检索结果-南通市图书馆

作者：邱富娟南方医科大学

学位级别：硕士

研究背景类风湿关节炎（RA）是一种慢性自身免疫炎症性疾病,其特征是滑膜细胞过度增殖,单核细胞浸润到滑膜中,关节软骨和骨骼的早期破坏以及对肌肉骨骼系统造成进行性损伤,从而导致患者体能的丧失和生活质量下降。尽管21世纪开启了生物... 详细信息

研究背景类风湿关节炎（RA）是一种慢性自身免疫炎症性疾病,其特征是滑膜细胞过度增殖,单核细胞浸润到滑膜中,关节软骨和骨骼的早期破坏以及对肌肉骨骼系统造成进行性损伤,从而导致患者体能的丧失和生活质量下降。尽管21世纪开启了生物制剂以及小分子药物比如JAK抑制剂等治疗RA的新局面,但从NSAIDs到DMRADS和生物制剂的治疗仍然会引起严重的副作用,并且这些治疗手段仅诱导部分患者中引起缓解,使大多数受RA影响的个体依然存在持续的慢性炎症病理过程。IL-1β和IL-18在RA中的病理生理学中的作用已经确立。具有生物活性的IL-1β和IL-18的加工和释放取决于Caspase-1,而Caspase-1的激活需要炎性小体复合物的激活。其中研究最深入的例子是由NLR家族成员NLRP3组成的炎性小体,体内体外实验均支持NLRP3炎性小体参与了 RA的发病机制,但是目前对RA中aim2炎性小体认识尚不充分。因此,本次研究旨在探究aim2炎性小体在RA发病机理中的作用。研究内容第一章aim2通路在RA与OA血清和滑膜中表达差异研究目的观察aim2在RA与OA中血清中的水平,观察aim2炎性小体信号通路相关蛋白在RA与OA滑膜组织中的表达差异,并且分析aim2炎性小体信号通路蛋白表达水平与临床指标ESR、CRP的相关性。方法纳入符合分类标准的49例RA患者与25例OA患者的血清采用ELISA检测血清中aim2的表达水平。从南方医科大学中西医结合医院病理科中收集RA与OA膝关节炎滑膜组织分别41例和26例,行免疫组化染色,包括aim2、ASC、Caspase-1、IL-1 β,根据染色结果进行半定量H score评分,然后H score与相应患者的ESR、CRP进行相关性分析。结果在血清检测中,aim2的水平在OA和RA患者血清中的表达未观察到显著差异。RA滑膜组织中的aim2,ASC,Caspase-1和IL-1β的表达高于OA。aim2与 ESR 呈正相关（r=0.74,P＜0.001,95%CI:0.38-0.9）,ASC 与 ESR 呈正相关（r=0.5,P＜0.001,95%CI:0.16-0.74）,IL-1β 与 ESR呈正相关（r=0.62,P＜0.001,95%CI:0.31-0.81）。aim2 与 CRP 呈正相关（r=0.65,P＜0.003,95%CI:0.25-0.86）;ACS 与 CRP 呈正相关（r=0.42,P＜0.05,95%CI:0.05-0.69）;IL-1β与 CRP 呈正相关（r=0.41,P＜0.05,95%CI:0.05-0.67）与 CRP 呈正相关。结论RA滑膜组织中aim2炎性小体信号通路相关蛋白的表达高于OA滑膜组织,并与临床疾病活动指标正相关提示aim2炎性小体信号通路参与了 RA的发病机制。第二章aim2在RA与OA滑膜成纤维细胞中表达差异研究以及aim2在RASFs中的功能目的观察aim2在RA与OA滑膜成纤维细胞中的表达水平,并研究aim2在RA滑膜成纤维细胞中的功能。方法采用组织免疫荧光共染定位aim2在RA与OA滑膜组织中的表达,通过聚合酶链式反应、蛋白免疫印迹比较aim2在RA以及OA中的滑膜成纤维细胞中的表达情况。采用siRNA沉默RASFs中的aim2,采用CCK-8法、流式细胞术、transwell实验评估沉默aim2后RASFs的增殖、凋亡以及迁移能力。结果与OA相比,RA滑膜成纤维细胞中的aim2的mRNA及蛋白表达水平在RA中显著升高,差异具有统计学意义（P＜0.05）。siRNA沉默RASFs中aim2后,与对照组相比,RASFs的增殖能力减弱,凋亡率和迁移细胞数与对照组比较差异没有显著性。结论aim2在RA滑膜成纤维细胞中表达增高,沉默后可抑制滑膜成纤维细胞的增殖能力,可能为RA滑膜成纤维细胞相比OA或者健康对照者具有不同的生物学特征的物质基础。第三章三水白虎汤对aim2通路的作用目的研究三水白虎汤对aim2通路的调节作用。方法制备SSBH含药血清干预RA滑膜成纤维细胞,分别采用CCK-8法、划痕试验观察SSBH对RA滑膜成纤维细胞的增殖和迁移的影响,同时通过聚合酶链式反应、蛋白免疫印迹观察SSBH对aim2炎性小体信号通路中aim2、ASC、Caspase-1的mRNA以及蛋白水平的调节作用,采用ELISA观察SSBH对IL-1β的影响。结果在细胞增殖实验中,与NS组相比较,10%SSBH和20%SSBH干预RA滑膜成纤维细胞48h和72h均有抑制增殖的作用（P＜0.05）;在划痕实验中,10%SSBH和20%SSBH的平均愈合率均低于NS组,差异具有统计学意义（P＜0.05）。SSBH可下调aim2炎性小体信号通路相关蛋白的表达,差异具有统计学意义（P＜0.

关键词：类风湿关节炎 aim2炎性小体三水白虎汤滑膜成纤维细胞增殖

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NLRP3和aim2炎性小体与肺癌的相关性研究进展

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牡丹江医学院学报 2020年第3期41卷 151-155页

作者：林欣胡俊锋蚌埠医学院第一附属医院呼吸与危重症学科安徽蚌埠233000

炎症是机体对紊乱组织稳态失平衡的一种基本的先天免疫反应。长期以来,慢性炎症反应被观察到与多种类型的癌症有关。炎性小体(inflammasome)是炎症反应中的核心分子之一,炎性小体通路中的关键分子如IL-1β、IL-18、Caspase-1、凋亡相关... 详细信息

炎症是机体对紊乱组织稳态失平衡的一种基本的先天免疫反应。长期以来,慢性炎症反应被观察到与多种类型的癌症有关。炎性小体(inflammasome)是炎症反应中的核心分子之一,炎性小体通路中的关键分子如IL-1β、IL-18、Caspase-1、凋亡相关斑点样蛋白(apoptosis-associated speck-like protein containing a CARD,ASC)等已被证实与多种不同类型肿瘤的发生、发展、侵袭和转移相关。近年来研究较多的是NLRP3(NLR family,pyrin domain containing 3,NLRP3)和aim2(absent in melanoma 2,aim2)炎性小体,本文就这两种炎性小体生物学功能及其在肺癌进展中的研究进行综述。

关键词： NLRP3炎性小体 aim2炎性小体肺癌

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ATP敏感性钾通道开放剂对氧糖剥夺/复氧小胶质细胞炎性反应的影响及其机制

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中华行为医学与脑科学杂志 2024年第9期33卷 776-782页

作者：尹姗姗赵晨鸣张秋君赵源征郑州大学第五附属医院神经内科郑州450052

目的探讨ATP敏感性钾通道(ATP-sensitive potassium channel,KATP)开放剂尼可地尔对氧糖剥夺/复氧(oxygen-glucose deprivation/reoxygenation,OGD/R)所致BV2小胶质细胞焦亡和炎性反应的影响及作用机制。方法将BV2细胞分为对照组、OGD/R组和OGD/R+尼可地尔组。BV2细胞氧糖剥夺3 h后复氧24 h建立OGD/R细胞模型,OGD/R+尼可地尔组细胞在氧糖剥夺3 h后加入5μg/mL尼可地尔培养液孵育24 h。采用CCK8法检测细胞增殖活性;钙黄绿素/碘化丙啶(calcein/PI)试剂盒检测各组细胞膜成孔破裂率;Western blot检测核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)、磷酸化NF-κB(phosphorylated NF-κB,p-NF-κB)、NF-κB抑制蛋白α(inhibitor of nuclear factor-κBα,IκB-α)、磷酸化IκB-α(phosphorylated IκB-α,p-IκB-α)、黑色素瘤缺乏因子2(absent in melanoma 2,aim2)、活化的半胱氨酸蛋白酶-1(cleaved-caspase-1)、消皮素D N-末端片段(gasdermin D-N,GSDMD-N)、白细胞介素18(interleukin-18,IL-18)和白细胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β)的蛋白表达情况;细胞免疫荧光检测各组aim2、GSDMD-N蛋白表达情况。使用SPSS 26.0软件进行统计分析,多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用LSD检验。结果(1)3组细胞膜成孔破裂率差异有统计学意义(F=615.882,P2)Western blot结果显示,3组细胞p-NF-κB、NF-κB、p-IκB-α和IκB-α的蛋白表达水平均差异有统计学意义(F=10.000,62.652,67.121,101.023,均P2±0.09),(1.03±0.09),(0.86±0.04)](均Paim2、cleaved-caspase-1、GSDMD-N、IL-18和IL-1β的蛋白表达水平均差异有统计学意义(F=65.926,12.428,66.447,44.831,52.960,均Paim2、cleaved-caspase-1、GSDMD-N、IL-18和IL-1β蛋白水平[(0.78±0.04),(0.71±0.09),(0.54±0.04),(0.72±0.07),(0.50±0.08)]均低于OGD/R组[(0.94±0.09),(0.89±0.09),(0.85±0.04),(0.90±0.07),(0.99±0.03)](均Paim2和GSDMD-N的荧光强度均差异有统计学意义(F=36.353,46.817,均Paim2[(124.36±7.91),(140.19±5.63)]和GSDMD-N[(134.16±5.18),(147.45±5.63)]的蛋白荧光强度均低于OGD/R组(均P2细胞损伤,抑制促炎因子释放,其机制可能与其下调NF-κB相关蛋白表达,抑制aim2炎性小体介导的细胞焦亡有关。

关键词： ATP敏感性钾通道尼可地尔氧糖剥夺焦亡 aim2炎性小体 NF-κB信号通路

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aim2炎症小体在EV71引起脑炎发病机制的研究及杆状病毒作为SARS-CoV-2活病毒疫苗载体的初步探索

AIM2炎症小体在EV71引起脑炎发病机制的研究及杆状病毒作为SARS-C...

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作者：王倩云安徽医科大学

学位级别：硕士

本论文分为两个部分组成,主要讨论了aim2炎症小体在EV71引起脑炎发病机制的研究及杆状病毒作为SARS-CoV-2活病毒疫苗载体的初步研究。第一部分:本研究主要利用肠道病毒71型(Enterovirus 71,EV71)感染其易感细胞人横纹肌瘤细胞(Rhabdomyo... 详细信息

本论文分为两个部分组成,主要讨论了aim2炎症小体在EV71引起脑炎发病机制的研究及杆状病毒作为SARS-CoV-2活病毒疫苗载体的初步研究。第一部分:本研究主要利用肠道病毒71型(Enterovirus 71,EV71)感染其易感细胞人横纹肌瘤细胞(Rhabdomyoma,RD)和人神经母细胞瘤(Neuroblastoma cells,SK-N-SH),利用荧光定量聚合酶链式反应(Quantitative real time polymerase chain reaction,qRT-PCR)和蛋白免疫印记(Western-Blot,WB),酶联免疫吸附试验(Enzyme Linked Immunosorbent Assay,ELISA)检测EV71感染两种细胞系后黑色素瘤缺乏因子2(Absent in melanoma 2,aim2)炎症小体及其下游基因的表达,通过流式细胞术检测EV71感染引起细胞焦亡情况。将纯化后的EV71通过颅内注射方式免疫出生24h C57野生型(Wild type,WT)及aim2基因敲除鼠(aim2 Gene knockout,aim2),对其感染后引起的临床症状进行评分,取感染后7d小鼠脑组织进行固定,脱蜡至水,HE染色观察EV71感染引起的炎症反应并通过免疫组织化学染色法(Immunohistochemistry,IHC)检测EV71及aim2的表达情况,qRT-PCR检测脑组织中VP1,Caspase1和IL-1β的表达水平。分离培养鉴定小鼠原代神经元细胞,观察EV71感染小鼠原代神经元细胞引起的形态学变化,EV71感染WT和aim2小鼠原代神经元细胞48h上清病毒滴度测定,qRT-PCR检测aim2,Caspase1及IL-1β的表达,流式细胞术检测细胞焦亡情况。实验结果显示EV71感染RD、SK-N-SH细胞及小鼠原代神经元细胞可以激活aim2炎症小体及其下游基因的表达。通过建立EV71感染小鼠原代神经元细胞模型,发现在感染aim2小鼠原代神经元细胞上清中检测到较高的病毒滴度,说明在原代神经元细胞中aim2对EV71的复制同样具有抑制作用。EV71感染aim2鼠后脑组织较野生鼠观察到严重的炎性浸润和空泡形成,且VP1表达较野生型鼠也较高,表明aim2可以抑制EV71病毒在脑中的复制。这些结果为宿主如何抵抗病毒感染,病毒免疫逃逸机制及抗病毒药物设计提供理论依据。第二部分:本研究构建了两种重组杆状病毒,其中一个是将人源的SARS-CoV-2的S基因克隆至p10启动子下游,利用Bac to Bac真核表达系统表达S蛋白并展示在病毒表面,另外一个是用哺乳动物启动子元件CMV启动子取代杆状病毒原有的p10和Polh启动子,将人源的SARS-CoV-2的S蛋白克隆至CMV启动子下游,利用杆状病毒有效转导进入哺乳动物细胞的特性将S基因带入哺乳动物细胞并在CMV启动子作用下表达外源S蛋白。采用皮下加腹腔注射重组病毒的方式,每两周免疫一次,共四次免疫BALB/c雌性小鼠,末次免疫10天后用ELISA检测血清中S蛋白特异性抗体生成情况;分离脾细胞后流式细胞技术检测IFN-γ和IL-4确定特异性细胞免疫应答类型;最后利用SARS-CoV-2假病毒检测小鼠血清中的中和抗体的效价。实验结果显示,两种方式构建的重组杆状病毒与野生杆状病毒及PBS组比较均可引起特异性细胞免疫和体液免疫应答,并且具有显著性差异。重组杆状病毒免疫小鼠后血清中S蛋白特异性抗体水平较高。假病毒系统检测免疫后小鼠体内产生的中和抗体水平,结果显示两种方式构建的重组杆状病毒抗体有明显的的提高。这些结果表明表达S蛋白的重组杆状病毒可以作为潜在的活病毒疫苗载体。

关键词：肠道病毒71型 aim2炎性小体杆状病毒 SARS-CoV-2 活病毒疫苗载体

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