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现代农业科技 2020年第15期 57-59页

作者：印迈吴玉杰蔡梦续晨张文学蔡小宁南京晓庄学院食品科学学院江苏南京211171

检测了一个具有紫黑色果肉的苹果的anr基因,发现了该基因被沉默。为了分析其沉默的原因,通过试验分析了该启动子序列上的顺式作用元件、内含子序列、外显子序列等的变异。结果表明,其anr基因沉默可能是由内含子产生的变异引起,上述研究... 详细信息

检测了一个具有紫黑色果肉的苹果的anr基因,发现了该基因被沉默。为了分析其沉默的原因,通过试验分析了该启动子序列上的顺式作用元件、内含子序列、外显子序列等的变异。结果表明,其anr基因沉默可能是由内含子产生的变异引起,上述研究结果为今后的进一步研究打下了基础。

关键词：苹果 anr基因内含子基因沉默

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原花青素合成关键基因anr表达载体构建与姬凤梨的遗传转化

原花青素合成关键基因ANR表达载体构建与姬凤梨的遗传转化

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作者：雍伟海南大学

学位级别：硕士

凤梨科(Bromeliea)植物为多年生单子叶草本植物,是仅次于兰花、红掌的第三大热带观赏花卉。姬凤梨(Cryptanthus bivittatus)几乎无直立茎。叶片从短缩茎上密集丛生,每株上有数片叶子,水平伸展呈“莲座状”,叶片坚硬,边缘呈波状,且具有软... 详细信息

凤梨科(Bromeliea)植物为多年生单子叶草本植物,是仅次于兰花、红掌的第三大热带观赏花卉。姬凤梨(Cryptanthus bivittatus)几乎无直立茎。叶片从短缩茎上密集丛生,每株上有数片叶子,水平伸展呈“莲座状”,叶片坚硬,边缘呈波状,且具有软刺,叶片呈条带形,有两条紫红色纵向条斑,基部暗红色,叶背面有白色的粉状物,叶质硬。本研究以姬凤梨无菌苗叶片基部为外植体,建立了姬凤梨再生和遗传转化体系;同时从红掌阿拉巴马佛焰苞中分离原花青素合成关键基因anr全长cDNA,插入表达载体CaMV35S-GUS构建成植物表达载体CaMV35S-GUS-anr,利用农杆菌介导的方法将anr基因转入姬凤梨中,对转基因植株通过PCR、GUS组织化学染色等方法进行了检测,并观察了转基因植株的表型。主要结果如下：(1)建立了姬凤梨的再生体系：诱导多芽体的培养基为：MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.2mg/L+30g/L蔗糖+7.0mg/L琼脂粉,PH5.8;芽伸长培养基为：MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.01mg/L+30g/L蔗糖+7.0mg/L琼脂粉,PH5.8;生根培养基为：MS+NAA0.5mg/L+30g/L蔗糖+7.0mg/L琼脂粉,PH5.8。(2)建立了姬凤梨的遗传转化体系：筛选出G418的半致死浓度为50mg/L,致死浓度为60mg/L;选择培养基中羧苄青霉素的浓度为500mg/L;农杆菌最佳的侵染时间为20min,侵染液OD600=0.8时姬凤梨的转化效率最佳。(3)从红掌阿拉巴马佛焰苞中提取RNA并反转录成单链cDNA,利用PCR技术扩增原花青素合成关键基因anr的cDNA全长。(4)构建了anr的植物表达载体：将目的基因anr的全长cDNA插入到表达载体CaMV35S-GUS的多克隆位点区域,完成植物表达载体CaMV35S-GUS-anr的构建。(5)转基因植株的分子检测：提取姬凤梨转基因植株叶片的DNA和RNA,利用PCR和RT-PCR技术检测结果表明,转基因植株的阳性转化率为67%,转化后的基因均可稳定表达。(6)转基因植株的组织化学染色：对转化后的姬凤梨叶片进行GUS组织化学染色,转基因凤梨叶片出现了蓝色斑点,而非转基因凤梨叶片没有出现蓝色,这表明,表达载体上的GUS报告基因已经整合到受体细胞基因组DNA。(7)转基因植株的表型观察：转基因姬凤梨的叶片颜色发生了变化,由野生型的紫红色转变为纯绿色,叶片形状有略微的改变。

关键词：姬凤梨 anr基因表达载体农杆菌遗传转化基因功能

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杉木涩籽形成过程的花青素还原酶基因表达

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森林与环境学报 2019年第1期39卷 1-8页

作者：王培理挪张家君马志慧陈宇林思祖福建农林大学林学院福建福州350002 国家林业局杉木工程技术研究中心福建福州350002 福建农林大学生命科学学院福建福州350002

为探究杉木涩籽形成过程中,花青素还原酶(anr)基因在类黄酮生物合成途径中的分子调控机制,以种子为试验材料,通过RT-PCR结合RACE的方法对杉木anr基因进行全长克隆,运用q PCR技术分析不同涩籽率的杉木家系中anr基因在种子不同发育时期的... 详细信息

为探究杉木涩籽形成过程中,花青素还原酶(anr)基因在类黄酮生物合成途径中的分子调控机制,以种子为试验材料,通过RT-PCR结合RACE的方法对杉木anr基因进行全长克隆,运用q PCR技术分析不同涩籽率的杉木家系中anr基因在种子不同发育时期的表达模式。结果显示,克隆到的anr基因全长c DNA序列为1 357 bp,具有一个1 056 bp的开放阅读框,编码351个氨基酸。保守域预测显示anr蛋白属于SDR超家族,具有一个FR_SDR_e特异性结构域。q PCR结果发现,在高涩籽率杉木中,90、100 d的表达量一直显著高于中、低涩籽率杉木;而在中、低涩籽率杉木中,anr基因的表达模式仅仅是种子发育80 d时较高,之后明显下调。表明杉木涩籽率可能与其anr基因表达相关。

关键词：杉木 anr基因基因克隆序列分析表达模式

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