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转adc基因扇子花‘Dream Blue’在低温干旱胁迫下的生理响应

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转ADC基因扇子花‘Dream Blue’在低温干旱胁迫下的生理响应

作者：韩路亚华中农业大学

学位级别：硕士

本文以实验室获得的转adc扇子花‘梦幻蓝’(Scaevola aemula'DreamBlue')与非转基因植株为试验材料,研究了室内模拟低温胁迫和干旱胁迫下二者的生理生化指标变化规律,观测了转adc植株和非转基因植株盆栽苗在室外低温越冬适应性及其在温... 详细信息

本文以实验室获得的转adc扇子花‘梦幻蓝’(Scaevola aemula'DreamBlue')与非转基因植株为试验材料,研究了室内模拟低温胁迫和干旱胁迫下二者的生理生化指标变化规律,观测了转adc植株和非转基因植株盆栽苗在室外低温越冬适应性及其在温室的生长恢复情况。主要研究成果如下：(1)转基因植株与非转基因植株相比表型发生明显变化：转adc植株直立生长,铺地性减弱;茎秆粗壮节间距变短;叶肥厚,肉质性强,叶面积增大。非转基因植株匍匐生长;茎秆细节间距长,呈嫩绿色：叶片较前者小而薄。(2)室外低温适应性及温室恢复情况：前两周,大部分转adc植株出现轻微的冻害现象,非转基因植株没有表现出明显冻害现象。后两周,转adc植株的受冻指数略低于非转基因植株,移至温室恢复生长后,恢复的转基因植株数量多于非转基因植株。(3)室内模拟低温胁迫下,转adc扇子花与非转基因植株的相对含水量下降趋势呈“慢-快-慢”,第5天达到最小值,分别是87.1%、82%。叶绿素含量呈“慢-快”降低,第5天达到最大值,分别是0.81mg/g、0.60mg/g。转adc植株的MDA含量及相对电导率比非转基因植株上升幅度小,说明转adc扇子花的细胞膜受损害时期后延。转adc植株的2种酶活性均高于非转基因植株,二者的SOD活性均先小幅度上升后明显下降,前者最高值出现在第3d,308.00U/g,后者出现在第1d,203.73U/g。POD活性均先剧烈下降后缓慢上升,但仍低于对照,最低值出现在第1天,分别为1156.67U/***、910.00U/***。说明SOD和POD共同作用清除氧自由基,adc基因促进了两种酶活性在逆境下的表达。转adc植株的可溶性蛋白含量低于非转基因植株,二者均先缓慢上升、后快速下降,最高值出现在第3d,分别是25.99mg/g,28.45mg/g。(4)随着干旱胁迫时间的延长,土壤相对含水量逐渐下降。转adc植株的相对含水量及叶绿素含量下降幅度小于非转基因植株。转adc植株与非转基因植株的相对电导率以慢-快-慢的速率上升,第5d达到最高值,分别为34.97%,49.78%。丙二醛含量呈慢-快趋势上升,第5d达到最高值,分别为26.92umol/g,28.08umol/g。转基因植株的上升幅度较小。转adc植株与非转基因植株的SOD活性先缓慢上升、后快速下降,最高值出现在第7d,分别为336.92U/g、280.21U/g。POD活性则先快速上升、后慢速下降,最低值出现在第5d,分别为2270U/***、1055U/***。可溶性蛋白含量先缓慢上升、后缓慢下降,最高值分别出现在第7d,14.75mg/g,第5d,9.87mg/g。

关键词：扇子花 adc基因低温胁迫干旱胁迫生理响应

多药耐药鲍曼不动杆菌adc型AmpC酶基因的检测研究

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世界最新医学信息文摘 2015年第67期 1-2页

作者：韩爽于文静杨瑞林多丽波李桂玲陈淑娟栾英齐齐哈尔中医医院吉林大学第一医院二部哈尔滨医科大学附属第二医院

目的了解多药耐药鲍曼不动杆菌中adc型AmpC酶基因及其上游插入序列ISaba1的存在情况。方法收集2011年10月至2012年6月在哈尔滨医科大学附属第二医院住院患者送检标本中分离到的鲍曼不动杆菌共146株。应用K-B纸片扩散法检测细菌对11种抗... 详细信息

目的了解多药耐药鲍曼不动杆菌中adc型AmpC酶基因及其上游插入序列ISaba1的存在情况。方法收集2011年10月至2012年6月在哈尔滨医科大学附属第二医院住院患者送检标本中分离到的鲍曼不动杆菌共146株。应用K-B纸片扩散法检测细菌对11种抗生素的敏感性。应用PCR及DNA测序分析adc型AmpC酶基因短片段、ISaba1-AmpC及adc型AmpC酶全基因。应用荧光定量PCR方法检测bla ampC基因相对表达量。结果 146株鲍曼不动杆菌中,头孢哌酮/舒巴坦的敏感性较高(52.7%),其他抗生素的敏感性较低(adc型基因的阳性率为91.7%(134/146)。AmpC酶上游插入序列ISaba1的阳性率为73.2%(107/146)。本院adc型基因亚型为adc-30(Genbank号为GU591985)。结论本组多药耐药情况十分严重,鲍曼不动杆菌对β-内酰胺类抗生素耐药与其产生adc型AmpC酶关系密切,其上游插入序列ISaba1自带启动子可导致AmpC酶基因m RNA的表达量增高。

关键词：鲍曼不动杆菌 AmpC酶 adc基因多药耐药

森林草莓精氨酸脱羧酶基因的电子克隆与序列分析

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江苏农业学报 2011年第3期27卷 628-633页

作者：王静赵密珍王壮伟吴伟民钱亚明江苏省农业科学院园艺研究所江苏南京210014

从森林草莓中分离精氨酸脱羧酶基因(Fvadc),分析其表达模式、序列特征和进化关系。采用电子克隆结合RT-PCR分离Fvadc;半定量RT-PCR检测其在盐、热、冷胁迫下的表达情况;生物信息学分析Fvadc的结构与进化。结果获得FvadccDNA全长,包括2 1... 详细信息

从森林草莓中分离精氨酸脱羧酶基因(Fvadc),分析其表达模式、序列特征和进化关系。采用电子克隆结合RT-PCR分离Fvadc;半定量RT-PCR检测其在盐、热、冷胁迫下的表达情况;生物信息学分析Fvadc的结构与进化。结果获得FvadccDNA全长,包括2 154 bp的编码区,RT-PCR验证编码区序列与电子克隆序列一致;Fvadc基因编码的精氨酸脱羧酶与桃、苹果和海棠的同源性分别达87%、84%和83%,含信号肽,具有2个保守的氨基酸结构域:adc家族2磷酸吡哆醛结合位点和adc家族2标记2序列;进化分析表明森林草莓精氨酸脱羧酶与苹果、桃精氨酸脱羧酶关系最近;半定量RT-PCR证实Fvadc在盐、热、冷胁迫下诱导表达。以上结果说明电子克隆能用于草莓基因的分离,而Fvadc可作为逆境候选基因用于草莓遗传改良。

关键词：森林草莓 adc基因电子克隆生物信息学 RT-PCR

IntⅠ1基因突变致鲍曼不动杆菌耐药性丢失

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广东医学 2011年第14期32卷 1896-1898页

作者：张国栋么作义乔国昱张蕊河北省唐山市协和医院检验科 063000

目的探究鲍曼不动杆菌耐药性丢失与基因组序列的相关性。方法临床分离78株鲍曼不动杆菌,按CLSI进行药敏性实验,以PCR方法对IntⅠ1、adc基因进行检测,并选择部分菌株进行测序分析。结果 78株鲍曼不动杆菌中,有1株完全不耐药,而相关基因PC... 详细信息

目的探究鲍曼不动杆菌耐药性丢失与基因组序列的相关性。方法临床分离78株鲍曼不动杆菌,按CLSI进行药敏性实验,以PCR方法对IntⅠ1、adc基因进行检测,并选择部分菌株进行测序分析。结果 78株鲍曼不动杆菌中,有1株完全不耐药,而相关基因PCR检测的阳性率均为100%。基因测序分析表明,在这株耐药性丢失的鲍曼不动杆菌中,IntⅠ1基因均发生3处DNA突变。结论 IntⅠ1基因对于鲍曼不动杆菌耐药性起着重要作用,相关位点突变将导致耐药性丢失。

关键词：鲍曼不动杆菌 IntⅠ 1基因 adc基因耐药性丢失

呼吸道感染患者中耐药鲍曼不动杆菌β内酰胺酶基因的变异情况分析

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中国医药 2017年第4期12卷 610-613页

作者：陈杰鄂东医疗集团市中心医院(湖北理工学院附属医院)医疗部湖北省黄石市435002

目的分析呼吸道感染患者中耐药鲍曼不动杆菌（AB）β内酰胺酶基因的变异情况。方法选取2015年5月到2016年6月鄂东医疗集团市中心医院收治的呼吸道感染患者98例，制备患者呼吸道分泌物标本，进行病原菌种类检测，分离出AB进行药物敏感试... 详细信息

目的分析呼吸道感染患者中耐药鲍曼不动杆菌（AB）β内酰胺酶基因的变异情况。方法选取2015年5月到2016年6月鄂东医疗集团市中心医院收治的呼吸道感染患者98例，制备患者呼吸道分泌物标本，进行病原菌种类检测，分离出AB进行药物敏感试验，同时检测耐药AB的adc基因变异情况，比较adc基因阳性率及变异性和adc基因阳性和阴性对各种抗菌药物的敏感度差异。结果所有患者中AB感染发生率为34.7%（34/98）；AB菌株对头孢唑啉、头孢呋辛、氨苄西林的耐药率较高，分别为97.1%（33/34）、85.3%（29/34）、79.4%（27/34），对左氧氟沙星和头孢哌酮/舒巴坦的耐药率较低，分别为20.6%（7/34）和8.8%（3/34）；所有AB菌株中adc阳性率为38.2%（13/34），其中同时携带 adc、DHA基因共9株，同时携带adc、DHA和EBC基因共3株，同时携带adc、EBC基因共1株。adc阳性AB菌株对亚胺培南的耐药率明显高于adc阴性AB菌株,差异有统计学意义［69.2%（9/13）比19.0%（4/21）］（P〈0.05）。结论耐药AB是呼吸道感染患者中常见的病原菌，同时该病原菌产生adc型β内酰胺酶的比例较高，且存在一定变异性。

关键词：呼吸道感染鲍曼不动杆菌 β内酰胺酶 adc基因

呼吸道感染中耐药鲍曼不动杆菌(AB)β内酰胺酶基因的变异情况研究

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当代医学 2018年第12期24卷 159-160页

作者：朱欣湘潭市中心医院检验科湖南湘潭411100

目的探讨呼吸道感染患者中耐药鲍曼不动杆菌(AB)β内酰胺酶基因的变异情况。方法选取呼吸道感染患者196例,制备患者呼吸道分泌物标本,进行病原菌种类检测,分离出AB进行药物敏感试验,同时检测耐药AB的adc基因变异情况,比较adc基因阳性率... 详细信息

目的探讨呼吸道感染患者中耐药鲍曼不动杆菌(AB)β内酰胺酶基因的变异情况。方法选取呼吸道感染患者196例,制备患者呼吸道分泌物标本,进行病原菌种类检测,分离出AB进行药物敏感试验,同时检测耐药AB的adc基因变异情况,比较adc基因阳性率及变异性和adc基因阳性和阴性对各种抗菌药物的敏感度差异。结果全部患者中AB感染发生率为34.69%;AB菌株对头孢唑啉、头孢呋辛、氨苄西林的耐药率较高,分别为97.06%、85.29%、79.41%,对左氧氟沙星和头孢哌酮/舒巴坦的耐药率较低,分别为20.59%和8.80%;所有AB菌株中adc阳性率为38.24%,18株携带adc、DHA基因,6株携带adc、DHA和EBC基因,2株携带adc、EBC基因。adc阳性AB菌株对亚胺培南的耐药率明显高于adc阴性AB菌株(69.23%vs.19.05%)(Padc型β内酰胺酶的比例较商,且存在一定变异性。

关键词：鲍曼不动杆菌 β内酰胺酶 adc基因

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新变异型耐药鲍氏不动杆菌β-内酰胺酶研究

中华医院感染学杂志 2013年第24期23卷 5905-5907页

作者：章清魏丽王金铎朱建铭复旦大学附属上海市第五人民医院检验科上海200240 杭州市余杭区中医院检验科浙江杭州311106

目的调查耐药鲍氏不动杆菌β-内酰胺酶基因的存在和变异情况,为临床资料提供参考依据。方法收集2011年1月-2011年12月ICU患者痰液标本中分离的耐药鲍氏不动杆菌共25株,用聚合酶链反应(PCR)的方法分析34种β-内酰胺酶基因和ISaba1-OXA-23... 详细信息

目的调查耐药鲍氏不动杆菌β-内酰胺酶基因的存在和变异情况,为临床资料提供参考依据。方法收集2011年1月-2011年12月ICU患者痰液标本中分离的耐药鲍氏不动杆菌共25株,用聚合酶链反应(PCR)的方法分析34种β-内酰胺酶基因和ISaba1-OXA-23、ISaba1-OXA-66连锁检测。结果 25株耐药鲍氏不动杆菌共检出4种β-内酰胺酶基因:TEM、adc、OXA-23群、OXA-51群,经进一步测序和比对,21株TEM基因阳性均为TEM-1型84.0%,23株OXA-23群阳性均为OXA-23型92.0%;25株OXA-51群阳性均为OXA-66型100.0%,24株adc基因阳性中20株为adc-30型80.0%,1株为新变异型adc-6 34.0%,3株序列相同的为新变异型adc-6412.0%,ISaba1-OXA-23连锁检测结果与OXA-23检测结果相同,即OXA-23阳性菌株均由ISaba1介导;而ISaba1-OXA-66连锁检测均为阴性,提示OXA-66阳性菌株均非ISaba1介导。结论鲍氏不动杆菌对β-内酰胺类药物耐药主要与产TEM-1、OXA-23型、OXA-66型、adc-30型基因相关;adc基因存在新变异型adc-63和adc-64是国内外首次报道。

关键词：鲍氏不动杆菌 β-内酰胺类 β-内酰胺酶基因 adc基因耐药新变异型

八个扇子花品种ISSR鉴别及‘梦幻白’的遗传转化

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八个扇子花品种ISSR鉴别及‘梦幻白’的遗传转化

作者：张伟华中农业大学

学位级别：硕士

澳大利亚扇子花是草海桐科草海桐属的优良花木。本实验室引进一批扇子花品种。部分品种在外部形态上差异很小,不易区分。本研究采用ISSR分子标记技术,在DNA水平上对其进行鉴别研究。同时,对耐寒性较差但观赏性很好的扇子花品种“梦幻白... 详细信息

澳大利亚扇子花是草海桐科草海桐属的优良花木。本实验室引进一批扇子花品种。部分品种在外部形态上差异很小,不易区分。本研究采用ISSR分子标记技术,在DNA水平上对其进行鉴别研究。同时,对耐寒性较差但观赏性很好的扇子花品种“梦幻白”,开展了农杆菌介导的转adc基因研究,以期提高其的抗逆性。主要研究结果如下：(1)品种鉴别：从八个扇子花品种的叶片提取基因组DNA,运用ISSR技术检测了这些品种的遗传差异。仅用3个ISSR引物就扩增出29条带谱,其中28条为多态性带,多态性百分率为96.55%。选取其中7条特征带即可将八个品种完全区分开。(2)转基因技术体系：a)取无菌苗的幼嫩叶片,在愈伤诱导培养基中预培养一周,之后接种到含不同浓度卡那霉素的愈伤诱导培养基上,20d后观察分析在含50mg/L卡那霉素的培养基中培养的叶片全部死亡。b)取200μl菌液加入到50ml含有不同浓度噻孢霉素的LB液体培养基中,于28℃、180rpm震荡培养过夜,结果表明在含200mg/L噻孢的培养基中,农杆菌被完全抑制。c)切取无菌苗叶片接种到愈伤诱导培养基上,25℃,光周期16h,光照强度1000-20001ux条件下,预培养不同天数,结果表明最佳预培养天数为2-3d。d)采取对数生长期的农杆菌的菌液(OD600≈0.5),进行不同时间侵染实验,观察愈伤长势,结果表明最佳侵染时间为3min。e)将最佳条件侵染的叶片共培养不同天数,结果表明在3d内能够有效转化。(3)转基因植株鉴定：在最佳转化体系下,将抗性愈伤组织转入到继代培养基中,待长出植株时,进行目的基因adc的微量PCR检测。在转基因植株中检测到1400bp的基因片段,而非转基因植株无此片段。因此,初步鉴定adc基因已转入“梦幻白”植株中。

关键词：扇子花梦幻白 ISSR 品种鉴别 adc基因遗传转化