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应用改进的RT-PCR检测砂梨aclsv和ASGV病毒

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应用改进的RT-PCR检测砂梨ACLSV和ASGV病毒

苹果aclsv CP基因酵母双杂交诱饵载体构建及自激活鉴定

第三届湖北湖南植保农药学术研讨会

作者：邓晓云洪霓胡红菊王国平华中农业大学植物科技学院湖北省农科院果茶蚕桑研究所

本研究以砂梨为试材,在生物学和血清学检测的基础上,采用免疫捕作RT-PCR(IC-RT-PCR)和试管捕作RT-PCR(TC-RT-PCR)技术,对苹果褪绿叶斑病毒(Apple chlorotic leaf spot virus,aclsv)和苹果茎沟病毒(Apple stem grooving virus,ASGV)进行了检测分析。结果表明,TC/IC-RT-PCR均能有效检测梨粗提液中的aclsv和ASGV,获得了两种病毒大小约358bp和499bp的目标扩增片段;但IC-RT-PCR检测aclsv的效果受到病毒分离株间血清学关系影响。与传统的RT-PCR相比,IC/TC-RT-PCR不仅灵敏度更高,而且不需提取总RNA,可以简化操作程序和减少苯酚、氯仿类有机试剂对人体的伤害和对环境的污染,适合于大量梨样品的病毒快速灵敏检测。

关键词：砂梨 aclsv ASGV IC-RT-PCR TC-RT-PCR

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苹果ACLSV CP基因酵母双杂交诱饵载体构建及自激活鉴定

苹果褪绿叶斑病毒PBM1（李假痘）毒株的提纯、抗血清制备及ELISA检测

中国植物保护学会第十一次全国会员代表大会暨2013年学术年会

作者：段豪王亚南曹克强河北农业大学植物保护学院

构建了用于苹果褪绿叶斑病毒(Apple chlorotic leaf spot virus,aclsv)外壳蛋白(coat protein,CP)酵母双杂交试验的诱饵载体,并进行了自激活及毒性验证。以含有aclsv CP特异性序列的重组质粒为模板,经PCR扩增获得含有Nde I/Pst I双酶切... 详细信息

构建了用于苹果褪绿叶斑病毒(Apple chlorotic leaf spot virus,aclsv)外壳蛋白(coat protein,CP)酵母双杂交试验的诱饵载体,并进行了自激活及毒性验证。以含有aclsv CP特异性序列的重组质粒为模板,经PCR扩增获得含有Nde I/Pst I双酶切位点的CP特异性序列,连接到pMD18-T simple载体,测序鉴定正确后,Nde I/Pst I双酶切获得的CP目的基因与同样双酶切的酵母质粒载体pGBKT7连接,转化酵母菌株Y2H gold,并进行自激活与毒性试验。结果表明重组质粒pGBKT7-CP序列正确,转化酵母菌株无自激活、无毒性。

关键词： aclsv 酵母双杂交诱饵载体自激活检测

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植物病理学报 1996年第4期26卷 337-340页

作者：姜中武 W.Jelkmann 烟台市果树科学研究所德国联邦农林生物研究中心果树植保所中国科学院微生物研究所

从木本植物分离的苹果褪绿叶斑病毒（ａｐｐｌｅｃｈｌｏｒｏｔｉｃｌｅａｆｓｐｏｔｖｉｒｕｓ，Ｔｒｉｃｈｏｖｉｒｕｓ组）的ＰＢＭ１毒株能引起李品种“Ｈａｕｓｚｗｅｔｓｈｅ”的假痘病，将其繁殖在昆诺藜（Ｃｈｅｎｏｐｏｄｉｕ... 详细信息

从木本植物分离的苹果褪绿叶斑病毒（ａｐｐｌｅｃｈｌｏｒｏｔｉｃｌｅａｆｓｐｏｔｖｉｒｕｓ，Ｔｒｉｃｈｏｖｉｒｕｓ组）的ＰＢＭ１毒株能引起李品种“Ｈａｕｓｚｗｅｔｓｈｅ”的假痘病，将其繁殖在昆诺藜（Ｃｈｅｎｏｐｏｄｉｕｍｑｕｉｎｏａ）上。感染ＰＢＭ１毒株的昆诺藜叶组织用两次蔗糖梯度离心提纯。每１００ｇ叶组织的病毒产量平均为１．６８ｍｇ。在电镜下可观察到弯曲状病毒颗粒上的螺纹结构。通过ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳分析，病毒外壳蛋白的分子量为２１．５ｋＤａ。用提纯的病毒免疫家兔制备的抗血清和ＥＬＩＳＡ法，对感染ＰＢＭ１的昆诺藜叶片和桃花进行了灵敏的检测。

关键词：李假痘 ELISA 提纯抗血清病毒 aclsv

Quantitative analysis of the interaction of heterologous viruses with Plum pox virus in C5 HoneySweet transgenic plums

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Journal of Integrative Agriculture 2019年第10期18卷 2302-2310页

作者： Khushwant Singh Tereza Neubauerová Jiban Kumar Kundu Plant Virus and Vector Interactions Group Division of Crop Protection and Plant Health Crop Research Institute

Stone fruits are an important crop in most parts of the world and are heavily challenged by several viruses including Plum pox virus (PPV), Prune dwarf virus (PDV), Prunus necrotic ringspot virus (PNRSV), and Apple chlorotic leaf spot virus (aclsv). We validated the PPV resistance in C5 plum plants (commercially known as HoneySweet) grown in the Czech Republic for more than 16 years in a field trial experiment under natural environmental conditions. We quantified single (PPV-Rec) and mixed viruses (PPV-Rec+aclsv, PPV-Rec+PDV and PPV-Rec+aclsv+PDV) in C5 transgenic plums inoculated for the period 2016 to 2018. The accumulation of PPV-Rec was high (~5.43E+05 copies) compared with that of aclsv (~8.70E+04 copies) in the inoculated graft of C5 transgenic plants. Leaves close to the inoculum sources showed a differential level of virus titre in single and mixed infections (~10 to ~5×10^2 copies). C5 plants with permanent virus pressure showed 103- to 105-fold fewer copies of viruses than those of the inoculated graft. We observed high accumulation of conserved miRNAs such as miR167, miR69 and miR396 in C5 plants co-infected with PPV, aclsv and PDV that are associated with its resistance against viruses. Overall, i) C5 transgenic plums showed high resistance to PPV infection, and a low level (~32 copies) of PPV only accumulated in some grafted plants, ii) high accumulation of PPV was found in inoculated grafts in single PPV infection and mixed infections, iii) heterologous virus infection sustained by aclsv or PDV did not suppress PPV resistance, and iv) high and low conserved microRNAs accumulated in C5 plants.

关键词： PPV PDV aclsv C5 HoneySweet resistance

苹果褪绿叶斑病毒检测:PCR技术与ELISA技术灵敏度比较

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大连大学学报 2001年第6期22卷 19-22页

作者：侯义龙张开春吴雅琴李春敏大连大学生物工程学院辽宁大连116622 北京农林科学院林业果树研究所北京100093 河北农林科学院果树研究所河北昌黎066600

苹果褪绿叶斑病毒（ＡＣＬＳＶ）是感染仁果类和核果类果树的重要病毒．作者应用ＲＴ－ＰＣＲ技术和ＰＡＳ－ＥＬＩＳＡ技术成功地检测了该病毒，并对指示植物中感染该病毒的检测结果进行了报道．试验结果表明，ＲＴ－ＰＣＲ技术的检测... 详细信息

苹果褪绿叶斑病毒（ＡＣＬＳＶ）是感染仁果类和核果类果树的重要病毒．作者应用ＲＴ－ＰＣＲ技术和ＰＡＳ－ＥＬＩＳＡ技术成功地检测了该病毒，并对指示植物中感染该病毒的检测结果进行了报道．试验结果表明，ＲＴ－ＰＣＲ技术的检测灵敏度是ＰＡＳ－ＥＬＩＳＡ技术的８０００倍．

关键词：苹果褪绿叶斑病毒病毒检测 PCR技术 ELISA技术 aclsv 灵敏度

来源于砂梨和桃的苹果褪绿叶斑病毒分离物部分CP基因和3'端非翻译区的序列分析

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植物病理学报 2013年第1期43卷 104-109页

作者：王利平洪霓宋艳苏王俊珍马小方胡国君王国平华中农业大学植物科学技术学院武汉430070 华中农业大学湖北省作物病害监测与安全控制重点实验室武汉430070

苹果褪绿叶斑病毒（Apple chlorotic leaf spot virus，aclsv）是引起果树病害的一种重要病毒。aclsv寄主范围广、发生较普遍，可侵染苹果、梨等仁果类果树和桃、扁桃、李、樱桃、杏等核果类果树，据报道我国梨产区感染aclsv达80％以上。

关键词：苹果褪绿叶斑病毒序列分析非翻译区 CP基因砂梨分离物 aclsv 核果类果树

Fast and Effective Thermotherapy Treatment for <i>In Vitro</i>Virus Eradication in Apple and Pear Trees

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American Journal of Plant Sciences 2017年第10期8卷 2474-2482页

作者： Analí Lizárraga Javier Ascasíbar María Luz González Department of Plant Physiology University of Santiago de Compostela Santiago de Compostela Spain Center of Agrarian Research of Mabegondo INGACAL-CIAM Abegondo Spain

Heat therapy followed by the isolation and in vitro culture of apical meristems is a suitable procedure for virus eradication. However, the period of heat treatment is usually long (28 - 50 days) and the yield of viable plants free of viruses after treatment is often low (aclsv) and Apple mosaic virus (ApMV). We combined heat therapy of in vitro shoots using a temperature gradient from 25℃to 40℃increasing 1℃per day for a shorter period of time (18 days) with the posterior isolation and culture of apical meristems. All DNA samples analyzed, obtained from plants developed from meristems, were 100% free of ApMV and almost 90% free of aclsv. With this in vitro procedure combined we obtained a good yield of tested plants free of viruses. Our method is fast and effective and it could be also useful to eradicate these and other viruses in other fruit trees.

关键词： Heat Therapy Meristem Culture aclsv ApMV Malus Pyrus

利用酵母双杂交技术筛选与苹果褪绿叶斑病毒运动蛋白互作的西方烟蛋白

维普期刊数据库评论

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植物病理学报 2023年第6期53卷 1141-1147页

作者：张磊李文琦孙平平张斌李正男内蒙古农业大学园艺与植物保护学院呼和浩特010018 内蒙古师范大学生命科学与技术学院呼和浩特010022

苹果褪绿叶斑病毒(apple chlorotic leaf spot virus,aclsv)是蔷薇科果树上的一种重要病毒,其致病机制尚不清楚。以具有基因沉默抑制子功能的运动蛋白(movement protein,MP)为诱饵,利用酵母双杂交技术筛选与其互作的西方烟37B(Nicotiana... 详细信息

苹果褪绿叶斑病毒(apple chlorotic leaf spot virus,aclsv)是蔷薇科果树上的一种重要病毒,其致病机制尚不清楚。以具有基因沉默抑制子功能的运动蛋白(movement protein,MP)为诱饵,利用酵母双杂交技术筛选与其互作的西方烟37B(Nicotiana occidentalis 37B)蛋白。构建了库容量为9.6×10^(6)CFU、平均插入片段>1 kb的西方烟cDNA文库,从中筛选到15种蛋白,涉及植物光合作用、ATP合成代谢、过氧化物代谢、氨基酸代谢、抗逆等过程,可为解析aclsv的致病机制提供依据和方向。

关键词： aclsv 西方烟37B 酵母双杂交互作蛋白

苹果褪绿叶斑病毒辽宁分离物生物学和基因组研究

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植物病理学报 2018年第5期48卷 716-720页

作者：张双纳李正男张尊平范旭东任芳胡国君董雅凤中国农业科学院果树研究所国家落叶果树脱毒中心辽宁兴城125100

苹果褪绿叶斑病毒（Apple chlorotic leaf spotvirus，aclsv）属于乙型线形病毒科（Betaflexiviridae）纤毛病毒属（Trichovirus），基因组为正义单链RNA。含有约7500个核苷酸。编码3个部分重叠的开放阅读框。目前从GenBank数据库可以... 详细信息

苹果褪绿叶斑病毒（Apple chlorotic leaf spotvirus，aclsv）属于乙型线形病毒科（Betaflexiviridae）纤毛病毒属（Trichovirus），基因组为正义单链RNA。含有约7500个核苷酸。编码3个部分重叠的开放阅读框。目前从GenBank数据库可以检索到19个aclsv分离物的基因组序列。

关键词：苹果褪绿叶斑病毒基因组序列分离物 GenBank数据库生物学辽宁开放阅读框 aclsv