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黄酒酵母adh2、ALD2和ALD6基因敲除对黄酒中乙醛代谢的影响

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食品与发酵工业 2016年第11期42卷 1-6页

作者：刘华孙军勇谢广发陆健吴殿辉李童吴宗文江南大学粮食发酵工艺与技术国家工程实验室江苏无锡214122 江南大学工业生物技术教育部重点实验室江苏无锡214122 江南大学生物工程学院江苏无锡214122 中国绍兴黄酒集团有限公司国家黄酒工程技术研究中心浙江绍兴312000

以工业黄酒酵母N85尿嘧啶缺陷型单倍体2a-u3(MATa ura3)为出发菌株,研究分别敲除乙醛代谢相关酶的编码基因adh2、ALD2和ALD6对乙醛代谢的影响。采用融合PCR技术分别构建乙醇脱氢酶编码基因adh2敲除组件"adh2S-URA3-adh2X"和乙醛脱氢酶... 详细信息

以工业黄酒酵母N85尿嘧啶缺陷型单倍体2a-u3(MATa ura3)为出发菌株,研究分别敲除乙醛代谢相关酶的编码基因adh2、ALD2和ALD6对乙醛代谢的影响。采用融合PCR技术分别构建乙醇脱氢酶编码基因adh2敲除组件"adh2S-URA3-adh2X"和乙醛脱氢酶编码基因ALD2和ALD6敲除组件"ALD2S-URA3-ALD2X"和"ALD6S-URA3-ALD6X",转化N85尿嘧啶缺陷型单倍体菌株后,以尿嘧啶缺陷型的恢复为筛选标记,分别获得adh2、ALD2和ALD6基因缺失菌株2a-A2(Δadh2)、2a-D2(Δald2)和2a-D6(Δald6)。分别将获得的工程菌与亲本菌株以及前期构建的丙酮酸脱羧酶基因PDC5缺失菌株2a-P5(Δpdc5)进行实验室规模的黄酒发酵实验。结果表明,与亲本菌株2a相比,工程菌2a-A2发酵液中乙醛含量降低了7.14%,而2a-P5发酵液中乙醛含量降低了32.68%,说明工业黄酒酵母乙醛的生成存在糖代谢途径,并且乙醛主要由丙酮酸脱羧而来;工程菌2a-D2和2a-D6发酵液中乙醛含量与亲本相比分别增加了144.91%和88.87%,说明乙醛脱氢酶是黄酒中控制乙醛降解的关键酶,而且ALD2基因在乙醛转化为乙酸过程中发挥更关键的作用。

关键词：黄酒酵母基因敲除 adh2 ALD2和ALD6 乙醛

海南普通野生稻(Oryza rufipogon Griff.)adh2基因多态性分析

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作物学报 2009年第11期35卷 2122-2126页

作者：董轶博裴新梧袁潜华彭于发中国农业科学院植物保护研究所植物病虫害生物学国家重点实验室北京100094 中国农业科学院生物技术研究所北京100081 海南大学生命科学与农学院热带生物资源教育部重点实验室海南海口570228

海南岛的4个保护区和2个非保护区内普通野生稻与2种栽培稻(Nipponbare,9311)的adh2基因序列在编码区共有单现突变9个,信息位点4个,同义突变8个,替代突变5个。内含子内有单现突变21个,信息位点29个,插入/缺失位点161个。adh2基因在整个... 详细信息

海南岛的4个保护区和2个非保护区内普通野生稻与2种栽培稻(Nipponbare,9311)的adh2基因序列在编码区共有单现突变9个,信息位点4个,同义突变8个,替代突变5个。内含子内有单现突变21个,信息位点29个,插入/缺失位点161个。adh2基因在整个区域的多态性(πR,θR)均为0.011,内含子区域的多态性明显高于编码区域。在编码区域,同义位点多态性明显高于替代位点。中性测试表明虽然adh2各区域的净化选择在统计上不具有显著性,但编码区的净化选择作用明显大于内含子区域。聚类分析表明海南普通野生稻可以划分为2大类,其中一类(QH,LD)与中国大陆普通野生稻和栽培稻更接近,另一类(WC,WA,WN,DZ)则更接近东南亚普通野生稻。

关键词：普通野生稻 adh2 序列多态性

洛阳市汉族群体adh2和ALDH2的基因多态性研究

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遗传 2002年第5期24卷 532-536页

作者：张竹梅刘茶珍边建超江峰沈福民汤伯明王其军王启敏朱鑫复旦大学公共卫生学院流行病学教研室上海200032 洛阳市卫生防疫站流行病科洛阳471000

为研究洛阳市汉族群体adh2和ALDH2基因的多态性分布,应用聚合酶链反应-扩增片段长度多态性（PCR-APLP）分析法,对adh2基因外显子3和ALDH2基因外显子12的特定片段同时进行特异性扩增,用非变性的聚丙烯酰胺垂直凝胶电泳和DNA银染方法判定... 详细信息

为研究洛阳市汉族群体adh2和ALDH2基因的多态性分布,应用聚合酶链反应-扩增片段长度多态性（PCR-APLP）分析法,对adh2基因外显子3和ALDH2基因外显子12的特定片段同时进行特异性扩增,用非变性的聚丙烯酰胺垂直凝胶电泳和DNA银染方法判定基因型。adh2＊1和adh2＊2等位基因频率分别为42.86％和57.14％,adh2＊1/＊1、＊1/＊2和＊2/＊2的基因型频率分别为22.86％、40.00％和37.14％;AL-DH2＊1和ALDH2＊2的等位基因频率分别为85.24％和14.76％,ALDH2＊1/＊1、＊1/＊2和＊2/＊2的基因型频率分别为71.43％、27.62％和0.95％。洛阳市汉族群体adh2和ALDH2的等位基因频率和基因型频率不同于台湾人和上海人,ALDH2＊1/＊1基因型频率明显高于上海人和台湾人的。因而,洛阳市居民对酒精的耐受性比上海人和台湾人强。

关键词：洛阳市汉族群体 adh2 ALDH2 基因多态性乙醇脱氢酶2 乙醛脱氢酶

酿酒酵母YS2-△adh2-△ald6突变株的构建及hxt1基因的过表达

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酿酒酵母YS2-△adh2-△ald6突变株的构建及hxt1基因的过表达

作者：王艳尊福建师范大学

学位级别：硕士

生物质能源是化石能源良好的替代品,乙醇作为比较理想的可再生液体燃料备受国内外科学家的亲睐。酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)作为传统乙醇生产主要用菌,选育其高产菌株一直是燃料乙醇生产的关键因素。其中,应用重组DNA和分子改... 详细信息

生物质能源是化石能源良好的替代品,乙醇作为比较理想的可再生液体燃料备受国内外科学家的亲睐。酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)作为传统乙醇生产主要用菌,选育其高产菌株一直是燃料乙醇生产的关键因素。其中,应用重组DNA和分子改造技术有目的地改变酵母表达调控网络和已有代谢途径,优化细胞代谢机制,构建优良性状工业微生物显得尤为重要。本研究依据酿酒酵母本身高效的同源重组机制,应用过表达和基因敲除技术,增强合成底物代谢利用率,降低或阻遏乙醇分解代谢流,成功构建双基因缺失突变菌株YS2-Δadh2-Δald6和过表达已糖转运蛋白基因hxt1的YS2-Δadh2-Δald6-hxt1突变株。取得以下研究进展: 1、以adh2基因缺陷型酿酒酵母YS2-Δadh2为出发菌株,应用长侧翼同源两步PCR(LFH-PCR)策略构建ald6基因敲除组件,转化酿酒酵母YS2-Δadh2进行同源重组,之后转入表达质粒pSH65到阳性克隆中,半乳糖诱导表达Cre重组酶切除Kan基因筛选标记,最后,传代丢失质粒pSH65获得双倍体ald6基因缺失突变株YS2-Δadh2-Δald6。发酵试验表明与出发菌株YS2相比,突变株乙酸合成量降低18%,乙醇最高产量提高12.5%。生理特性试验表现为突变株具有很高的遗传稳定性,生长情况不受影响。 2、在pSH47质粒的基础上,通过设计分别带有EcoRⅠ酶切位点引物将hxt1 ORF与截短的hxt7启动子融合到CYC1终止子的上游区域。随后将pUG6载体上的Kan抗性基因片段连接到pSHG17载体上,构建了整合表达载体pSHGK17。转化酵母突变株YS2-Δadh2-Δald6,经G418抗性筛选、PCR验证得到过表达hxt1基因突变株YS2-Δadh2-Δald6-hxt1。生长方面突变株迟滞期稍长,指数生长中后期菌浓上升较快,其他方面没有显著差异,遗传稳定性高。发酵检测,突变株YS2-Δadh2-Δald6-hxt1与YS2-Δadh2-Δald6和YS2菌株相比,糖代谢加快,发酵周期分别提前了3小时和8小时;乙醇产量较YS2菌株提高了12.65%。

关键词：酿酒酵母基因敲除过表达 LFH-PCR adh2 ald6 己糖转运蛋白

ALDH2、adh2基因多态性和生活习惯等同食管癌易感性关系的配比病例对照研究

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ALDH2、ADH2基因多态性和生活习惯等同食管癌易感性关系的配比病...

作者：陈怀恭四川大学

学位级别：硕士

目的:随着时代的发展,食管癌在恶性肿瘤中的死因顺位不仅在全世界出现下降趋势,在我国食管癌的高发地区——四川盐亭县也出现下降态势,而且不同年代得出的食管癌病因不尽相同。为了探索四川盐亭县目前食管癌的主要危险因素;了解和酒精... 详细信息

目的:随着时代的发展,食管癌在恶性肿瘤中的死因顺位不仅在全世界出现下降趋势,在我国食管癌的高发地区——四川盐亭县也出现下降态势,而且不同年代得出的食管癌病因不尽相同。为了探索四川盐亭县目前食管癌的主要危险因素;了解和酒精代谢相关的ALDH2和adh2酶基因型在食管癌病人和对照人群中的分布频率;研究我国食管癌高发区人群中ALDH2、adh2基因多态性与食管癌的关系,以及基因和行为(吸烟、饮酒)之间的相互作用,在盐亭县肿瘤防治所的合作下,进行本次研究工作。方法:采取1∶1配比病例对照研究,在四川省盐亭县收集经病理学确诊的食管癌病例和社区健康对照各137例。用自行设计的问卷调查病例和对照的基本人口学情况、食管癌家族史、生活行为方式(包括吸烟、饮酒等的种类和数量)、营养膳食等情况,对于病

关键词：基因多态 ALDH2 adh2 生活习惯饮食习惯食管癌基因型等位基因吸烟饮酒

玉米adh1和adh2基因的序列变异及与耐旱相关性状的关联分析

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玉米ADH1和ADH2基因的序列变异及与耐旱相关性状的关联分析

作者：马思佳扬州大学

学位级别：硕士

干旱作为重要的非生物胁迫,对玉米产量有着重要影响。乙醇脱氢酶(adh)是一种重要的含锌酶,与耐旱、低温以及病原菌入侵等逆境胁迫的应答有着紧密的关系。本研究通过对76个玉米自交系中的adh1和adh2的基因序列进行重测序,并分析了adhl和A... 详细信息

干旱作为重要的非生物胁迫,对玉米产量有着重要影响。乙醇脱氢酶(adh)是一种重要的含锌酶,与耐旱、低温以及病原菌入侵等逆境胁迫的应答有着紧密的关系。本研究通过对76个玉米自交系中的adh1和adh2的基因序列进行重测序,并分析了adhl和adh2在供试玉米自交系群体中的核苷酸多态性和单倍型密度。主要研究结果如下：对76份玉米自交系中adhl和adh2基因序列进行多态性分析,发现玉米adh1基因在供试群体中共有127个序列变异位点,其中编码区包括27个SNP;adh2基因在供试群体中共有205个序列变异位点,其中编码区包括18个SNP。利用两个基因编码区的SNP将两个基因分别划分为13个和21个单倍型。尽管基因adh1和adh2编码区的变异频率远低于内含子区段,但编码区的SNP仍将两个基因分别划分为13个和21个单倍型。adh1和adh2基因的多态性位点之间处于高度的连锁不平衡,并且其连锁不平衡随着之间物理距离的增加而衰减。基于候选基因的关联分析的结果发现,adh1基因编码区检测到两个非同义突变位点与耐旱系数显著关联：SNP08与株高耐旱系数显著关联,贡献率为7.183%;SNP35与单株产量耐旱系数显著关联,贡献率为13.374%。adh2基因编码区检测到两个非同义突变位点与耐旱系数显著关联：SNP792与株高耐旱系数显著关联,贡献率为8.483%;SNP66与穗位高耐旱系数显著相关,贡献率为9.203%。

关键词：玉米 adh1 adh2 序列分析关联分析

酿酒酵母MF1015菌株adh2和ald6基因的敲除研究

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酿酒酵母MF1015菌株adh2和ald6基因的敲除研究

作者：曹薇广西大学

学位级别：硕士

乙醇作为一种重要的基础工业原料,被广泛用于食品、化工、医药、军工等众多行业。通过基因工程改造、构建酿酒酵母乙醇发酵生产菌种,以提高该产业的乙醇发酵水平,可显著降低其生产能耗和原材料单耗,降低劳动成本,具有极为显著的经济效益... 详细信息

乙醇作为一种重要的基础工业原料,被广泛用于食品、化工、医药、军工等众多行业。通过基因工程改造、构建酿酒酵母乙醇发酵生产菌种,以提高该产业的乙醇发酵水平,可显著降低其生产能耗和原材料单耗,降低劳动成本,具有极为显著的经济效益,并可同时探讨酿酒酵母乙醇发酵这一最基本的生命现象的规律,具有极其重要的应用与理论意义,一直是微生物学、分子生物学以及乙醇发酵工业等学科领域研究的重点和热点。adh2和ald6二基因分别编码乙醇脱氢酶和乙醛脱氢酶,参与酿酒酵母的乙醇发酵代谢。其中,前者调控催化乙醇生成乙醛的过程,后者调控乙醛氧化为乙酸的过程。本文根据代谢工程原理,以甘蔗糖蜜乙醇发酵高产菌株MF1015为出发菌株,通过建立稳定的单倍体细胞系,利用同源重组原理敲除这二个基因,再进行菌株核型复倍,成功构建了双倍体突变菌株MF1015-△adh2-△ald6。研究结果如下：以MF1015为出发菌株,构建该菌株的a型和α型单倍体。构建adh2和ald6基因敲除组件,并分别转化到a型和α型单倍体中。筛选得到阳性克隆子后转入pSH65表达质粒,半乳糖诱导消除抗性基因,pSH65表达质粒后经传代遗失。将a型和α型的目的单倍体菌株混于YEPD培养基中使其自然交配复倍,最终筛选得到突变菌株MF1O15-△adh2-△ald6。蔗糖发酵实验显示,该突变菌株与原出发菌株MF1015相比,乙醇产量提高8.59%,乙酸产量降低9.75%;糖蜜补料发酵实验显示,该菌株与原出发菌株MF1015相比,乙醇产量提高5.39%,乙酸产量降低7.47%,残糖利用率提高3.56%。经多次传代后,该突变株生长特性保持不变,具有较好的遗传稳定性。结果表明突变菌株MF1015-Δadh2-Δald6是一株具有应用潜力的酿酒酵母菌株。

关键词：酿酒酵母 adh2 ald6 同源重组乙醇发酵乙酸发酵

甘肃省裕固族男性饮酒状况及其与adh2、CYP4502E1多态型的关系

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甘肃省裕固族男性饮酒状况及其与ADH2、CYP4502E1多态型的关系

作者：贾世忠兰州大学

学位级别：硕士

目的：1.探讨裕固族男性饮酒行为的一般流行病学特征和影响饮酒行为的因素,为饮酒行为的预防和控制提供理论依据。2.观察裕固族男性饮酒人群adh2和CYP4502E1的基因多态型与饮酒行为的关系,为阐明饮酒行为与遗传学特征之间的关系提供依据... 详细信息

目的：1.探讨裕固族男性饮酒行为的一般流行病学特征和影响饮酒行为的因素,为饮酒行为的预防和控制提供理论依据。2.观察裕固族男性饮酒人群adh2和CYP4502E1的基因多态型与饮酒行为的关系,为阐明饮酒行为与遗传学特征之间的关系提供依据。方法：1.从甘肃省肃南县人民医院3179名体检人群随机抽取633名裕固族男性作为调查对象,采用一般饮酒行为与健康状况调查表调查裕固族男性不同人群的饮酒率。2.再从633名调查人群随机抽取318名裕固族男性,依照一般饮酒行为与健康状况的调查表与酒精依赖ADS诊断表将其饮酒行为分为不饮酒组、轻度饮酒组、中度饮酒组、重度饮酒组和酒精依赖组。收集不同饮酒组的血样,通过聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)的方法检测adh2和CYP4502E1的基因多态型。3.裕固男性不同人群的饮酒率采用卡方检验,饮酒率的影响因素采用单因素和多因素的logistic分析,不同饮酒组间adh2与CYP4502E1的等位基因与基因型频率采用卡方检验比较差异性。结果：1裕固族男性人群的饮酒率为80.41%,裕固族男性在文化程度、婚姻的满意程度和吸烟状况的饮酒率有统计学意义。单因素和多因素分析后发现,吸烟状况与饮酒行为有统计学意义(P2.裕固族男性人群adh2*1和adh2*2等位基因频率分别为59.70%和40.30%,CYP4502E1*1和CYP4502E1*2等位基因频率分别为89.31%和10.69%,且裕固族男性饮酒行为与adh2及CYP4502E1多态型有关。结论：1.裕固族男性饮酒行为呈现年轻化的趋势。2.吸烟是裕固族男性饮酒行为重要的影响因素,但不是饮酒行为的危险因素。3.裕固族男性人群携带的adh2、CYP4502E1的基因越易发生突变,其饮酒量越大。

关键词： adh2 CYP4502E1 饮酒行为基因多态型裕固族

adh2和ALDH2基因多态及饮酒与食管癌关联的研究

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中国医疗前沿 2013年第18期 10-10页

作者：漆兴芝江西省宜春市人民医院肿瘤科

目的分析adh2和ALDH2基因多态以及饮酒习惯与食管癌的相关性。方法选取我院100例男性食管癌患者,随机抽样选取同期健康居民100例作为对照组,分析观察adh2和ALDH2基因多态及饮酒与食管癌关联性。结果 adh2和ALDH2基因的不同组合与食管癌... 详细信息

目的分析adh2和ALDH2基因多态以及饮酒习惯与食管癌的相关性。方法选取我院100例男性食管癌患者,随机抽样选取同期健康居民100例作为对照组,分析观察adh2和ALDH2基因多态及饮酒与食管癌关联性。结果 adh2和ALDH2基因的不同组合与食管癌发生情况没有直接关系,差异无统计学意义(P>0.05),食管癌与adh2、ALDH2基因多态型以及饮酒习惯之间也没有直接关系,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 adh2和ALDH2基因多态及饮酒与食管癌之间没有相关性,有待进一步证实。

关键词： adh2 ALDH2 饮酒食管癌