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构建治疗非酒精性脂肪性肝病的TREM2慢病毒载体

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空军军医大学学报 2024年第6期45卷 609-616页

作者：魏莉邵思佳芶恺琳高春辰秦鸿雁空军军医大学基础医学院医学遗传与发育生物学教研室陕西西安710032

目的构建TREM2不同截断体的慢病毒治疗载体,观察其在体外非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)条件下对aml12肝细胞的影响,为后续靶向巨噬细胞的治疗奠定理论基础。方法通过慢病毒包装的方式建立TREM2或可溶性TREM2(sTREM2)稳定转染aml12肝细胞系... 详细信息

目的构建TREM2不同截断体的慢病毒治疗载体,观察其在体外非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)条件下对aml12肝细胞的影响,为后续靶向巨噬细胞的治疗奠定理论基础。方法通过慢病毒包装的方式建立TREM2或可溶性TREM2(sTREM2)稳定转染aml12肝细胞系,利用qRT-PCR技术、Western blotting技术、流式细胞术检测转染效率,利用免疫荧光染色技术检测TREM2或sTREM2的表达和细胞定位;利用流式细胞术检测TREM2或sTREM2对体外NAFLD条件下细胞凋亡的影响和对静息态下细胞周期的影响;利用油红O染色观察脂质沉积变化情况。结果与对照组相比,稳定转染细胞系中TREM2和sTREM2 mRNA水平明显升高,蛋白表达量明显升高,提示成功建立稳定转染细胞系。在体外NAFLD条件下,过表达TREM2可减轻aml12肝细胞的凋亡和脂质沉积(P细胞数目比例减少(P细胞数目比例增多(P细胞数目比例减少(P细胞数目比例增多(P肝细胞中TREM2的过表达可减少肝细胞凋亡和脂质沉积,进而保护肝细胞在NAFLD条件下免受损伤。

关键词：非酒精性脂肪性肝病 aml12肝细胞 TREM2 细胞凋亡

硒代蛋氨酸抑制脂多糖诱导的aml12细胞氧化应激损伤的研究

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中国临床药理学杂志 2023年第14期39卷 2039-2043页

作者：张小鸿陆秋艳福建省疾病预防控制中心实验室生物安全与质量管理所福建福州350012

目的研究硒代蛋氨酸(SeMet)对脂多糖诱导的aml12细胞氧化应激损伤的保护作用及机制。方法 aml12细胞随机分为3组:正常组(不加任何药物刺激)、模型组(加10μg·mL^(-1)脂多糖)和实验组(10μg·mL^(-1)脂多糖+0.1μmol·L^(-1)SeMet)。... 详细信息

目的研究硒代蛋氨酸(SeMet)对脂多糖诱导的aml12细胞氧化应激损伤的保护作用及机制。方法 aml12细胞随机分为3组:正常组(不加任何药物刺激)、模型组(加10μg·mL^(-1)脂多糖)和实验组(10μg·mL^(-1)脂多糖+0.1μmol·L^(-1)SeMet)。每组细胞培养48 h后,以噻唑蓝(MTT)法检测细胞活力,以烟酸己可碱(Hoechst)染色及流式细胞术检测细胞凋亡情况,以荧光探针法检测活性氧(ROS)强度,以化学法检测丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSHx)及过氧化氢酶(CAT)水平,以蛋白质印迹(Western blot)法检测B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、核因子E2相关因子-2(Nrf-2)、Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1(Keap-1)及血红素氧合酶-1(HO-1)蛋白表达水平。结果正常组、模型组及实验组的细胞活力分别为0.41±0.02、0.32±0.03和0.40±0.02,细胞凋亡率分别为(5.38±0.28)%、(32.67±0.55)%和(9.34±0.66)%,细胞早期凋亡率分别为(2.34±0.25)%、(9.65±0.49)%和(1.17±0.10)%,细胞晚期凋亡率分别为(5.37±0.32)%、(15.42±0.87)%和(9.18±0.16)%,ROS荧光强度分别为15.62±0.46、52.39±2.13和23.64±0.41,MDA含量分别为(5.23±0.27)、(9.41±0.51)和(7.14±0.27)mmol·L^(-1),SOD活性分别为(132.83±20.54)、(75.32±5.55)和(98.34±4.55)U·L^(-1),GSHx活性分别为(54.28±2.92)、(34.47±1.67)和(45.06±1.65)mg·L^(-1),CAT活性分别为(253.61±9.65)、(72.58±2.81)和(196.69±9.49)U·mg-1,Bcl-2蛋白相对表达水平分别0.92±0.03、0.51±0.03和0.95±0.07,Bax蛋白相对表达水平分别为0.41±0.04、1.16±0.07和0.74±0.04,Nrf-2蛋白相对表达水平分别为0.79±0.03,0.16±0.03和0.76±0.03,Keap-1蛋白相对表达水平分别为1.21±0.05、0.56±0.03和1.06±0.08,HO-1蛋白相对表达水平分别1.02±0.03、0.28±0.03和1.01±0.04。正常组、实验组的上述指标与模型组比较,差异均有统计学意义(均Paml12肝细胞氧化应激损伤。

关键词：硒代蛋氨酸 aml12肝细胞氧化应激凋亡脂多糖

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金雀花碱在山豆根肝毒性中的作用

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中国实验方剂学杂志 2018年第15期24卷 176-181页

作者：樊海艇谷颖敏孙伟耿悦王莉萍金若敏张泽安田雪松上海中医药大学

目的：通过金雀花碱（CYT）体内和体外的肝毒性研究,探讨山豆根的肝毒性是否与CYT相关。方法：小鼠肝aml12细胞用于体外肝毒性研究,细胞增殖及细胞毒性检测（CCK-8）试剂盒检测细胞活性。分别加入终浓度为6,10,14 mmol·L（-1）的CYT,... 详细信息

目的：通过金雀花碱（CYT）体内和体外的肝毒性研究,探讨山豆根的肝毒性是否与CYT相关。方法：小鼠肝aml12细胞用于体外肝毒性研究,细胞增殖及细胞毒性检测（CCK-8）试剂盒检测细胞活性。分别加入终浓度为6,10,14 mmol·L（-1）的CYT,于加药后3,6,12,24 h,取细胞上清液,检测丙氨酸氨基转移酶（ALT）,天门冬氨酸氨基转移酶（AST）,总胆红素（TBIL）及乳酸脱氢酶（LDH）水平。急性毒性实验,小鼠分别单次口服灌胃24.8,33.1,44.2,58.9,78.5 mg·kg（-1）CYT,设空白组。亚慢性毒性实验,小鼠随机分为3组,分别口服灌胃超纯水,11.2,14.0 mg·kg（-1）CYT,连续90 d。第91天小鼠麻醉后取血清检测ALT,AST,TBIL,LDH等生化指标,并做肝脏病理切片。结果：CYT的半抑制浓度（IC50）为15.17 mmol·L（-1）。14 mmol·L（-1）CYT自6 h起,ALT,AST释放逐渐增加,于12 h达到峰值（P〈0.05,P〈0.01）,之后有下降趋势（P〈0.01）;14 mmol·L（-1）CYT早在给药6 h,LDH释放就已经显著升高（P〈0.01）,在12 h达到顶峰（P〈0.01）,在24 h有下降趋势（P〈0.01）;各浓度CYT在3,6,12,24 h时,较相应时间点空白组而言,TBIL释放均无显著性差异。在急性毒性实验,CYT的半数致死量（LD50）为48.16 mg·kg（-1）,属于全球化学品统一分类和标签制度（GSH）第2级。在亚慢性毒性实验,与空白组相比,CYT组小鼠血清ALT及LDH水平无明显差异;虽然CYT 14.0 mg·kg（-1）组小鼠血清TBIL含量升高（P〈0.05）,AST含量下降（P〈0.05）,但是均在本实验室背景数据范围内,与空白组相比,肝组织病理学切片亦无明显差异,这一结果可能与CYT14.0 mg·kg（-1）组小鼠一半死亡,导致血液生化及肝脏病理标本量减少相关。结论：CYT属于GSH分类的经口急性毒性2级毒性物质,其在体外培养条件下具有肝细胞毒性,但是其在体内的肝毒性以及是否为山豆根肝毒性的毒性成分需要进一步研究。

关键词：金雀花碱肝毒性小鼠 aml12肝细胞