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拟南芥中Fibrillarin基因的克隆·表达·纯化及与ak6蛋白相互作用研究

安徽农业科学 2014年第1期42卷 20-23页

作者：李然田兆丰张飞云首都师范大学生命科学学院北京100048 北京市农林科学院植物保护环境保护研究所北京100097

[目的]研究拟南芥中Fibdllarin基因的克隆、表达及纯化，并探索其与ak6蛋白的相互作用。[方法]利用pGEX-6P-1与Fibrilla—r流基因构建重组表达质粒，将重组质粒转化到大肠杆菌BL21（DE3）中进行诱导表达，运用同样方法构建PET-28a—ak6... 详细信息

[目的]研究拟南芥中Fibdllarin基因的克隆、表达及纯化，并探索其与ak6蛋白的相互作用。[方法]利用pGEX-6P-1与Fibrilla—r流基因构建重组表达质粒，将重组质粒转化到大肠杆菌BL21（DE3）中进行诱导表达，运用同样方法构建PET-28a—ak6原核表达质粒，获得His—ak6融合蛋白，并运用体外pulldown技术验证二者的相互作用。f结果l在温度为37℃、诱导时间为16～20h、IPTG浓度为0．5mmol／L时，fibrillarin蛋白的纯化浓度最高。试验成功获得了符合标准的RNA，并获得了与预期片段大小相符的清晰的目的条带；pull—down试验结果表明，拟南芥中fibrillarin蛋白与ak6蛋白具有相互作用。[结论]拟南芥ak6突变体植株可能由于ak6的缺失影响了rRNA前体的加工，从而抑制核糖体的合成，进而阻碍拟南芥茎的生长，使植株表现明显的矮小症状。

关键词：拟南芥 fibrillarin蛋白 ak6

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拟南芥RPS14基因的克隆表达及功能初步研究

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生物技术通报 2013年第1期29卷 73-77页

作者：范艳荣刘莹张飞云首都师范大学生命科学学院北京100048

拟南芥RPS14(Ribosomal protein S14)是从拟南芥中分离出的一种核糖体蛋白,是核糖体40S亚基的组成成分,属于S11P核糖体蛋白家族,主要负责RNA转录后加工。提取拟南芥总RNA,用RT-PCR技术得到RPS14全长基因,经T-A克隆插入到pEASY-T3载体上... 详细信息

拟南芥RPS14(Ribosomal protein S14)是从拟南芥中分离出的一种核糖体蛋白,是核糖体40S亚基的组成成分,属于S11P核糖体蛋白家族,主要负责RNA转录后加工。提取拟南芥总RNA,用RT-PCR技术得到RPS14全长基因,经T-A克隆插入到pEASY-T3载体上。利用亚克隆法成功构建pGEX-6P-1-RPS14原核表达质粒。GST-RPS14融合蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)中表达,分子量约为43 kD。运用同样方法构建pET-28a-ak6原核表达质粒,获得大小约为26 kD的HIS-ak6融合蛋白。运用体外pull-down技术,并用SDS-PAGE和Western blot进行验证,证明拟南芥RPS14蛋白与ak6蛋白之间存在相互作用。因此,推测拟南芥的ak6与RPS14蛋白共同参与核酸代谢过程,影响RNA转录后加工,进而抑制拟南芥茎细胞的生长,使植株表现矮小特征。

关键词：拟南芥 RPS14 ak6 Pull-down

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