检索结果-南通市图书馆

作者：赵珍华南理工大学

学位级别：硕士

研究背景肝癌是癌症相关死亡的第四大常见原因,发病率每年都在增加。在肝癌的早期阶段,手术切除和器官移植是治疗肝细胞癌(Hepatocellular Carcinoma,HCC)最有效的方式,但由于复发率与转移率较高,患者的总生存期并不理想;传统药物和索... 详细信息

研究背景肝癌是癌症相关死亡的第四大常见原因,发病率每年都在增加。在肝癌的早期阶段,手术切除和器官移植是治疗肝细胞癌(Hepatocellular Carcinoma,HCC)最有效的方式,但由于复发率与转移率较高,患者的总生存期并不理想;传统药物和索拉非尼对患者的生存收益有限,因此迫切需要寻找新的生物治疗策略。糖基化在多种细胞生理过程中都起重要作用,如信号识别、突触信号传导等;细胞糖基化蛋白是研发癌症药物的新靶点。α-1,3-甘露糖基转移酶(Alpha-1,3-mannosyltransferase,alg3)参与n-糖基化的合成,而n-糖基化蛋白上调已被证明与癌症进展有关。研究表明,alg3在口腔鳞状细胞癌、非小细胞肺癌、乳腺癌和急性髓细胞白血病中过表达,并对癌症的发展有重要作用。然而,alg3在HCC中的表达尚不清楚,其预后价值及其与HCC患者临床病理特征的相关性也未见研究报道。研究目标本研究旨在利用在线数据库及临床样本验证alg3在HCC中的表达及作用,并分析alg3的表达与临床特征及预后之间的关系,评估其对HCC病人的治疗价值。方法在TIMER2.0和HPA中检索alg3m RNA在所有肿瘤中的表达情况,下载公共数据库TCGA及GEO的肝癌患者资料,采用多数据库验证alg3在HCC患者中的表达情况,通过RT-q PCR和WB验证alg3的表达。选取本院行根治性手术并有病理诊断结果的患者纳入研究,通过IHC检测alg3在癌和癌旁组织中的表达,并按其表达高低分组探讨临床意义。通过KEGG、GO和GSEA富集分析预测HCC中与alg3相关的生物学途径。应用TIMER2.0评估alg3与免疫浸润的关系。结果TCGA、GEO发现alg3在HCC中表达上调;RT-q PCR、WB和IHC证实alg3在HCC癌组织中明显过表达。Kaplan-Meier分析证实alg3过表达与总生存率差相关(Palg3是HCC患者术后的一个独立危险预后因素。GSEA和TIMER2.0预测alg3参与细胞分化、调节细胞周期并与免疫细胞浸润相关。结论alg3在HCC中表达上调,高表达提示患者预后不良,是HCC患者的独立危险预后因素;有望成为评估肝癌患者生存的潜在指标,为HCC的诊治提供新的靶点。

关键词：肝细胞癌 alg3 预后临床意义免疫浸润

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alg3通过JAK2/STAT3通路影响乳腺癌发生发展的机制研究

ALG3通过JAK2/STAT3通路影响乳腺癌发生发展的机制研究

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作者：邢现菲蚌埠医学院

学位级别：硕士

目的:应用在线数据库获得乳腺癌患者相关病理和临床信息,分析乳腺癌中alg3基因表达与患者预后的相关性,研究正常乳腺上皮细胞与乳腺癌细胞之间alg3表达的差异,分析其对乳腺癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响,并研究其在JAK2/STAT3信号通路... 详细信息

目的:应用在线数据库获得乳腺癌患者相关病理和临床信息,分析乳腺癌中alg3基因表达与患者预后的相关性,研究正常乳腺上皮细胞与乳腺癌细胞之间alg3表达的差异,分析其对乳腺癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响,并研究其在JAK2/STAT3信号通路中的作用。方法:利用肿瘤基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)数据库,获得乳腺癌病人的基本信息和alg3的表达情况;Kaplan-Meier生存曲线分析不同α-1,3-甘露糖基转移酶(alpha-1,3-mannosyltransferase,alg3)表达水平与乳腺癌患者预后关系;使用人类蛋白质表达图谱(Human Protein Atlas,HPA)数据库分析alg3在人乳腺正常组织和癌组织中蛋白水平差异。通过Western blotting、q RT-PCR方法以检测alg3在HBL-100及多种乳腺癌细胞SKBr3、MCF-7、MDA-MB-231中的表达水平;通过Western blotting和q RT-PCR检测各组细胞转染alg3过表达/敲减序列后的蛋白和m RNA表达情况。对于alg3低表达乳腺癌细胞,通过体外集落克隆和CCK-8实验、体内裸鼠成瘤实验观察肿瘤细胞的活力和增殖情况,通过划痕实验测定肿瘤细胞的划痕愈合能力;通过Transwell实验检测乳腺癌细胞侵袭、迁移能力;Western blotting测定JAK2/STAT3信号通路中相关分子的表达。对于alg3过表达乳腺癌细胞,采用通路抑制剂WP1066抑制JAK2/STAT3通路,通过Western blotting检测该抑制剂对JAK2/STAT3通路的抑制效率,再通过集落克隆和Transwell实验观察对增殖、侵袭迁移的影响。结果:相关数据库的结果显示,与正常组织相比,alg3在包括乳腺癌在内的多种恶性肿瘤中都呈现出高度表达的状态,且主要在细胞膜和细胞质表达,同时还表现出alg3的表达水平越高,乳腺癌患者预后越差。Western blotting和q RT-PCR结果显示,与正常人乳腺上皮细胞HBL-100相比,alg3在MDA-MB-231和MCF-7细胞中的表达明显较高(P31细胞中敲减效率最佳的是alg3 Seq3(Palg3 Seq2(P31和MCF-7细胞中均具有统计学意义(Palg3的表达水平后,与NC-KD组相比,体外集落克隆和CCK-8实验结果表明,在MDA-MB-231、MCF-7细胞中,alg3-KD组细胞的增殖能力受到抑制(P31细胞的alg3-KD组肿瘤的肿瘤和体积都明显受到抑制(Palg3的表达可以抑制乳腺癌细胞的增殖能力;划痕实验和Transwell实验表明,MDA-MB-231和MCF-7细胞的alg3-KD组侵袭、迁移能力受到抑制(Palg3使MDA-MB-231和MCF-7细胞的JAK2/STAT3通路相关蛋白受到抑制,具体表现为JAK2/p-JAK2、STAT3/p-STAT3、MMP2、Cyclin-D1的表达水平下降,而促进凋亡的蛋白Bax升高,抑制凋亡的蛋白Bcl-2下降(P3通路后,Western blotting结果表现为,与alg3-OE组相比,alg3-OE+WP1066组JAK2/STAT3通路相关蛋白JAK2/p-JAK2、STAT3/p-STAT3受到抑制(Palg3-OE+WP1066组MDA-MB-231和MCF-7细胞增殖、侵袭和迁移能力受到抑制(P3通路后可以降低alg3对乳腺癌细胞增殖、侵袭迁移的影响。结论:alg3在乳腺癌中呈现高表达,且与预后呈负相关;在MDA-MB-231和MCF-7细胞中沉默alg3表达,增殖、侵袭迁移等受到抑制,JAK2/STAT3通路相关蛋白也会受到抑制;使用WP1066抑制JAK2/STAT3通路后,可以降低alg3对乳腺癌细胞增殖、侵袭迁移的影响。综上,alg3可能通过激活JAK2/STAT3通路促进乳腺癌细胞的增殖、侵袭和迁移。

关键词： alg3 乳腺癌 JAK2/STAT3通路

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alg3通过JAK/STAT通路促进三阴性乳腺癌增殖、侵袭和迁移

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山西医科大学学报 2023年第5期54卷 580-588页

作者：邢现菲李瑞华韩亚娟张竞竞邵渝欢马赛菲刘亚萌韩正全蚌埠医学院第一附属医院肿瘤内科蚌埠233000 蚌埠医学院第一附属医院消化内科蚌埠医学院第一附属医院耳鼻咽喉头颈外科

目的探讨alg3对乳腺癌细胞增殖、侵袭和迁移以及JAK/STAT信号通路的影响。方法 Western blot检测正常人乳腺上皮细胞HBL-100和乳腺癌细胞株SKBr3、MCF-7、MDA-MB-231中alg3的表达情况。Western blot检测过表达和敲减序列的转染效率。... 详细信息

目的探讨alg3对乳腺癌细胞增殖、侵袭和迁移以及JAK/STAT信号通路的影响。方法 Western blot检测正常人乳腺上皮细胞HBL-100和乳腺癌细胞株SKBr3、MCF-7、MDA-MB-231中alg3的表达情况。Western blot检测过表达和敲减序列的转染效率。先将实验分为control组(Lip 2000)、NC-KD组(Lip 2000+si-NC)和alg3-KD组(Lip 2000+alg3-siRNA),CCK-8,集落克隆和体内裸鼠成瘤实验检测乳腺癌细胞增殖能力;划痕实验和Transwell实验检测乳腺癌细胞侵袭和迁移能力;Western blot检测JAK/STAT通路相关蛋白JAK2/p-JAK2、STAT3/p-STAT3、MMP2、Cyclin D1、Bax表达情况。再将实验分为NC-OE组(Lip 2000+mimic-NC)、alg3-OE组(Lip 2000+alg3-mimic)和alg3-OE+WP1066组(Lip 2000+alg3-mimic+通路抑制剂WP1066),Western blot检测WP1066对JAK/STAT通路相关蛋白JAK2/p-JAK2、STAT3/p-STAT3的影响,集落克隆和Transwell实验检测抑制该通路后,alg3对乳腺癌细胞增殖和侵袭迁移能力的影响。结果与正常人乳腺上皮细胞HBL-100相比,alg3在SKBr3、MCF-7、MDA-MB-231细胞中的表达较高,以MDA-MB-231细胞中的升高水平最显著(Palg3-S3组alg3敲减效率最佳,alg3-mimic组过表达差异具有统计学意义(Palg3-KD组MDA-MB-231细胞增殖和侵袭迁移能力受到抑制(P3/p-STAT3、MMP2、Cyclin D1的表达水平下降,凋亡相关蛋白Bax升高(Palg3-OE组相比,alg3-OE+WP1066组JAK/STAT通路相关蛋白JAK2/p-JAK2、STAT3/p-STAT3及其磷酸化受到抑制(Palg3可能通过激活JAK/STAT通路促进三阴性乳腺癌细胞的增殖、侵袭和迁移。

关键词： alg3 JAK/STAT通路三阴性乳腺癌 MDA-MB-231细胞裸鼠

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植烷醇磷酸甘露糖的酶法合成及应用

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食品与生物技术学报 2020年第3期39卷 49-55页

作者：李盛陶王宁高晓冬江南大学生物工程学院江苏无锡214122 江南大学糖化学与生物技术教育部重点实验室江苏无锡214122

内质网(ER)腔内的甘露糖基化修饰共同存在于N-糖基化、糖基磷脂酰肌醇(GPI)锚定化、O-和C-甘露糖基化中,对于真核生物来说具有重要的作用。ER腔内的甘露糖基化的底物供体为多萜醇磷酸甘露糖(Dol-P-Man),因此Dol-P-Man的合成对于理解不... 详细信息

内质网(ER)腔内的甘露糖基化修饰共同存在于N-糖基化、糖基磷脂酰肌醇(GPI)锚定化、O-和C-甘露糖基化中,对于真核生物来说具有重要的作用。ER腔内的甘露糖基化的底物供体为多萜醇磷酸甘露糖(Dol-P-Man),因此Dol-P-Man的合成对于理解不同种类的糖基化修饰具有重要的意义。本研究原核表达纯化了酵母Dol-P-Man的合成酶(Dpm1),并鉴定了重要的DXD motif。利用纯化的Dpm1蛋白,及简单的植烷醇(Phytanol)代替复杂的多萜醇(Dolichol),体外酶法合成了Dol-P-Man的替代结构Phy-P-Man。在N-糖基化途径中alg3催化Dol-PP-GlcNAc2-Man5和Dol-P-Man生成Dol-PP-GlcNAc2-Man6。通过体外酶反应,本研究证明Phy-P-Man同样能够作为alg3的底物供体用于N-糖基化途径的研究,为以后合成高甘露糖型的N糖结构及GPI、O-和C-甘露糖基化的研究奠定了基础。

关键词：甘露糖基化 Dpm1 植烷醇 alg3

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α-1,3甘露糖基化在卵巢癌腹膜转移中的作用及机制研究

α-1,3甘露糖基化在卵巢癌腹膜转移中的作用及机制研究

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作者：裴晓松大连医科大学

学位级别：硕士

背景与目的:卵巢癌(ovarian cancer)是妇科三大恶性肿瘤之一,5年生存率仅为39%。其中高级别浆液性卵巢癌(HGSOC)预后最差,致死率最高[1]。临床诊断发现高级别浆液性卵巢癌症状时即为晚期并伴有腹腔扩散,主要症状包括不明的腹部不适、腹... 详细信息

背景与目的:卵巢癌(ovarian cancer)是妇科三大恶性肿瘤之一,5年生存率仅为39%。其中高级别浆液性卵巢癌(HGSOC)预后最差,致死率最高[1]。临床诊断发现高级别浆液性卵巢癌症状时即为晚期并伴有腹腔扩散,主要症状包括不明的腹部不适、腹胀、食欲减退、消化不良、盆腔或下腰痛,因此常常被误诊为肠道问题,这种非特异性的临床表现也是预后较差的主要原因[2]。因此研究高级别浆液性卵巢癌早期诊断生物标志物对疾病的发展过程具有重要影响。糖基化是最常见的蛋白质翻译后修饰,它通过影响糖蛋白的功能、稳定性和构象而发挥特定的生物学作用。蛋白质糖基化在肿瘤发生发展过程中具有调控作用影响肿瘤的变化。甘露糖基化是蛋白质糖基化的一种,研究发现雪花莲凝集素(Galanthus nivalis lectin,GNA)所识别的糖型结构为α-1,3甘露糖基化结构[3]。α-1,3甘露糖基化由α-1,3甘露糖基转移酶(α-1,3 mannosyltransferase,alg3)催化合成。有研究表明,alg3在乳腺癌、肺癌等肿瘤中显示异常高表达,具有不同程度上促进肿瘤转移的作用,但alg3在卵巢癌的发生发展中的作用及机制仍不清楚[4,5]。尿激酶型纤溶酶原激活物受体(u PAR)是一种分子量为55-60KDa的细胞膜表面糖蛋白,据报道u PAR高表达在所有人类癌症中,通过纤溶酶原激活级联反应将胞外蛋白水解,可赋予恶性肿瘤细胞高度蛋白水解和迁移能力[6]。但其是否具有甘露糖基化修饰,以及在高级别浆液性卵巢癌中的作用及机制尚不清楚。本研究通过比较高级别浆液性卵巢癌和正常卵巢组织中α-1,3甘露糖基化和α-1,3甘露糖基转移酶(alg3)的表达,分析alg3对高级别浆液性卵巢癌转移能力的影响,探究alg3调控靶蛋白的α-1,3甘露糖基化对卵巢癌腹膜转移作用的机制研究,并通过C57BL/6小鼠构建MOSEC(mouse ovary surface epithelial cells)腹腔转移瘤模型进一步探讨上皮性卵巢癌中alg3对小鼠腹膜转移的影响,为临床上卵巢癌诊断和治疗提供新的分子靶点[7]。方法:1.通过Real-time PCR、Western blot、生信分析和免疫组织化学检测α-1,3甘露糖基化和α-1,3甘露糖基转移酶(alg3)在高级别浆液性卵巢癌中与正常卵巢组织的表达情况。2.利用Western blot、Lectin blot、细胞免疫荧光方法对卵巢癌细胞(A2780)经转染敲低/过表达alg3后,检测GNA的表达情况。3.通过Western blot检测相关增殖蛋白指标表达情况,Ed U和平板克隆形成实验在细胞功能学方面检测卵巢癌细胞的增殖能力。4.通过Western blot检测EMT相关蛋白指标表达情况,并且收集细胞上清利用明胶酶谱法检测基质金属蛋白酶(MMP2/9)的活性。Transwell和黏附实验检测卵巢癌细胞转移能力的影响。5.构建u PAR-c DNA/u PAR-MUT糖基化位点突变质粒,通过Co-IP、细胞免疫荧光实验检测分别转染敲低/过表达alg3和u PAR糖基化位点突变后后,u PAR上的α-1,3甘露糖基化的表达情况以及与u PA的结合能力。6.通过Western blot、Transwell、黏附实验进一步探讨u PAR糖基化位点突变后对卵巢癌细胞迁移侵袭与腹膜间皮细胞黏附能力的影响。7.此外,构建C57BL/6小鼠MOSEC模型,检测敲低alg3和凝集素GNA封闭后对小鼠卵巢癌腹膜转移能力的影响。结果:***-time PCR、Western blot、生信分析和免疫组织化学结果显示,与正常卵巢组织相比,α-1,3甘露糖基化和α-1,3甘露糖基转移酶(alg3)在高级别浆液性卵巢癌中高表达。选取GEPIA数据库显示在卵巢癌患者中alg3高表达,通过Kaplan Meier分析表明,患者高表达alg3的生存期(OS)最短。*** blot、Lectin blot、细胞免疫荧光结果显示敲低/过表达alg3后可以抑制或促进A2780卵巢癌细胞α-1,3甘露糖基化的表达。*** blot、Ed U、平板克隆形成实验结果表明敲低/过表达alg3均可抑制或促进卵巢癌细胞的增殖能力。*** blot、Transwell和黏附实验结果显示敲低/过表达alg3可以抑制或促进卵巢癌细胞的迁移侵袭以及与腹膜间皮细胞的黏附能力。明胶酶谱实验显示细胞培养液中MMP2、MMP9的表达。结果表明,敲低/过表达alg3后,活化型MMP2及MMP9的表达降低或增高。***-IP和细胞免疫荧光实验结果显示敲低/过表达alg3后可以降低或增高u PAR上α-1,3甘露糖基化的修饰以及与u PA的结合能力

关键词： alg3 卵巢癌腹膜转移 uPAR

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