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HMGA2对人肾癌细胞achn作用机制的研究

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HMGA2对人肾癌细胞ACHN作用机制的研究

作者：陈乾大连大学

学位级别：硕士

目的:本课题组前期实验证明,在裸鼠移植瘤模型内HMGA2可促进肾癌细胞EMT的发生,有促瘤作用。目前HMGA2在肾癌中的具体作用机制尚不明确。因此,本实验通过研究HMGA2对EMT、TGF-β/Smads信号通路和细胞凋亡相关分子的影响,来探讨HMGA2在... 详细信息

目的:本课题组前期实验证明,在裸鼠移植瘤模型内HMGA2可促进肾癌细胞EMT的发生,有促瘤作用。目前HMGA2在肾癌中的具体作用机制尚不明确。因此,本实验通过研究HMGA2对EMT、TGF-β/Smads信号通路和细胞凋亡相关分子的影响,来探讨HMGA2在人肾癌achn细胞中的作用机制。方法:1、通过RNA干扰技术(si RNA)转染人肾癌achn细胞,构建HMGA2低表达的细胞株。实验分为三组:Control组(空白组)、si RNA-NC(阴性对照组)、si-HMGA2(si-HMGA2-1、si-HMGA2-2、si-HMGA2-3;实验组)。2、通过q RT-PCR和Western blot,在m RNA和蛋白水平检测EMT中E-cadherin、N-cadherin、Snail的表达量。3、通过q RT-PCR和Western blot,在m RNA和蛋白水平检测TGF-β/Smads信号通路中TGF-βR II、Smad-2、Smad-3、Snail的表达量。4、通过q RT-PCR和Western blot,在m RNA和蛋白水平检测细胞凋亡相关分子Bcl-2、Caspase-3、Caspase-9的表达量。结果:1、在q RT-PCR和Western blot实验中,si-HMGA2的三组细胞HMGA2 m RNA和蛋白表达量明显低于Control组和si RNA-NC组,差异有统计学意义(Pachn细胞,并且si-HMGA2-2细胞的转染效果最佳。2、HMGA2对肾癌细胞的作用机制与EMT有关,是通过影响EMT标志蛋白E-cadherin和N-cadherin来实现的。3、HMGA2发挥生物学功能的机制与TGF-β信号通路有关,在TGF-β信号通路中,HMGA2能够与激活的Smad-2、Smad-3相互结合并形成复合物,诱导靶基因Snail的表达,促进Snail蛋白的生成,诱发肾癌细胞EMT,从而促进肾癌细胞的发生、发展及转移。4、HMGA2通过Bcl-2/Caspase-3/Caspase-9信号通路影响细胞凋亡。低表达的HMGA2使得achn细胞中的Bcl-2表达下降,并激活其下游基因Caspase-3、Caspase-9,启动Caspase级联反应,而两者负相关的表达更加速了肾癌细胞的凋亡。

关键词：信号通路 achn EMT HMGA2

白藜芦醇影响人肾细胞癌achn细胞增殖和侵袭的体外研究

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白藜芦醇影响人肾细胞癌ACHN细胞增殖和侵袭的体外研究

作者：李小旦南华大学

学位级别：硕士

目的:观察白藜芦醇对人肾细胞癌achn细胞体外增殖和侵袭的影响,探讨白藜芦醇抑制achn细胞增殖和侵袭实现抗肿瘤作用的可能机制。方法:①体外培养achn细胞至对数生长期,分别加入浓度为10.0μmol/L、25.0μmol/L、50.0μmol/L、100.0... 详细信息

目的:观察白藜芦醇对人肾细胞癌achn细胞体外增殖和侵袭的影响,探讨白藜芦醇抑制achn细胞增殖和侵袭实现抗肿瘤作用的可能机制。方法:①体外培养achn细胞至对数生长期,分别加入浓度为10.0μmol/L、25.0μmol/L、50.0μmol/L、100.0μmol/L的白藜芦醇,并设置对照组;作用12、24和48小时后,MTT法测定各组细胞的吸光度;②药物处理24小时后,相差显微镜下观察实验组和对照组细胞形态的改变;③transwell小室实验检测实验组和对照组穿过基质胶的细胞数;④Westem-blot方法检测实验组和对照组细胞p-Akt蛋白、MMP-2蛋白、TIMP-2蛋白的表达。结果:①MTT法检测显示,经DMSO及各浓度白藜芦醇作用12小时后,增殖抑制率分别为0、8.1%、14.6%、31%、52%;处理24h后抑制率分别为0、9.2%、17.3%、32%、54%;处理48h后抑制率分别为0、9.9%、19.2%、38%、58%。实验组间、实验组与对照组间、同一实验组不同作用时间之间比较,差异有显著性（P＜0.05）。②处理24小时后显微镜下观察:实验组细胞发生明显改变:细胞数量减少、细胞体积明显变小,胞质浓缩。③Transwell实验显示,作用24小时后,实验组穿过基底膜的细胞数分别为55±4.14、34.2±2.28、22.0±2.58、18.2±3.96,与对照组（69.0±2.49）相比有明显抑制;差异有显著性（P﹤0.05）。④Westem-blot结果提示:实验组p-Akt蛋白、MMP-2蛋白的表达随药物浓度的增加而逐渐降低,TIMP-2蛋白的表达随药物浓度的增加而逐渐增加;差异有显著性（P＜0.05）。结论:①白藜芦醇能明显抑制achn细胞的增殖,抑制作用呈时间依赖性和浓度依赖性。②白藜芦醇能明显抑制achn细胞的侵袭能力,抑制作用呈浓度依赖性。③白藜芦醇抑制achn细胞增殖的机制可能与p-Akt蛋白表达降低有关;白藜芦醇抑制achn细胞侵袭的机制可能与MMP-2蛋白表达降低,TIMP-2表达增加有关。

关键词：白藜芦醇肾癌 achn 细胞株增殖侵袭

achn人肾癌裸鼠移植瘤模型的生物学特性及放射治疗观察

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现代泌尿外科杂志 2008年第3期13卷 160-163页

作者：汪磊程伟王子明种铁马红兵付得来西安交通大学医学院第二附属医院泌尿外科陕西西安710004 西安交通大学医学院第二附属医院肿瘤放疗中心陕西西安710004

目的观察achn人肾癌裸鼠皮下移植瘤模型的生物学特性及其对放射线的敏感性。方法分别利用瘤细胞悬液接种法、瘤块包埋法获得achn人肾癌裸鼠移植瘤模型,观察移植瘤的生长情况、成瘤率、肝肺转移率及病理形态。achn皮下荷瘤鼠14只,随机分... 详细信息

目的观察achn人肾癌裸鼠皮下移植瘤模型的生物学特性及其对放射线的敏感性。方法分别利用瘤细胞悬液接种法、瘤块包埋法获得achn人肾癌裸鼠移植瘤模型,观察移植瘤的生长情况、成瘤率、肝肺转移率及病理形态。achn皮下荷瘤鼠14只,随机分为空白对照组和放疗组,6MV X直线加速器对放疗组移植瘤局部单次照射12 Gy,观察裸鼠的耐受性及肿瘤生长抑制情况;透射电镜观察瘤细胞超微结构变化。结果瘤块包埋法成瘤稳定,成瘤率92.5%,肝转移率43%,未见肺转移。裸鼠对12Gy射线局部照射耐受良好,放疗组移植瘤与空白对照组比较生长明显受抑制(Pachn人肾癌裸鼠移植瘤模型可作为肾癌放疗实验研究的有效工具。

关键词：肾癌 achn 裸鼠放疗

血管新生抑制剂TNP-470对鼠achn肾细胞癌增殖与凋亡的影响

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临床泌尿外科杂志 2003年第8期18卷 490-491页

作者：李晓东曾进黄海鹏梅伟河南大学淮河医院泌尿外科河南开封475000 华中科技大学同济医学院附属同济医院泌尿外科

目的 :探讨血管新生抑制剂TNP 4 70对achn肾细胞癌增殖与凋亡状态的影响。方法 :采用TNP 4 70 (4 0mg·kg-1·0 .2ml-1)皮下注射治疗achn肾细胞癌荷瘤裸鼠 ,观察肿瘤生长情况 ,进行细胞增殖与细胞凋亡的研究。结果 :TNP 4 70治疗组与对... 详细信息

目的 :探讨血管新生抑制剂TNP 4 70对achn肾细胞癌增殖与凋亡状态的影响。方法 :采用TNP 4 70 (4 0mg·kg-1·0 .2ml-1)皮下注射治疗achn肾细胞癌荷瘤裸鼠 ,观察肿瘤生长情况 ,进行细胞增殖与细胞凋亡的研究。结果 :TNP 4 70治疗组与对照组相比 ,achn肾癌生长明显减慢 ,肿瘤细胞凋亡指数明显增加 (P 0 .0 5 )。肿瘤体积与凋亡指数间存在负相关 (r =- 0 .85 4 0 ,P achn肾癌有显著的抑制肿瘤生长作用。

关键词：血管新生抑制剂 TNP-470 achn 肾细胞癌增殖凋亡影响

缺氧对肾癌achn细胞缺氧诱导因子1α及上皮钙黏素表达的影响

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山西医药杂志 2014年第18期43卷 2142-2144页

作者：李英杰李贵明山东省泰安市肥城矿业中心医院肾内科 271600

肾癌是源于肾小管或肾集合管上皮细胞的恶性肿瘤。据统计肾癌约占成人恶性肿瘤的2%-3%,且发病率呈现逐年上升的趋势,但病因尚不清楚。肾癌的主要类型有肾透明细胞癌、肾乳头状腺癌、肾嫌色细胞癌等。其中肾透明细胞癌是一种最常见的肾... 详细信息

肾癌是源于肾小管或肾集合管上皮细胞的恶性肿瘤。据统计肾癌约占成人恶性肿瘤的2%-3%,且发病率呈现逐年上升的趋势,但病因尚不清楚。肾癌的主要类型有肾透明细胞癌、肾乳头状腺癌、肾嫌色细胞癌等。其中肾透明细胞癌是一种最常见的肾实质恶性肿瘤,约占肾癌的80%-85%左右,生物学行为极为复杂,对放疗和化疗均不敏感,约有40%以上患者在有效治疗后仍复发。对于其发病机制及治疗的研究迫在眉睫。

关键词：集合管上皮细胞缺氧诱导因子1α 上皮钙黏素肾癌 achn 实质恶性肿瘤肾透明细胞癌肾嫌色细胞癌

益气解毒方对achn肾癌干细胞增殖及凋亡影响的实验研究

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中国药物与临床 2016年第2期16卷 187-188页

作者：黄建峰王鹏王毅东岳亮赵文兵山西中医学院附属中西医结合医院泌尿外科太原030013

肾细胞癌（RCC）是一种常见的泌尿系恶性肿瘤,且发病率呈上升趋势。肾癌细胞对化疗和放疗不敏感,预后不佳。肿瘤干细胞在肿瘤组织中具有无限自我更新的特性,并产生不同分化程度的肿瘤细胞。有研究表明肿瘤干细胞与肿瘤的发生、发展、转... 详细信息

肾细胞癌（RCC）是一种常见的泌尿系恶性肿瘤,且发病率呈上升趋势。肾癌细胞对化疗和放疗不敏感,预后不佳。肿瘤干细胞在肿瘤组织中具有无限自我更新的特性,并产生不同分化程度的肿瘤细胞。有研究表明肿瘤干细胞与肿瘤的发生、发展、转移和复发存在联系。本研究从肿瘤干细胞理论出发探索肾癌防治,为肾癌的治疗提供新方法。

关键词： achn 益气解毒方肿瘤干细胞干细胞增殖肾细胞癌山西中医学院中西医结合医院分化程度自我更新药物血清

miR-9对肾癌细胞株侵袭和增殖能力的影响

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现代泌尿外科杂志 2017年第5期22卷 376-380页

作者：胡佳金露何韬赖裕林全晶潘翔陈佩杰桂耀庭来永庆倪梁朝广州医科大学研究生院广东广州510182 北京大学深圳医院泌尿外科广东深圳518036 广东省男性生殖与遗传重点实验室广东深圳518036

目的研究miR-9在肾癌、癌旁组织表达情况及其在肾癌细胞系(achn)中的作用。方法运用荧光定量RT-PCR方法测定32例肾癌及相应癌旁组织中miR-9的相对表达量。运用侵袭实验(transwell)及增殖实验(MTT、CCK-8)评估miR-9对achn功能的影响。结... 详细信息

目的研究miR-9在肾癌、癌旁组织表达情况及其在肾癌细胞系(achn)中的作用。方法运用荧光定量RT-PCR方法测定32例肾癌及相应癌旁组织中miR-9的相对表达量。运用侵袭实验(transwell)及增殖实验(MTT、CCK-8)评估miR-9对achn功能的影响。结果与癌旁正常组织相比,miR-9在肾癌组织中表达显著上调(Pachn的侵袭及增值能力,而miR-9类似物minic可显著增加achn的侵袭及增值能力(Pachn的侵袭及增殖能力,其表达可能与肾癌的发生及转移机制相关。

关键词： miR-9 肾癌 achn 侵袭增值

miR-450b-3p/TLR8轴在RSV感染肾细胞后对细胞因子IL-6、IL-10、IL-17和IFN-γ分泌的研究

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免疫学杂志 2022年第12期38卷 1046-1053页

作者：吴东张庆红胡兆雄许为佳杨山珊湖北医药学院附属太和医院/十堰市太和医院肾病内科 442000

目的探讨呼吸道合胞病毒(RSV)感染后细胞因子风暴引起肾损伤的潜在机制。方法 RSV感染肾细胞achn后,检测细胞因子风暴关键分子IL-6、IL-10、IL-17和IFN-γ的分泌水平。通过miRNA高通量测序检测RSV感染后不同时间段achn细胞中miRNA水平... 详细信息

目的探讨呼吸道合胞病毒(RSV)感染后细胞因子风暴引起肾损伤的潜在机制。方法 RSV感染肾细胞achn后,检测细胞因子风暴关键分子IL-6、IL-10、IL-17和IFN-γ的分泌水平。通过miRNA高通量测序检测RSV感染后不同时间段achn细胞中miRNA水平,并通过Pearson相关系数分析miRNA表达水平与IL-6、IL-10、IL-17和IFN-γ分泌水平的相关性。通过miRNA inhibitor筛选高相关的miRNA与细胞因子的关系。此外,鉴定miRNA的关键底物。结果 RSV感染肾细胞achn后,细胞因子IL-6、IL-10、IL-17和IFN-γ的分泌水平随着感染时间增加而升高。干扰miR-450b-3p后,IL-6、IL-10、IL-17和IFN-γ的分泌水平上升。敲低TLR8时,RSV感染肾细胞后IL-6、IL-10、IL-17和IFN-γ的分泌水平下降。过表达miR-450b-3p后,TLR8的mRNA水平和蛋白水平均下降;干扰miR-450b-3p后,TLR8的m RNA水平和蛋白水平均上升。此外,miR-450b-3p靶向TLR8 mRNA的3’端非编码区。TLR8敲除后,RSV感染时过表达miR-450b-3p,IL-6、IL-10、IL-17和IFN-γ的分泌水平无显著变化。过表达miR-450b-3p后,MyD88与TRAF6的相互作用水平下降,IRF7和p65的磷酸化水平下降;干扰miR-450b-3p后,MyD88与TRAF6的相互作用水平上升,IRF7和p65的磷酸化水平上升。结论 miR-450b-3p靶向TLR8 mRNA的3’端非编码区,减少了TLR8的蛋白表达水平。RSV感染肾细胞后,miR-450b-3p水平下降,TLR8水平上升,MyD88与TRAF6的相互作用水平上升,转录因子IRF7和p65被激活,细胞因子IL-6、IL-10、IL-17和IFN-γ的分泌水平升高。

关键词： miR-450b-3p TLR8 RSV achn 先天免疫

松萝抗癌活性部位对人泌尿生殖系统肿瘤的抑制作用

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肿瘤防治研究 2017年第6期44卷 403-408页

作者：王静贺小琼姚乾李魁梧胡松杉贺云发西安医学院第二附属医院体检中心西安710038 昆明医科大学公共卫生学院昆明650500 昆明医科大学第三附属医院云南省肿瘤研究所昆明650031 解放军第四七八医院骨科昆明650031

目的研究松萝提取物AMH-T对人泌尿生殖系统肿瘤细胞的体内、体外抗癌作用,观察AMH-T与DDP的体外联合抗癌作用以及对动物的一般毒性,探讨其诱导癌细胞凋亡的可能机制。方法 MTT法检测体外抗癌作用,裸鼠移植瘤试验进行体内抗He La肿瘤研究... 详细信息

目的研究松萝提取物AMH-T对人泌尿生殖系统肿瘤细胞的体内、体外抗癌作用,观察AMH-T与DDP的体外联合抗癌作用以及对动物的一般毒性,探讨其诱导癌细胞凋亡的可能机制。方法 MTT法检测体外抗癌作用,裸鼠移植瘤试验进行体内抗He La肿瘤研究,测量法观察AMH-T对小鼠体重和脏器发育的影响。荧光法检测癌细胞凋亡与Caspase-8信号通路的关系。结果随着AMH-T浓度增加和作用时间的延长,achn、T-24、PC-3、He La等癌细胞死亡增加。AMH-T浓度为8μg/ml时,72 h后癌细胞绝大部分死亡。与DDP联合用药对各癌细胞株均具有体外协同抗肿瘤作用。AMH-T剂量50 mg/kg时,He La移植瘤的相对增殖率为23.67%,肿瘤重量抑制率达到54.20%。AMH-T能影响小鼠肝脏发育,对脾脏、肾脏、心脏和睾丸发育没有显著性影响。AMH-T不影响Caspase-8活性。结论 AMH-T对人泌尿生殖系统肿瘤具有显著性体内和体外抗癌作用,与DDP联合用药具有体外协同抗肿瘤作用;AMH-T诱导癌细胞凋亡与Caspase-8信号通路无关。

关键词：松萝提取物AMH-T DDP achn PC-3 T-24 HeLa