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补肾活血方含药血清对age-bsa诱导的HK-2细胞凋亡及PERK-ATF4-CHOP信号通路的影响

中国中西医结合杂志 2023年第7期43卷 831-838页

作者：韦茂英高云逸方泽阳潘欣渝李会敏魏军平中国中医科学院广安门医院内分泌科北京100053

目的观察补肾活血方(BSHXF)含药血清对糖基化终产物修饰的牛血清白蛋白(age-bsa)诱导的人肾小管上皮细胞(HK-2)凋亡的影响及其机制。方法采用age-bsa诱导HK-2细胞建立凋亡损伤模型,将HK-2细胞分为牛血清白蛋白(bsa)组、age-bsa组、不... 详细信息

目的观察补肾活血方(BSHXF)含药血清对糖基化终产物修饰的牛血清白蛋白(age-bsa)诱导的人肾小管上皮细胞(HK-2)凋亡的影响及其机制。方法采用age-bsa诱导HK-2细胞建立凋亡损伤模型,将HK-2细胞分为牛血清白蛋白(bsa)组、age-bsa组、不同浓度(2.5%、5%、10%、20%)BSHXF含药血清组,CCK-8法检测各组细胞活力。确定10%、20%BSHXF含药血清可显著提高HK-2细胞活力后再将HK-2细胞分为bsa组、age-bsa组、BSHXF低剂量组(BSHXF-L,10%含药血清)和BSHXF高剂量组(BSHXF-H,20%含药血清),流式细胞仪检测各组细胞凋亡情况。以4-苯基丁酸钠盐为阳性对照,设bsa组、age-bsa组、BSHXF-L组、BSHXF-H组和4-PBA组,运用Western Blot和RT-PCR法检测补肾活血方对HK-2细胞葡萄糖调节蛋白78 (GRP78蛋白)及mRNA表达的影响。将蛋白激酶样内质网激酶(PERK)-shRNA转染HK-2细胞,采用RT-PCR和Western Blot检测各组PERK mRNA和蛋白的表达。以干扰效果最佳的PERK-shRNA为阳性对照,设bsa组、age-bsa组、BSHXF-L组、BSHXF-H组、PERK-shRNA组,Western Blot检测各组HK-2细胞p-PERK/PERK、p-真核起始因子2α(eIF2α)/eIF2α、活化转录因子4(ATF4)、C/EBP同源蛋白(CHOP)、B淋巴细胞瘤2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、切割型半胱天冬酶-3(Cleaved-caspase-3)、切割型半胱天冬酶-9(Cleaved-caspase-9)蛋白表达的影响。结果与bsa组比较,age-bsa组HK-2细胞的活力下降,凋亡率增加(Page-bsa组比较,BSHXF-L和BSHXF-H组可明显提高HK-2细胞的活力(Page-bsa诱导的HK-2细胞凋亡具有保护作用,其机制可能与抑制PERK-ATF4-CHOP信号通路,减轻内质网应激有关。

关键词：补肾活血方糖尿病肾病 age-bsa 细胞凋亡内质网应激中药复方

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糖基化终末产物对肾小球系膜细胞表达纤溶酶原激活物抑制物1的影响

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中华医学杂志 1997年第9期77卷 672-675页

作者：邓义斌陈香美叶一舟李才王凡解放军总医院肾病科解放军肾病中心白求恩医科大学应用基础医学研究所

探讨非酶促糖基化终末产物是否影响肾小球系膜细胞降解肾小球细胞外基质的丝氨酸蛋白酶－纤溶酶原激活物抑制物１（ＰＡＩ－１）基因表达和生物学活性。方法用体外制备的非酶促糖基化牛血清白蛋白（ＡＧＥ－ＢＳＡ）作用人肾小球系膜细... 详细信息

探讨非酶促糖基化终末产物是否影响肾小球系膜细胞降解肾小球细胞外基质的丝氨酸蛋白酶－纤溶酶原激活物抑制物１（ＰＡＩ－１）基因表达和生物学活性。方法用体外制备的非酶促糖基化牛血清白蛋白（ＡＧＥ－ＢＳＡ）作用人肾小球系膜细胞２４小时和４８小时，观察对细胞增殖、纤维连接蛋白分泌、ＰＡＩ－１基因表达和生物学活性的作用。结果ＡＧＥ－ＢＳＡ抑制肾小球系膜细胞增殖，促进纤维连接蛋白分泌，上调ＰＡＩ－１生物学活性。ＡＧＥ－ＢＳＡ作用系膜细胞２４小时后，ＰＡＩ－１基因表达显著增加（０．６５％±０．０８％，对照０．４５％±０．０６％，Ｐ＜０．０５）；４８小时后ＰＡＩ－１基因表达增加更趋显著（０．９２％±０．１０％，对照０．５１±０．０８，Ｐ＜０．０１）。结论非酶促糖基化终末产物增加肾小球系膜细胞ＰＡＩ－１基因表达和生物学活性，参与了肾小球细胞外基质积聚和肾小球硬化的病理生理过程。

关键词：肾小球系膜细胞 PAI-1 肾小球疾病 age-bsa

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晚期糖基化终产物诱导特征性糖尿病肝病和肾病的发生

晚期糖基化终产物诱导特征性糖尿病肝病和肾病的发生

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作者：崔云南方医科大学

学位级别：硕士

糖尿病是一种涉及多器官、多系统的慢性疾病,其病变范围广泛、病变特征复杂多变。随着人们生活方式的变化,糖尿病的发病率也在不断升高。其中,糖尿病导致的肝脏和肾脏病变属于糖尿病微血管并发症。尽管目前针对糖尿病的治疗多种多样,但... 详细信息

糖尿病是一种涉及多器官、多系统的慢性疾病,其病变范围广泛、病变特征复杂多变。随着人们生活方式的变化,糖尿病的发病率也在不断升高。其中,糖尿病导致的肝脏和肾脏病变属于糖尿病微血管并发症。尽管目前针对糖尿病的治疗多种多样,但是没有一种药物能够完全逆转糖尿病并发症的进展。因此深入探究糖尿病并发症的发病机制,为临床治疗提供更合理的治疗方案是我们迫切需要解决的问题。晚期糖基化终产物（advanced glycation end products,ages）是一类由还原糖与蛋白质、脂质和核酸中的氨基经非酶糖基化反应而形成的化合物。有研究证实,血清中ages的含量与糖尿病并发症的严重程度密切相关。糖尿病导致的肝病和肾病是一个长期而缓慢的病变过程,其发病机制复杂,参与因素众多,ages在其中发挥的作用还了解不多,由其介导的发病机制仍需进一步探讨。因此,本研究旨在观察ages介导肝、肾病变的形态学和功能学改变,继而探讨ages及其受体以及引起的膜突蛋白的变化在其中的作用。Rage（the receptor for advanced glycation end products,Rage）作为 ages作用的受体之一,属于免疫球蛋白超家族的一种细胞表面受体。我们的前期研究结果也证实,ages可通过与受体Rage结合介导人脐静脉内皮细胞（human umbilical vascular endothelial cells,HUVECs）的功能改变。因此,我们假设 ages也可通过Rage介导糖尿病肝脏和肾脏病变。膜突蛋白（moesin）是一种连接细胞膜蛋白与细胞内骨架蛋白的桥接分子,主要分布在内皮细胞。我们前期研究证明,ages可介导HUVECs中moesin的磷酸化,进而调节内皮细胞的迁移、增殖及血管新生。因此,本课题探究ages介导的肝病和肾病是否伴有moesin的磷酸化,为进一步探讨其在糖尿病肝病和肾病中的作用提供依据。目的:本研究以age-bsa刺激C57BL/6雄性小鼠引起的肝病和肾病为研究对象,探究糖尿病代谢产物ages在不同作用时期对肝脏和肾脏的形态和功能的影响以及其受体Rage在其中的作用,并观察肝组织肝窦内皮细胞（liver sinusoidal endothelial cells,LSECs）和肾小球血管内皮细胞moesin磷酸化水平的变化。方法:本研究分别以每天10 mg/kg的age-bsa腹腔注射C57BL/6的野生型（Wild type,WT）和敲除Rage（Rage（-/-））小鼠1个月和6个月。用HE染色和电镜观察肝组织和肾组织结构的改变;用免疫组化染色CD31、CD34观察肝组织肝血窦表型的改变,及免疫组化染色CD34观察肾组织血管芽生情况;用免疫组化染色collagen Ⅳ及天狼猩红染色观察肝组织纤维化情况;用masson染色和PAS染色观察肾组织纤维化情况;检测血清中谷丙转氨酶（Alanine aminotransferase,ALT）和谷草转氨酶（Aspartate aminotransferase,AST）的水平观察肝功能的改变;检测血清中肌酐和尿素氮及尿液中的白蛋白与肌酐的比值观察肾功能的改变;用免疫组化及Western Blot分析肝组织LSECs和肾小球血管内皮细胞moesin磷酸化水平。结果:1、age-bsa通过Rage介导肝脏和肾脏特征性的结构紊乱肝脏组织学结果表明,age-bsa刺激后,肝索排列紊乱,细胞水肿,部分空泡样变,肝实质点状坏死;肝组织电镜结果表明,age-bsa诱导肝组织LSECs窗孔数量减少,LSECs之间形成紧密连接,且伴随肝窦腔内芽生现象;而肾脏组织学显示部分肾小球萎缩,球囊增大,部分肾小球代偿性肥大,肾小球毛细血管受压,肾小管部分萎缩,部分明显扩张,肾小管由正常圈攀状挤压成髓纹状,上皮细胞水肿,空泡样变,甚至脱落;肾组织电镜显示,age-bsa介导肾小球内皮细胞窗孔减少、足突融合脱落及基膜不均匀增厚;且刺激时间越长,上述病变越明显。用age-bsa刺激Rage（-/-）小鼠时上述病变明显改善。由此表明,age-bsa通过Rage介导肝组织和肾组织超微结构紊乱。2、age-bsa通过Rage介导肝脏CD31、CD34和肾脏CD34的表达增多肝组织免疫组化染色CD31、CD34结果表明,与对照组相比,age-bsa刺激1m时,肝组织LSECs中CD31、CD34的表达未见明显变化;而6m时,肝组织LSECs中可见CD31、CD34表达明显增多;肾组织在age-bsa刺激1 m时,观察到肾小囊周围CD34的表达增多,表示在肾小囊周围有毛细血管的新生,且扩张明显;而在6 m时,在肾小囊周围未见明显血管新生。用age-bsa刺激Rage（-/-）小鼠时未见明显上述现象。由此证实,AG

关键词： age-bsa Rage LSECs 肝窦毛细血管化肾小球血管内皮细胞

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