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蕙兰Cfaoc基因的克隆及表达分析

北方园艺 2015年第14期 84-89页

作者：周银王松太董坤洪华珠葛晓霞武汉生物工程学院生命科学与技术学院湖北武汉430415 华中师范大学昆虫学研究所湖北武汉430079

以野生蕙兰为试材,利用分子手段解析Cfaoc(allene oxide cyclase,丙二烯氧化物环化酶)在蕙兰花香合成途径中的作用,同时为揭示蕙兰花香合成的分子机制提供理论依据。结果表明:分别以蕙兰基因组DNA和cDNA为模板PCR扩增出Cfaoc基因的全长... 详细信息

以野生蕙兰为试材,利用分子手段解析Cfaoc(allene oxide cyclase,丙二烯氧化物环化酶)在蕙兰花香合成途径中的作用,同时为揭示蕙兰花香合成的分子机制提供理论依据。结果表明:分别以蕙兰基因组DNA和cDNA为模板PCR扩增出Cfaoc基因的全长序列和CDS序列,比较发现Cfaoc基因由3个外显子和2个内含子构成,亚细胞定位预测该蛋白位于叶绿体中,氨基酸序列分析显示该基因编码的蛋白含有保守的丙二烯氧化物环化酶结构域,进化树结果也表明Cfaoc与其它植物的aoc同源性较高,都参与茉莉酸及其衍生物的合成代谢。Cfaoc基因的时空特异性表达分析发现该基因在蕙兰盛花期时的花中表达量最高,暗示该基因可能与蕙兰花香合成有关。

关键词：蕙兰 aoc基因茉莉酸合成途径表达分析

海莲耐盐基因aoc克隆及转录融合表达载体的构建

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热带作物学报 2006年第3期27卷 56-60页

作者：段瑞军郭建春胡新文刘国道符少萍中国热带农业科学院热带生物技术研究所热带作物生物技术国家重点实验室海口571101

利用RT-PCR的方法从红树林海莲中克隆丙二烯环化氧化酶基因(aoc),并进行序列测定和BLAST程序进行同源序列分析。从RT-PCR得到的产物,其核苷酸序列与GeneBank中海莲丙二烯环化氧化酶基因AO(CBAB21610)的核苷酸序列完全相同。aoc基因通过... 详细信息

利用RT-PCR的方法从红树林海莲中克隆丙二烯环化氧化酶基因(aoc),并进行序列测定和BLAST程序进行同源序列分析。从RT-PCR得到的产物,其核苷酸序列与GeneBank中海莲丙二烯环化氧化酶基因AO(CBAB21610)的核苷酸序列完全相同。aoc基因通过中间载体pBS-aoc,pJIT60-aoc,最后克隆到植物表达载体pGreenII0229上,得到双35S的pGreenII0229-aoc植物表达载体。aoc基因和ipt基因通过中间载体pBS-aoc,pBS-ipt,pBS-aoc-ipt,pJIT60-aoc-ipt;最后将aoc和ipt基因以转录融合的方式克隆到植物表达载体pGreenII0229上,得到具有双35S启动子的aoc,ipt双基因转录融合的植物表达载体pGreenII0229-aoc-ipt。

关键词： aoc基因 ipt基因 2S0229-aoc植物表达载体 2S0229-aoc—ipt转录融合植物表达载体

红树林耐盐基因（aoc）的克隆及其转化热研五号柱花草的初步探讨

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红树林耐盐基因（AOC）的克隆及其转化热研五号柱花草的初步探讨

作者：段瑞军华南热带农业大学

学位级别：硕士

丙二烯环化氧化酶aoc能把一种不稳定的具有立体特异性的丙二烯环化物催化氧化成(9S, 13S)-12-O-(10，15Z)-植物二烯酸，此植物二烯酸是茉莉酸的最终前体。aoc是一种二聚体酶。此二聚体酶已被纯化出来，并且发现它的两个亚基具有一致的N... 详细信息

丙二烯环化氧化酶aoc能把一种不稳定的具有立体特异性的丙二烯环化物催化氧化成(9S, 13S)-12-O-(10，15Z)-植物二烯酸，此植物二烯酸是茉莉酸的最终前体。aoc是一种二聚体酶。此二聚体酶已被纯化出来，并且发现它的两个亚基具有一致的N端肽，故此，推论丙二烯环化氧化酶是同源二聚体蛋白并通过N端加工后形成的。红树林海莲[Bruguiera sexangula(Lour．)Poir]的aoc和西红柿、拟南芥植物中的aoc相比较具有较高的同源性，但西红柿和拟南芥植物中的aoc没有表现出增强耐盐特性，而海莲的aoc具有明显的增强耐盐性。通过功能区分析，发现海莲植物中的aoc蛋白有一个不寻常的70个氨基酸的序列，它与耐盐特性密切相关。基于这个不寻常的功能区，把红树林aoc同源物统称为“mangrin”。本研究从红树林海莲植物中提取总RNA，根据GeneBank中查到的海莲aoc mRNA全序列设计引物，通过RT-PCR分离海莲aoc基因。该基因编码区为768bp，加上终止密码子为771bp，共编码256个氨基酸。我采用了不同的方式构建了两组aoc植物表达载体。双组成型35S启动子，Bar基因抗性筛选的aoc基因和细胞分裂素合成酶基因ipt转录融合表达载体，35S-35S-0229aoc：：：ipt;单组成型35S启动子，Bar基因抗性筛选的aoc基因和细胞分裂素合成酶基因ipt转录融合表达载体，35S-0229aoc：：：ipt;本研究经过大量的实验，建立了适合报告基因Bar基因的优化热研五号柱花草遗传转化体系。通过农杆菌GV3101介导，侵染热研五号柱花草外植体(子叶和下胚轴)，将35S-35S-0229aoc：：：ipt转录融合表达载体导入热研五号柱花草，最终获得了12个能在Glufosinate抗性培养基上生长的愈伤组织。

关键词： aoc基因 ipt基因热研五号柱花草转录融合遗传转化体系

唐菖蒲丙二烯氧化物环化酶基因Ghaoc的克隆与表达分析

同方学位论文库评论

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同方学位论文库

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中国农业大学学报 2012年第5期17卷 46-53页

作者：连青龙李晓昕钟雄辉尹义蕾义鸣放农业部规划设计研究院设施农业研究所北京100125 中国农业大学农学与生物技术学院北京100193

克隆唐菖蒲aoc基因的全长cDNA序列,并分析该基因的表达模式及其对茉莉酸(Jasmonic acid,JA)生物合成的影响。以唐菖蒲栽培品种‘Rose Supreme’的球茎为试材,利用RT-PCR和RACE技术克隆aoc基因的全长cDNA序列;利用基因枪方法进行Ghaoc基... 详细信息

克隆唐菖蒲aoc基因的全长cDNA序列,并分析该基因的表达模式及其对茉莉酸(Jasmonic acid,JA)生物合成的影响。以唐菖蒲栽培品种‘Rose Supreme’的球茎为试材,利用RT-PCR和RACE技术克隆aoc基因的全长cDNA序列;利用基因枪方法进行Ghaoc基因的亚细胞定位分析;运用实时荧光定量PCR技术分析Ghaoc基因的表达模式。克隆了1个全长为898bp的茉莉酸生物合成关键酶丙二烯氧化物环化酶(allene oxide cyclase,aoc)基因的cDNA序列,命名为Ghaoc。该序列含有1个735bp的开放阅读框(ORF),编码244个氨基酸,推导的蛋白质分子量为26.52ku。亚细胞定位分析表明Ghaoc是叶绿体蛋白。实时荧光定量RT-PCR表达分析显示,该基因在唐菖蒲叶、花、根、匍匐茎、新球茎和籽球上都表达,其中在新球茎和籽球中表达量最高;经过0.1～0.5mmol/L的MJ(methyl jasmonate,茉莉酸甲酯)处理后,逐渐提高了Ghaoc基因在球茎中的表达量和内源MJ含量。Ghaoc基因的表达促进了唐菖蒲茉莉酸的生物合成。

关键词：唐菖蒲 aoc基因 JA 克隆表达

金鱼草丙二烯环化酶基因Amaoc的克隆及表达分析

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分子植物育种 2017年第9期15卷 3489-3496页

作者：刘晓慧冷平生胡增辉北京农学院园林学院北京102206 北京林果业生态环境功能提升协同创新中心北京102206

作为植物信号分子的茉莉酸(JA)参与植物的发育与代谢过程,丙二烯环化酶(aoc)是JA合成途径的关键酶。在本研究中,利用同源克隆结合RACE技术从金鱼草中克隆aoc基因,命名为Am aoc。Am aoc基因开放阅读框长762 bp,由254个氨基酸残基组成,该... 详细信息

作为植物信号分子的茉莉酸(JA)参与植物的发育与代谢过程,丙二烯环化酶(aoc)是JA合成途径的关键酶。在本研究中,利用同源克隆结合RACE技术从金鱼草中克隆aoc基因,命名为Am aoc。Am aoc基因开放阅读框长762 bp,由254个氨基酸残基组成,该基因包含一个Alleneoxcyc结构域,有两个内含子和三个外显子。同源比对分析结果表明Am aoc与其他植物的aoc有较高的同源性。Am aoc基因在不同组织中的表达分析发现金鱼草花中的Am aoc相对表达量较高,不同花期金鱼草RT-PCR表明,花蕾期的Am aoc相对表达量最高,盛花期的不同花器官荧光定量PCR分析表明,金鱼草花筒和花萼中Am aoc相对表达量较高。

关键词：金鱼草 aoc基因基因克隆表达分析

苹果丙二烯氧化物环化酶基因Mdaoc1的克隆与表达分析

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林业科学 2013年第12期49卷 73-80页

作者：曹晏彬柏素花戴洪义青岛农业大学园艺学院青岛266109 青岛农业大学生命科学学院青岛266109

丙二烯氧化物环化酶(aoc)是茉莉酸生物合成途径中一个关键酶,在植物抗逆境反应中发挥重要作用。用电子克隆结合RACE技术,从苹果‘嘎拉’中克隆并鉴定1个aoc编码基因,命名为Mdaoc1。Mdaoc1基因开放阅读框长759 bp,编码1个由252个氨基酸... 详细信息

丙二烯氧化物环化酶(aoc)是茉莉酸生物合成途径中一个关键酶,在植物抗逆境反应中发挥重要作用。用电子克隆结合RACE技术,从苹果‘嘎拉’中克隆并鉴定1个aoc编码基因,命名为Mdaoc1。Mdaoc1基因开放阅读框长759 bp,编码1个由252个氨基酸组成的蛋白,该蛋白包含1个保守的Allene_ox_cyc结构域,并带有1个N-末端叶绿体前导肽。同源性分析表明,Mdaoc1蛋白与水稻、拟南芥等aoc蛋白具有高度的氨基酸序列相似性,其三级结构模型是由3条链组成的疏水结合空穴,同拟南芥aoc2的蛋白三级结构相似。利用实时荧光定量RT-PCR方法测定Mdaoc1基因的表达情况,发现Mdaoc1具有组织特异性,在茎中表达最高;Mdaoc1不仅能被机械伤所诱导,而且能被外源激素MeJA、SA处理所诱导。结果暗示Mdaoc1基因可能参与苹果对生物或非生物胁迫的防御反应。

关键词：苹果 aoc基因茉莉酸基因克隆基因表达