实验检测野生型p53对ape1/ref-1启动子区转录活性的调节;EMSA实验观察p53蛋白的DNA结合活性在三羟异黄酮的作用下的变化。 ***1/ref-1和p53内源性和外源性结合作用的研究探讨：免疫共沉淀和GST-pulldown沉降试验观察ape1/ref-1蛋白和p53蛋白的内源性和外源性结合情况，同时免疫荧光观察过氧化氢处理或不处理条件下，细胞中ape1/ref-1和p53蛋白的亚细胞共定位情况。研究结果： 1．三羟异黄酮(genistein,GEN)单独及联合放疗对A549细胞增殖凋亡的观察：细胞生存实验（MTT）结果显示三羟异黄酮单独及联合放疗对A549细胞增殖抑制率呈剂量和时间依赖性，即三羟异黄酮抑制放疗照射后A549细胞的增殖存活，且浓度越高，作用时间越长，增殖抑制率越高;锥虫蓝染色细胞计数实验分别计数对照组，单纯药物组，单纯照射组，药物联合照射组，A549细胞第2-6天的存活细胞数显示三羟异黄酮联合放疗明显抑制A54

关键词：肺腺癌三羟异黄酮 ape1/ref-1 野生型p53 放射治疗细胞凋亡内源性外源性相互结合

下调ape1/ref-1在Genistein防护放射性肺损伤和PDT对非小细胞肺癌杀伤作用的实验研究

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下调Ape1/Ref-1在Genistein防护放射性肺损伤和PDT对非小细胞肺癌...

作者：夏蕾第三军医大学

学位级别：硕士

放射性肺损伤(Radiation-induced lung injury, RILI)是战时或平时如核武器损伤、核辐射事故、造血干细胞移植预处理以及胸部肿瘤放疗的常见严重并发症，且目前的临床救治措施并不能有效预防或转归放射性肺炎及进一步的纤维化，病死率... 详细信息

放射性肺损伤(Radiation-induced lung injury, RILI)是战时或平时如核武器损伤、核辐射事故、造血干细胞移植预处理以及胸部肿瘤放疗的常见严重并发症，且目前的临床救治措施并不能有效预防或转归放射性肺炎及进一步的纤维化，病死率极高。制约放射性肺损伤治疗的关键问题一个是DNA氧化损伤，一个是含氧中间产物活性氧(reactive oxygen species，ROS)驱动氧化应激、启动肺泡Ⅱ型上皮细胞和血管内皮细胞等靶细胞产生的炎性细胞因子级联反应。对于DNA氧化损伤，电离辐射的生物学研究表明，细胞DNA是电离辐射(IR)最为主要的靶分子，IR可通过直接电离和ROS间接作用致细胞嘌呤和嘧啶碱基氧化、碱基缺失(AP位点)以及单链断裂进而形成双链断裂，人体细胞乃至所有生物细胞都存在着核苷酸切除修复、碱基切除修复、双链断裂修复和错配修复等四个较为完善的DNA修复通路，这是细胞维持基因组稳定和完整的一种基本防御及保护机制。目前的研究表明，脱嘌呤脱嘧啶核酸内切酶(apurinic/apyrimidinic endonuclease1,ape1)又称为氧化还原因子(redox factor-1，ref-1)，它不仅是DNA碱基切除修复途径的主要限速酶，还是一种能通过调控多种转录因子氧化还原状态，对氧化应激诱导细胞凋亡具有防御作用的保护基因。已有研究提示辐射诱导的核转录因子-κB(NF-κB)可能在调节炎性细胞因子级联反应产生非靶向性效应，从而在介导和放大放射性肺损伤中发挥关键作用，针对抑制NF-κB活性的研究将可能为开发放射性肺损伤特殊的治疗方法提供一个平台。多酚类小分子化合物三羟基异黄酮具有下调辐射所致ape1/ref-1表达增加从而抑制NF-κB DNA结合活性功能。但目前关于ape1/ref-1蛋白在放射性肺损伤的表达特点、规律及作用机制尚不清楚，也无明确有效的RILI防治措施，严重制约着放射性肺损伤的防治，研究阐明这些问题对提高放射性肺损伤的救治水平有非常重要的意义。研究目的 1.研究三羟异黄酮(genistein, GEN)下调ape1/ref-1的表达对放射性肺损伤的保护作用及其分子机制，为防治放射性肺损伤提供理论依据。 2.研究Ad5/F35-ape1siRNA重组腺病毒联合血卟啉衍生物（hematoporphrphyrinderivative, HpD）介导的光动力疗法（photodynamic therapy, PDT）对人肺腺癌细胞A549的杀伤作用及其分子机制，进一步验证在放射性肺损伤防护中ape1/ref-1-NF-κB的作用途径，理论上进一步丰富我们对ape1/ref-1分子生物功能的认识。研究内容和方法 1. Ad5/F35-ape1siRNA重组腺病毒的构建、扩增;2.三羟异黄酮防护放射性肺损伤的效应观察：建立三羟异黄酮及氨磷汀防护放射性肺损伤小鼠模型（与对照组比较）：不同时间给予三羟异黄酮及氨磷汀，检测组织病理形态、肺组织羟脯氨酸含量;应用液相芯片法、双抗体夹心法、ROS特异性荧光探针技术检测血清、肺泡灌洗液中炎性细胞因子（IL-1、TNF-α、IL-6、TGFβ1）/炎性细胞数和胞内ROS含量的改变;以明确三羟异黄酮的防护效应、给药时机、量效和时效关系，为下一步实验做准备;3.三羟异黄酮防护放射性肺损伤靶细胞（肺泡II型上皮细胞和内皮细胞）的机制探讨：应用对照研究，采用Western blot法及EMSA等技术检测三羟异黄酮下调辐射所致ape1/ref-1表达增加;三羟基异黄酮下调ape1/ref-1表达对NF-κB活性的影响;4.调控ape1/ref-1对协同效应的影响及可能机制：应用外源性干预（ape1/ref-1RNAi转染）对A549细胞增殖抑制影响;Western blot法及EMSA法分别检测ape1蛋白的表达及NF-κB活性影响来验证下调ape1/ref-1与NF-κB的协同效应及可能机制。研究结果 1.三羟异黄酮防护放射性肺损伤的效应观察：病理检测显示照射后时间越长，放射性肺损伤小鼠肺纤维化越重，三羟异黄酮能减轻肺组织炎症及纤维化;照射后小鼠血清及肺泡灌洗液中TGF-β1、IL-6、IL-1和TNF-α等炎性因子和肺组织羟脯氨酸的含量也呈递增趋势，三羟异黄酮能降低各种炎性因子和羟脯氨酸的含量(Pape1蛋白及NF-ΚB表达的升高（Pape1/ref-1对NF-κB协同效应的影响：HpD-PDT

关键词：人肺腺癌细胞放射性肺损伤三羟异黄酮 ape1/ref-1 光动力学疗法血卟啉衍生物 Ad5/F35-ape1 siRNA 重组腺病毒 ROS NF-κB 炎性因子羟脯氨酸

ape1/ref-1在肿瘤治疗中的应用前景

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天津医科大学学报 2011年第4期17卷 574-577页

作者：多健韩秀鑫应国光王国文天津医科大学肿瘤医院骨与软组织肿瘤科教育部乳腺癌防治重点实验室天津市肿瘤防治重点实验室天津300060

脱嘌呤／脱嘧啶核酸内切酶1／氧化还原因子-1（apurinic／apyrimidinic endonuclease／redox factor-1，ape1／ref-1）是生物体中一种重要酶类，是一个多功能蛋白。ape1在DNA碱基切除修复途径（BER）中作为人类中最主要的AP（脱嘌呤脱... 详细信息

脱嘌呤／脱嘧啶核酸内切酶1／氧化还原因子-1（apurinic／apyrimidinic endonuclease／redox factor-1，ape1／ref-1）是生物体中一种重要酶类，是一个多功能蛋白。ape1在DNA碱基切除修复途径（BER）中作为人类中最主要的AP（脱嘌呤脱嘌啶）内切酶，占到AP内切酶活性总体的95％，是保护细胞免除多种DNA损伤药物毒性作用的必须酶。

关键词： ape1/ref-1 DNA损伤修复肿瘤靶向治疗

中国东部地区人群ape1/ref-1基因启动子-141T/G遗传变异与脑胶质瘤临床研究

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同济大学学报（医学版） 2013年第4期34卷 44-49页

作者：徐斌斌周可可杜固宏上海市普陀区人民医院神经外科上海200060 复旦大学附属华山医院神经外科上海200040

目的研究中国东部地区人群apel／ref-1基因启动子-141T／G遗传变异与脑胶质瘤相关性。方法采用MassARRAY SequenomSNP时间飞行质谱生物芯片系统检测中国东部766例胶质瘤患者（241例胶质母细胞瘤，284例星型细胞瘤l～3级，241例其他胶质... 详细信息

目的研究中国东部地区人群apel／ref-1基因启动子-141T／G遗传变异与脑胶质瘤相关性。方法采用MassARRAY SequenomSNP时间飞行质谱生物芯片系统检测中国东部766例胶质瘤患者（241例胶质母细胞瘤，284例星型细胞瘤l～3级，241例其他胶质瘤）和824例非肿瘤对照组的apel／ref-1-141T／G多态性。并使用非条件logistic回归分析计算比数比（ORs）和95％可信区间（CIs）。结果apel／ref-1基因启动子-141T／G多态性与胶质瘤之间无明显联系。组织学分层分析结果提示等位基因G显著降低胶质瘤风险（OR=0．80，95％CI=0．65～0．98，P=0．032）。与携带TT个体相比，携带-141GG基因型的个体患胶质母细胞瘤的风险低（OR=0．54，95％CI 0．34～0．87，P=0．012）。结论ape1／ref-1启动子特异遗传变异可能调节个体胶质母细胞瘤而非其他类型胶质瘤的发生风险。

关键词： DNA修复胶质瘤 ape1/ref-1 临床研究