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苦豆碱抑制胃癌HGC-27细胞和ags细胞增殖的作用机制

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中国高原医学与生物学杂志 2024年第4期 235-245页

作者：锁丽娜马海秀易毅苏玉东翟少倩赵婧曹成珠苏占海青海大学医学部青海大学高原医学研究中心

目的探讨苦豆碱（Aloperine,ALO）抑制胃癌HGC-27细胞、ags细胞增殖的作用机制。方法用不同浓度ALO处理胃癌HGC-27细胞、ags细胞。应用细胞毒性实验、细胞增殖实验和平板克隆实验评估增殖活性，应用划痕实验评估迁移与修复能力，应用... 详细信息

目的探讨苦豆碱（Aloperine,ALO）抑制胃癌HGC-27细胞、ags细胞增殖的作用机制。方法用不同浓度ALO处理胃癌HGC-27细胞、ags细胞。应用细胞毒性实验、细胞增殖实验和平板克隆实验评估增殖活性，应用划痕实验评估迁移与修复能力，应用侵袭实验检测迁移和侵袭能力，使用流式细胞术分析细胞周期变化情况，应用实时荧光定量聚合酶链反应实验测定GSPT1、CDK4、Cyclin D1和Caspase-3、Caspase-9、Bax、Bcl-2的mRNA表达水平，应用蛋白印迹实验评估GSPT1和Caspase-3、Caspase-9、Bax及Bcl-2的蛋白表达水平。结果细胞毒性、细胞增殖以及平板克隆实验结果显示，ALO抑制胃癌HGC-27细胞、ags细胞增殖并呈现浓度依赖性：与对照组相比，用0.1 mM和0.25 mM ALO处理的HGC-27细胞、ags细胞的增殖能力下降。划痕实验结果显示，ALO抑制了HGC-27细胞、ags细胞的迁移修复能力。细胞侵袭检测结果显示，经ALO处理后的HGC-27细胞、ags细胞的迁移、侵袭能力受到抑制。流式细胞术结果显示，经ALO作用后的HGC-27细胞、ags细胞的周期发生变化。实时荧光定量聚合酶链反应实验和蛋白印迹实验结果显示，与对照组相比，经药物处理后的HGC-27细胞、ags细胞中的GSPT1、Bcl-2、CDK4、Cyclin D1表达水平降低，Caspase-3、Caspase-9、Bax表达水平升高。结论 ALO可以通过调节GSPT1和Caspase-3、Caspase-9、Bax、Bcl-2的表达水平来抑制胃癌HGC-27细胞、ags细胞的增殖。

关键词：苦豆碱抑制 HGC-27 ags 增殖机制

Curcuma wenyujin Y. H. Chen et C. Ling n-Butyl Alcohol Extract Inhibits ags Cell Helicobacter pyloriCagA+VacA+ Promoted Invasiveness by Down-Regulating Caudal Type Homeobox Transcription Factor and Claudin-2 Expression

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Chinese Journal of Integrative Medicine 2020年第2期26卷 122-129页

作者： JIN Hai-feng DAI Jin-feng MENG Li-na LU Bin Department of Gastrointerology the First Affiliated Hospital of Zhejiang Chinese Medical University

Objective:To investigate the effects and possible mechanisms of action of Curcuma wenyujin *** et *** n-Butyl alcohol extract(CWNAE)on repression of human gastric cancer(GC)ags cell invasion induced by co-culturing with Helicobacter pylori(HP).Methods:ags cells were cultured with HP of positive or negative cytotoxin-associated gene A(Cag A)and vacuolating cytotoxin gene A(Vac A)expression(Cag A+/-or Vac A+/-)and divided into 5 *** A was cultured without HP as a control,Group B with HPCagA+VacA+,Group C with HPCagA-VacA-,Group D with HPCagA+VacA+and CWNAE,and Group E with HPCag A-Vac Aand ***-tetrazolium bromide(MTT)and tumor invasion assays,examinations of morphology and ultramicroscopic structures,quantitative real-time polymerase chain reaction and Western blots were performed to measure the effects and uncover the mechanisms behind these effects of HPCagA+VacA+and CWNAE on the epithelial-mesenchymal transition(EMT)of ags ***:The 10%inhibitory concentration of CWNAE against ags cells after a 48 h incubation was 19.73±1.30μg/m *** ags cells were elongated after co-culturing with HPCagA+VacA+than after culturing with HPCagA-VacA-.In tumor invasion assays,HPCagA+VacA+significantly enhanced the invasiveness of ags cells compared to the other experimental groups(all P valueags cells co-cultured with HPCagA+VacA+.HPCagA+VacA+up-regulated zincfinger ebox binding homeobox 1(ZEB1)in ags cells after co-culturing for 24 *** of caudal type homeobox transcription factor(CDX-2)and claudin-2 was significantly increased by HPCagA+VacA+(Pags cells through up-regulation of ZEB1 transcription and claudin-2 and CDX-2 *** inhibited these effects of HPCagA+VacA+on ags cells by down-regulating ZE

关键词： Helicobacter pylori gastric cancer ags zinefinger ebox binding homeobox 1 caudal type homeobox transcription factor claudin・2 Chinese medicine

Secreted Protein HP1286 of Helicobacter pylori Strain 26695 Induces Apoptosis of ags Cells

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Biomedical and Environmental Sciences 2012年第6期25卷 614-619页

作者： LI Jing 1,2, , MENG Fan Liang 1,2, , HE Li Hua 1,2 , and ZHANG Jian Zhong 1,2, 1. National Institute for Communicable Disease Control and Prevention, Chinese Center for Disease Control and Prevention, Beijing 102206, China 2. State Key Laboratory for Infectious Disease Prevention and Control, Chinese Center for Disease Control and Prevention, Beijing 102206, China National Institute for Communicable Disease Control and Prevention Chinese Center for Disease Control and Prevention Beijing 102206 China State Key Laboratory for Infectious Disease Prevention and Control Chinese Center for Disease Control and Prevention Beijing 102206 China

Objective Secreted proteins of Helicobacter pylori （H. pylori） interact with gastric epithelium cells and may contribute to cell damage. Considering the fact that HPO17S and hypothetical conserved protein HP1286 are included in the group and that HP0175 is a well-known apoptosis-induced factor, the present study aims to clarify whether HP1286 plays a role in bacterial pathogenicity or even functions as an apoptosis-induced factor in human stomach. Methods Two genes encoding HP1286 and HPO175 were cloned into pET32a vector and expressed as recombinant proteins in Escherichia coil （E. coil） BL21. Signal peptide sequences were not included. The recombinant proteins were purified with His SpinTrap and desalted by using HiTrap Desalting. Immunoreactivity of the proteins was determined by Western blot. Human gastric epithelial cell ags was challenged with these endotoxin-free proteins; and apoptosis of cells was assayed with the Cell Death ELISA kit. Results Recombinant proteins and their respective products whose N-terminal his-tag were removed with thrombin were recognized by serum from the patient infected with H. pylori. Apoptotic ags cells challenged by HP1286 of H. pylori 26695 were four times more than untreated cells. In addition, apoptosis-induced ability of HP1286 of SS1 was not as strong as that of H. pylori 26695 strain. Conclusion HP1286 of H. pylori 26695 induces apoptosis of ags cells in a time-dependent manner, however the apoptosis-induced ability of HP1286 may differ due to variations between different strains.

关键词： H. pylori HP1286 ags Apoptosis

RNF43靶向PTEN进行泛素化修饰抑制人胃癌细胞ags增殖与迁移

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安徽医科大学学报 2022年第11期57卷 1763-1768页

作者：邵笑魏从文闵敏董瑞华安徽医科大学解放军总医院第五医学中心临床学院北京100071 军事科学院军事医学研究院生物工程研究所北京100071 解放军总医院第五医学中心南院区消化内科北京100071 首都医科大学附属北京友谊医院研究型病房北京100050

目的研究E3泛素连接酶环指蛋白43(RNF43)在人胃腺癌细胞ags中新的作用靶点及其对ags凋亡、增殖与迁移的影响。方法使用荧光显微镜观察RNF43在人胃腺癌细胞ags中的瞬时转染效率;使用Western blot研究高表达RNF43对ags磷酸酶及张力蛋白同... 详细信息

目的研究E3泛素连接酶环指蛋白43(RNF43)在人胃腺癌细胞ags中新的作用靶点及其对ags凋亡、增殖与迁移的影响。方法使用荧光显微镜观察RNF43在人胃腺癌细胞ags中的瞬时转染效率;使用Western blot研究高表达RNF43对ags磷酸酶及张力蛋白同源物(PTEN)蛋白表达水平的影响;采用免疫共沉淀实验研究RNF43与PTEN的相互作用及RNF43对PTEN的泛素化修饰;分别用流式细胞实验、CCK-8实验、细胞划痕实验研究RNF43通过调控PTEN的表达对ags细胞凋亡、增殖、迁移能力的影响。结果细胞荧光结果显示,外源RNF43成功在人胃腺癌细胞ags中过表达;RNF43与PTEN在ags中存在相互作用,RNF43可以通过K63形式的泛素化方式对PTEN进行泛素化修饰并增加PTEN的蛋白表达水平。细胞功能实验结果显示RNF43可以通过靶向调控PTEN的功能水平进而加速ags的凋亡并抑制ags的增殖与迁移。结论RNF43可以通过对PTEN的泛素化修饰来抑制人胃癌细胞ags的增殖与迁移。

关键词： RNF43 PTEN ags 泛素化

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运化毒邪方调控P2RX7抑制人胃癌ags细胞的作用及机制研究

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运化毒邪方调控P2RX7抑制人胃癌AGS细胞的作用及机制研究

作者：王小娟扬州大学

学位级别：硕士

引言胃癌（Gastric cancer,GC）是全球最常见的恶性肿瘤之一,国际最新的统计资料显示,胃癌的发病率位列全球恶性肿瘤发病率第五,相关死亡率位列第四,其中,男性的发病率是女性的2倍,东亚和东欧的发病率最高。国内最新的流行病学资料显示,... 详细信息

引言胃癌（Gastric cancer,GC）是全球最常见的恶性肿瘤之一,国际最新的统计资料显示,胃癌的发病率位列全球恶性肿瘤发病率第五,相关死亡率位列第四,其中,男性的发病率是女性的2倍,东亚和东欧的发病率最高。国内最新的流行病学资料显示,在2000～2019年期间,我国的胃癌发病率和死亡率总体呈下降趋势,但60～69岁的男性人群是胃癌发病的高危人群。国家肿瘤中心预测2022年我国将有50.9万人确诊胃癌,相关死亡人数预估有40万,发病率和死亡率在常见癌症中均排第三位。近几十年来,尽管胃癌的综合治疗策略在不断发展,新药在不断研发利用,但由于胃癌具有较强的异质性且早期诊断率低的特点,胃癌的预后依然较差。通过总结临床病例和梳理文献,我们发现脾气虚弱,毒邪蕴结是胃癌患者最常见的病理因素,尤其是中晚期。因此本课题组以益气健脾,解毒抗癌为基本原则,自拟运化毒邪方。该方以四君子汤为基础方,健脾益气、扶正固本;重用大量生黄芪,补气健脾、升阳固表、利湿浊,薏苡仁健脾解毒散结以顾护中焦,诸药相得而强有力地推动中焦枢机运转,以复脾主运化之职;蒲公英、蛇舌草、龙葵清热解癌毒,莪术破血行气,化瘀消癥,有瘀者可徐消,无瘀者行补药之滞以强补药之功。诸药合用,一则补气健脾以助气血津液化生输布,达到扶正固本的目的;二则清热解毒、消癥泄浊以达祛邪清毒以安正的目的。本课题组在前期的临床试验中证明了运化毒邪方具有显著改善进展期胃癌患者预后的优势,基础实验也证实运化毒邪方在体外能显著的抑制胃癌细胞ags、MGC-803和SGC-7901的增殖,在体内亦能明显抑制PDTX模型鼠胃癌移植瘤的生长。该中药组合物的制备方法与应用已经申请国家发明专利（申请专利号为:202110063399.8）。P2RX7是一种跨膜受体,其编码基因位于12号染色体上,编码13个外显子,转化为含有595个氨基酸的蛋白质,是P2X家族中最大的蛋白质。P2RX7在多种细胞类型和组织中表达,包括神经元、树突状细胞、巨噬细胞、单核细胞、B和T细胞,具有广泛的生物学功能。它可以驱动从疼痛转导到免疫反应的广泛生理反应,其活性在炎症、免疫疾病、神经元、心血管和代谢疾病以及癌症中具有重要的驱动作用。近些年来,由于P2RX7在炎症和癌症研究方面取得了重大进展,它已被公认为是促进肿瘤发生和进展的重要介质,构成了抗癌药物最具吸引力的研究靶标。本论文分为临床研究和基础研究两部分,第一部分旨在通过免疫组化和中医辨证研究胃癌P2RX7的表达状态与中医脾虚毒蕴证的相关性。第二部分首先阐释与证明P2RX7在胃癌细胞ags中的作用,然后进一步探讨运化毒邪方健脾化毒治疗胃癌可能的分子机制。第一部分胃癌P2RX7表达状态与中医脾虚毒蕴证的相关性研究目的:通过免疫组化检测P2RX7在胃癌组织中的表达差异,分析P2RX7的表达水平与胃癌脾虚毒蕴证的相关性,并探讨胃癌脾虚毒蕴证的危险因素。方法:收集胃癌新发病例,收集患者的中医四诊资料,填写中医症状调查表,并进行辨证分型,收集患者的手术或胃镜石蜡切片进行免疫组织化学检测,结果采用χ2检验、Pearson相关性分析和Logistic回归分析方法研究P2RX7表达与胃癌脾虚毒蕴证的关系。结果:本研究共纳入胃癌病例80个。其中,男性42例,女性38例;有肿瘤家族史者为21例;P2RX7高表达者47例,低表达者33例;TNM分期为Ⅰ期4例,Ⅱ期19例,Ⅲ期44例,Ⅳ期13例;中医辨证为脾虚毒蕴证者36例,非脾虚毒蕴证者44例（其中,肝胃不和者13例;脾胃虚寒者11例;胃热伤阴者11例;气血亏虚者9例）。χ2检验显示胃癌脾虚毒蕴证患者的P2RX7蛋白表达水平显著高于胃癌非脾虚毒蕴证患者（*P＜0.05）,Pearson相关性分析结果显示P2RX7与脾虚毒蕴证具有一定的相关性（R2=0.253,**P＜0.01）,多因素Logistic回归分析显示P2RX7蛋白高表达（P=0.006）和肿瘤家族史（P=0.018）是胃癌患者脾虚毒蕴证的独立危险因素。结论:胃癌脾虚毒蕴证患者的肿瘤组织中P2RX7显著高表达,胃癌患者肿瘤组织中P2RX7表达状态与脾虚毒蕴证相关,且P2RX7高表达是胃癌患者脾虚毒蕴证的独立危险因素。第二部分基础实验一、Western blot检测P2RX7在人胃癌组织及细胞系中的表达目的:验证人胃癌组织和正常胃粘膜组织、人胃癌细胞系和正常人胃粘膜细胞中P2RX7蛋白的表达差异。方法:通过Western Blot法分别检测5对新鲜的人胃癌组织和正常胃粘膜组织,胃癌ags、HGC-27细胞系和正常人胃粘膜细胞GES-1中P2RX7蛋白的表达水平。结果:与配对的正常胃粘膜组织相比,P2RX7蛋白在胃癌组织中的表达水平相对升高,差异具有统计学意义（*P＜0.05***P＜0.001）;与人胃

关键词： P2RX7 胃癌脾虚毒蕴证相关性危险因素运化毒邪方 ags 侵袭与迁移

synthesisandCrystalStructureof｛（PPh＿3）ags＿P（OCH＿2PH）＿2｝＿2

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Chemical Research in Chinese Universities 1996年第2期12卷 4-9页

ｓｙｎｔｈｅｓｉｓａｎｄＣｒｙｓｔａｌＳｔｒｕｃｔｕｒｅｏｆ｛（ＰＰｈ＿３）ＡｇＳ＿Ｐ（ＯＣＨ＿２ＰＨ）＿２｝＿２＊／／ＬＯＮＧＤｅ－ｌｉｎｇ，ＸＩＮＸｉｎ－ｑｕａｎ￣（ＳｔａｔｅＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＣｏｏ... 详细信息

ｓｙｎｔｈｅｓｉｓａｎｄＣｒｙｓｔａｌＳｔｒｕｃｔｕｒｅｏｆ｛（ＰＰｈ＿３）ＡｇＳ＿Ｐ（ＯＣＨ＿２ＰＨ）＿２｝＿２＊／／ＬＯＮＧＤｅ－ｌｉｎｇ，ＸＩＮＸｉｎ－ｑｕａｎ￣（ＳｔａｔｅＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＣｏｏｒｄｉｎａｔｉｏｎＣｈｅｍｉｓｔｒ...

关键词： OCH synthesisandCrystalStructureof PPh ags

ω-3多不饱和脂肪酸对人胃腺癌细胞系ags的作用

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西安交通大学学报（医学版） 2015年第2期36卷 190-194页

作者：王曙逢赵志浩刘竹君王光辉高锟李幼芬西安交通大学医学部第一附属医院普通外科陕西西安710061 西安交通大学生命科学与技术学院陕西西安710049

目的探讨ω-3多不饱和脂肪酸对人胃腺癌ags细胞生长增殖的作用和可能的机制。方法以不同浓度梯度的DHA、EPA作用于体外培养的ags细胞和人微血管内皮细胞HMEC-1,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)观察细胞增殖抑制率,使用流式细胞仪检测细胞周期变... 详细信息

目的探讨ω-3多不饱和脂肪酸对人胃腺癌ags细胞生长增殖的作用和可能的机制。方法以不同浓度梯度的DHA、EPA作用于体外培养的ags细胞和人微血管内皮细胞HMEC-1,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)观察细胞增殖抑制率,使用流式细胞仪检测细胞周期变化,采用Western blot分析细胞线粒体呼吸链膜蛋白复合体Ⅰ、Ⅱ、Ⅴ表达变化。结果 DHA和EPA对胃腺癌ags细胞增殖具有明显抑制作用,该抑制作用呈现明显的剂量时间依赖效应的特点(Pags细胞明显皱缩,细胞的贴壁能力明显减弱。流式细胞仪检测显示,DHA、EPA干预后ags细胞的DNA合成前期(G0/G1期)细胞分布比例明显增加,DNA合成期(S期)细胞分布比例明显减少(Pags细胞24h和48h后,与对照组比较,ags线粒体呼吸链膜蛋白复合体Ⅰ、Ⅱ、Ⅴ表达灰度值显著下降,而且随着作用时间延长,复合体表达灰度值下降愈明显(P0.05)。结论ω-3多不饱和脂肪酸可选择性有效地抑制人胃腺癌ags细胞的生长增殖。该作用可能是通过阻滞ags细胞于G0/G1期和抑制ags细胞能量代谢来实现的。

关键词： ω-3多不饱和脂肪酸人胃腺癌细胞系 ags

Apaf-1基因转染及其对5-氟尿嘧啶诱导ags细胞凋亡的影响

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中华消化杂志 2002年第9期22卷 550-553页

作者：李红梅杨云生程留芳北京解放军总医院消化科 100853

目的　Apaf 1是参与激活凋亡过程中Caspase系统的关键因子。研究Apaf 1在化疗药物诱导肿瘤细胞凋亡过程中的作用。方法　利用基因转染技术 ,将正、反义Apaf 1表达载体转染至ags细胞系 ,建立Apaf 1过度表达及减低表达系统 ,观察在Apaf 1... 详细信息

目的　Apaf 1是参与激活凋亡过程中Caspase系统的关键因子。研究Apaf 1在化疗药物诱导肿瘤细胞凋亡过程中的作用。方法　利用基因转染技术 ,将正、反义Apaf 1表达载体转染至ags细胞系 ,建立Apaf 1过度表达及减低表达系统 ,观察在Apaf 1过度表达及减低表达情况下 ,5 氟尿嘧啶(5 FU)对ags细胞凋亡过程的影响 ,并检测正、反义Apaf 1转基因ags细胞株在 5 FU诱导的凋亡过程中细胞色素C信号转导通路相关分子的表达变化。结果　正义Apaf 1基因转染组cyt c、bax及cas pase 3基因的表达显著上调 ,而在反义Apaf 1基因转染组则相反。bcl 2基因的表达在正、反义Apaf 1基因转染组无明显变化。结论　过度表达Apaf 1基因可以明显增加ags细胞对化疗药物 5 FU的敏感性 ,而Apaf

关键词： Apaf-1基因 5-氟尿嘧啶 ags 细胞凋亡肿瘤化疗基因转染

抗人胃腺癌细胞株ags单克隆抗体的制备和初步鉴定

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内蒙古大学学报（自然科学版） 2010年第1期41卷 91-96页

作者：黄翔华李瑶杨利军李云霞赵宇航李煜内蒙古大学哺乳动物生殖生物学及生物技术教育部重点实验室呼和浩特010021

用人胃癌细胞株ags作为抗原免疫Balb/c小鼠,通过杂交瘤技术制备抗人胃癌细胞mAb,应用间接ELISA法进行筛选,显微操作法进行亚克隆并用琼脂糖双向免疫扩散法鉴定亚类,免疫化学法检测特异性,获得l株分泌抗ags细胞株的mAb的杂交瘤(命名为1B... 详细信息

用人胃癌细胞株ags作为抗原免疫Balb/c小鼠,通过杂交瘤技术制备抗人胃癌细胞mAb,应用间接ELISA法进行筛选,显微操作法进行亚克隆并用琼脂糖双向免疫扩散法鉴定亚类,免疫化学法检测特异性,获得l株分泌抗ags细胞株的mAb的杂交瘤(命名为1B4).该杂瘤分泌的mAb与人宫颈癌细胞株Hela、肝癌细胞株HepG2和正常胎儿肺细胞均为阴性反应,而与ags细胞呈阳性反应.结果表明,该mAb对ags细胞株具有一定的特异性,可为胃癌相关抗原的筛选研究提供一定的帮助.

关键词：胃癌 ags 单克隆抗体杂交瘤