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融合蛋白adk-MEK1R4F在大肠杆菌中的表达及应用于ERK蛋白磷酸化的研究

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融合蛋白Adk-MEK1R4F在大肠杆菌中的表达及应用于ERK蛋白磷酸化的...

作者：杨芳西南大学

学位级别：硕士

丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs)信号转导通路主要是将细胞外的信号(如生长因子,细胞激素)传递到细胞内及核中从而调控多种细胞反应如生长,分化,炎症和凋亡。目前在哺乳类细胞中已发现存在着三条并行的MAPKs信号通路,包括ERK(extracellular s... 详细信息

丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs)信号转导通路主要是将细胞外的信号(如生长因子,细胞激素)传递到细胞内及核中从而调控多种细胞反应如生长,分化,炎症和凋亡。目前在哺乳类细胞中已发现存在着三条并行的MAPKs信号通路,包括ERK(extracellular signal-regulated kinase)信号通路,JNK/SAPK信号通路和p38 MAPK信号通路。每一条信号通路均包括三个级联反应蛋白:MAPK,MAPK激酶,MAPK激酶激酶。目前研究得较为全面的是Ras/Raf/MEK/ERK信号通路。丝裂原活化蛋白激酶激酶1(MKK1或者MEK1)是该信号转导通路中的一个重要组成部分,由于其在调节细胞的增殖和分化中的重要作用,MEK1成为了癌症治疗的一个有吸引力的目标。其功能主要是介导下游底物ERK1和ERK2保守性苏氨酸和络氨酸位点的磷酸化。ERK蛋白的磷酸化激活是丝裂原活化的直接反应之一,且ERK自身的磷酸化对ERK蛋白在细胞核中的定位和癌细胞迁移中有重要作用。大多数蛋白激酶活性的激活源于其自身的磷酸化。体外实验中,上游激酶蛋白Mos、MEKK以及大多数的Raf家族蛋白均可以磷酸化MEK1激酶蛋白。然而只有Raf-1是其生理学上的上游激酶蛋白。Raf-1蛋白是由两个功能性不同的结构域组成,两个结构域为氨基端的调控结构域和羧基端的激酶结构域。当将其氨基端结构域敲除后从而变成了组成性激活的催化性结构域Raf-BXB。然而Raf-BXB也是可以激活MEK1蛋白的磷酸化。在本文的研究中,我们主要是运用MEK1的组成性活性形式MEK1R4F作为研究对象。目前对于人源的MEK1蛋白的研究主要是其表达,纯化以及其激酶特性的研究。然而在以前的研究报道中,MEK1的蛋白表达纯化在昆虫细胞系以及大肠杆菌中均有研究,但是其表达水平非常低也造成后续纯化非常困难,只可以纯化到少量的蛋白且纯度不高。本文主要研究了腺苷酸激酶蛋白作为一个标签蛋白,将其相对应的基因(adk)通过重叠PCR的方法融合到MEK1R4F基因的N端,此标签蛋白融合后不仅可以增强MEK1R4F在大肠杆菌中的表达水平,还可以促进该蛋白后续的纯化。研究报道,腺苷酸激酶(adk)是一个重要的磷酸转移酶,其在活细胞从细菌到哺乳动物中均有表达,它在细胞的能量平衡和腺嘌呤核苷酸的代谢中起着重要的作用。源于大肠杆菌的腺苷酸激酶,其不仅在大肠杆菌中有高水平的表达,而且还可以将二磷酸腺苷转换成三磷酸腺苷和腺苷一磷酸。如此融合后的adk-MEK1R4F蛋白不仅在大肠杆菌中的表达水平大大增加,且通过Ni-NTA的亲和层析以及QFF柱子的阴离子交换层析两步纯化可以得到95%纯度的蛋白。纯化得到的adk-MEK1R4F融合蛋白不仅保留了其完整的磷酸化ERK蛋白激酶活性,而且可以利用除三磷酸腺苷之外的二磷酸腺苷作为能量介导ERK蛋白的磷酸化。并且在MEK1R4F利用二磷酸腺苷作为能量介导的ERK磷酸化反应中加入纯化得到的腺苷酸激酶蛋白可以磷酸化ERK。同时我们还发现不管是体外还是体内的ERK磷酸化,adk-MEK1R4F融合蛋白比非融合MEK1R4F蛋白激酶有更高的活性。因此可以利用此方法去纯化得到更多的磷酸化ERK蛋白。该方法也可以应用于其他重组蛋白的表达,以及其下游纯化。

关键词： adk MEK1 ERK 激酶磷酸化

adk~珠宝工匠精神·超前工艺加盟无忧·服务完善

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中国宝玉石 2017年第5期 48-49页

抢占享福先机共赢财富新蓝海颠覆传统打造轻、准。

关键词：工匠无忧 adk

adk?“芯”随你动十一情饰甜蜜来袭奏响爱的乐章

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中国宝玉石 2016年第5期 64-65页

"芯"随你动,adk十一情饰甜蜜来袭,奏响爱的乐章在美国喜剧爱情电影《怦然心动》中,有这么一句经典台词——"有些人浅薄,有些人金玉其外败絮其中,但是总有一天,你会遇到一个绚丽的人,她让你觉得你以前遇到过的所有人都只是浮云",只一句... 详细信息

"芯"随你动,adk十一情饰甜蜜来袭,奏响爱的乐章在美国喜剧爱情电影《怦然心动》中,有这么一句经典台词——"有些人浅薄,有些人金玉其外败絮其中,但是总有一天,你会遇到一个绚丽的人,她让你觉得你以前遇到过的所有人都只是浮云",只一句话就让人感受到电影主题"怦然心动"的魅力。心动是遇见你时的下雨天,我心里却开出了七色虹彩;心动是你双手空空而来,我寂静无声的天空却有缤纷烟火乍然升空。

关键词：爱情电影 adk 寂静无声经典台词

adk珠宝跨界携手婚买坊强势进军 2016上海婚纱摄影器材展

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中国宝玉石 2016年第2期 54-55页

2016年2月23日至26日,由中国国际贸易促进委员会上海市分会、中国人像摄影学会王办、上海国际展览服务有限公司承办的第二十九届＂中国·上海国际婚纱摄影器材展览会＂在上海新国际博览中心隆重开办。甘露集团携手旗下K-gold金饰品牌AD... 详细信息

2016年2月23日至26日,由中国国际贸易促进委员会上海市分会、中国人像摄影学会王办、上海国际展览服务有限公司承办的第二十九届＂中国·上海国际婚纱摄影器材展览会＂在上海新国际博览中心隆重开办。甘露集团携手旗下K-gold金饰品牌adk珠宝及＂芭莎公益星设计＂项目强势进军上海婚纱摄影展。adk珠宝玩转跨界携手婚买坊惊艳亮相,为2016年adk品牌的战略合作发展进程添上了浓墨重彩的一笔。

关键词：婚纱摄影 adk 器材展览日至艺术风格无处不见一站式采购银杏叶商务交流激情碰撞

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adk七夕新品宠爱降临实力演绎纯爱小清新

中国宝玉石 2016年第4期 46-47页

传说,有一个男孩因满腔抱负远走他乡,有一个女孩穷尽一生守候他归来。最后,女孩在等待与怀念中变成了一朵花,花形恰似那匹陪男孩走遍千山万水、阅尽人世浮华的马的脚印,得名：马蹄莲。adk珠宝以源自马蹄莲的浪漫爱情为灵感来源,采用精... 详细信息

传说,有一个男孩因满腔抱负远走他乡,有一个女孩穷尽一生守候他归来。最后,女孩在等待与怀念中变成了一朵花,花形恰似那匹陪男孩走遍千山万水、阅尽人世浮华的马的脚印,得名：马蹄莲。adk珠宝以源自马蹄莲的浪漫爱情为灵感来源,采用精湛珐琅技艺打造2016年七夕专款系列新品——“纯洁の爱”,实力演绎纯爱小清新。

关键词：远走他乡一朵花 adk 灵感来源花形永结同心双手合十难分难舍系列产品晕染

东德进口adk—6.3型起重机三相交流发电机自激恒压原理与维修

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山东交通科技 1989年第1期 59-65页

作者：武欣山东省烟台海运公司

一、概述六十年代末我国从东德进口一批adk—6.3型起重机,作为中小港口及船厂的起重设备。该吊车的传动系统为交流发电机——电动机系统,其三相交流发电机的自激恒压方式较为特殊,因而一些单位在大修该发电机时遇到很多困难,本文将简要... 详细信息

一、概述六十年代末我国从东德进口一批adk—6.3型起重机,作为中小港口及船厂的起重设备。该吊车的传动系统为交流发电机——电动机系统,其三相交流发电机的自激恒压方式较为特殊,因而一些单位在大修该发电机时遇到很多困难,本文将简要分析其基本工作原理,供维修本类型电机的电气工作者参考。

关键词：三相交流 adk 自激辅助磁极电动机系统辅助绕组起重设备电枢电流直流绕组传动系统

基于Windows adk的Win PE封装——以三亚学院计算中心为例

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电脑与电信 2019年第3期 55-57页

作者：梁志勇三亚学院信息与智能工程学院海南三亚572022

随着U盘容量的不断增大,越来越多的实验室管理人员在安装操作系统的时候不再使用传统的光盘安装,而是利用挂载于U盘中的Win PE系统对计算机的系统进行安装、备份和还原。市面上常用的Win PE系统有大白菜、老毛桃、IT天空等,这些Win PE... 详细信息

随着U盘容量的不断增大,越来越多的实验室管理人员在安装操作系统的时候不再使用传统的光盘安装,而是利用挂载于U盘中的Win PE系统对计算机的系统进行安装、备份和还原。市面上常用的Win PE系统有大白菜、老毛桃、IT天空等,这些Win PE系统虽然简单易用,但是无一例外的有着篡改IE首页、偷装额外软件等问题,甚至部分Win PE系统在系统安装完毕之后自动加载木马病毒等程序,严重影响了计算机实验室系统的安全性和稳定性。本文将基于微软官方发布的Windows adk制作Windows 10 PE系统。

关键词： Windows adk Windows 10 Win PE

2014全球K-gold潮流暨adk概念作品中国行福州站盛大开启

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中国宝玉石 2014年第1期 78-81页

2013年12月24日,2014全球K-gold潮流暨adk概念作品中国行巡展福州站在东百东街adk店正式拉开了序幕。adk携国际大赛获奖作品、全球K-gold限量概念作品、全球领先K-gold大师级工艺精品搭载时尚大气、精美别致的展位惊艳亮相,为福州广大... 详细信息

2013年12月24日,2014全球K-gold潮流暨adk概念作品中国行巡展福州站在东百东街adk店正式拉开了序幕。adk携国际大赛获奖作品、全球K-gold限量概念作品、全球领先K-gold大师级工艺精品搭载时尚大气、精美别致的展位惊艳亮相,为福州广大消费者带来极大的惊喜,共享最新K-gold潮流,掀起全城观赏热潮!

关键词：福州站 adk K-gold

星形胶质细胞介导的ENT1及adk在颞叶癫痫大鼠海马中的动态表达及相关性研究

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星形胶质细胞介导的ENT1及ADK在颞叶癫痫大鼠海马中的动态表达及...