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活性炭与树脂对芝麻ace抑制肽脱苦的工艺优化及其性能比较

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中国油脂 2024年第3期49卷 102-110页

作者：芦鑫游静金璐宋国辉孙强黄纪念河南省农业科学院农副产品加工研究中心郑州450002 河南省农产品生物活性物质工程技术研究中心郑州450002 农业部油料加工重点实验室武汉430062

为改善芝麻ace抑制肽的味道,分别采用活性炭与树脂对芝麻ace抑制肽进行脱苦,以脱苦率、多肽损失率为评价指标,采用单因素实验和正交实验对两种脱苦工艺条件进行优化,并比较两种脱苦方法对芝麻ace抑制肽味觉特性、活性及氨基酸组成的影响... 详细信息

为改善芝麻ace抑制肽的味道,分别采用活性炭与树脂对芝麻ace抑制肽进行脱苦,以脱苦率、多肽损失率为评价指标,采用单因素实验和正交实验对两种脱苦工艺条件进行优化,并比较两种脱苦方法对芝麻ace抑制肽味觉特性、活性及氨基酸组成的影响,以确定最适宜的脱苦方法。结果表明:两种方法均能使芝麻ace抑制肽液苦味降至无法察觉,活性炭脱苦最佳工艺条件为活性炭2号添加量6%、芝麻ace抑制肽液质量浓度10 g/100 mL、吸附温度55℃、吸附时间15 min,在此条件下脱苦率与多肽损失率分别为(96.46±0.57)%和(29.02±0.19)%(电子舌测定苦味为-0.61±0.02);AB-8大孔吸附树脂脱苦最佳工艺条件为树脂添加量12.5%、pH 7、吸附温度35℃、吸附时间15 min、芝麻ace抑制肽液质量浓度10 g/100 mL,在此条件下脱苦率与多肽损失率分别为(95.21±0.93)%和(12.11±0.19)%(苦味为-0.03±0.08);AB-8大孔吸附树脂脱苦的芝麻ace抑制肽活性显著强于活性炭脱苦的,这与不同脱苦方法引起的多肽组成差异有关。综合考虑,AB-8大孔吸附树脂可以更好地降低芝麻ace抑制肽中苦味氨基酸含量,适合用于芝麻ace抑制肽的脱苦。

关键词：芝麻 ace抑制肽多肽脱苦树脂脱苦活性炭脱苦吸附脱苦

青刺果ace抑制肽的分离纯化、结构鉴定及其体外活性评价

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中国食品学报 2024年

作者：张璐甘雨嫣钟玉旺黎依艳范江平王雪峰云南农业大学食品科学技术学院云南省畜产品加工工程技术研究中心

以具有血管紧张素转化酶（ace）抑制活性的青刺果蛋白酶解物为研究对象，采用超滤、强阴离子交换层析分离纯化ace抑制肽，液相色谱-串联质谱鉴定其肽序列。采用傅里叶红外光谱、酶反应抑制剂动力学、MTT试验和分子对接技术解析其二级结... 详细信息

以具有血管紧张素转化酶（ace）抑制活性的青刺果蛋白酶解物为研究对象，采用超滤、强阴离子交换层析分离纯化ace抑制肽，液相色谱-串联质谱鉴定其肽序列。采用傅里叶红外光谱、酶反应抑制剂动力学、MTT试验和分子对接技术解析其二级结构特征、体外活性以及与ace的结合机制。结果表明，分子质量肽序列，通过生物信息学分析确定肽PGDVF为潜在的ace抑制肽(IC50=0.56 mmol/L)。二级结构分析表明PGDVF由α-螺旋（20.28%）、β-折叠（6.21%）、β-转角（31.55%）和无规则卷曲（41.85%）构成，其抑制模型为非竞争性抑制，肽质量浓度小于1 mg/mL时，对HepG2细胞无毒性。分子对接显示PGDVF可通过氢键、疏水作用与ace紧密结合，从而有效抑制ace活性。研究结果可为青刺果降压肽的开发利用提供参考。

关键词：青刺果 ace抑制肽液相色谱-串联质谱二级结构分子对接

辣木籽凝乳酶在水牛乳干酪制备中应用及产ace抑制肽分析

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食品科学 2024年

作者：钟玉旺于梦怡张丹常莹幸福兵黄艾祥王雪峰云南农业大学食品科学技术学院丽江职业技术学院

实验以辣木籽凝乳酶和水牛乳为原料，以干酪感官评分和蛋白水解度为指标优化干酪加工工艺，解析其水溶性肽组成，进一步挖掘具有血管紧张素转化酶(ace)抑制活性的功能性肽及其潜在分子作用机制。结果表明，干酪最佳工艺参数为凝乳pH 5.5... 详细信息

实验以辣木籽凝乳酶和水牛乳为原料，以干酪感官评分和蛋白水解度为指标优化干酪加工工艺，解析其水溶性肽组成，进一步挖掘具有血管紧张素转化酶(ace)抑制活性的功能性肽及其潜在分子作用机制。结果表明，干酪最佳工艺参数为凝乳pH 5.56、凝乳酶添加量0.14%、凝乳时间32 min、热烫拉伸温度80℃，此条件下干酪水解度为12.56%，所得干酪质地均匀有弹性、口感柔软细腻、色泽均匀有光泽，且香味浓郁；基于液质联用手段(LC-MS/MS)在干酪中被检出1600种分子量肽段，活性预测表明613条肽段具有较好的生物活性，主要来源于β-酪蛋白和αS1-酪蛋白，其中具有ace抑制活性的肽段占比达到37.29%；通过活性肽数据库比对结合生物信息学手段筛选出兼具多重活性的已知ace抑制肽和新型ace抑制肽各4条，分子对接技术进一步表明4条新型肽段均可以与ace有效结合，其中2条肽段FGGL、FSPL分别与S2活性口袋结合紧密而显示较强的ace抑制活性。研究为新型植物凝乳酶资源及特色水牛乳干酪的开发利用提供科学依据。

关键词：辣木籽凝乳酶水牛乳干酪 LC-MS/MS ace抑制肽分子对接

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单环刺螠ace抑制肽的重排及构效关系研究

食品与发酵工业 2024年

作者：金丹青杨会成陈静聂鹏初雪梅王玉梅孙坤来浙江海洋大学食品与药学学院浙江省海洋开发研究院舟山市妇幼保健院

为探讨以单环刺螠血管紧张素转换酶（angiotensin converting enzyme，ace）抑制肽为基础设计的重排肽的构效关系，该文以课题组发现的来源于单环刺螠的5条ace抑制肽为基础，进行氨基酸序列重排，设计出20条重组肽，最终筛选出5条最符... 详细信息

为探讨以单环刺螠血管紧张素转换酶（angiotensin converting enzyme，ace）抑制肽为基础设计的重排肽的构效关系，该文以课题组发现的来源于单环刺螠的5条ace抑制肽为基础，进行氨基酸序列重排，设计出20条重组肽，最终筛选出5条最符合经验规则的重排肽。通过ace抑制活性测试、Lineweaver-Burk双倒数法酶抑制动力学实验以及计算机分子模拟对接评测其效果。结果显示：重排肽F2-1、F3-1、F4-1、F5-1、F7-1对ace抑制活性的IC50值分别为（10.15±0.36）、（6.38±0.22）、（35.05±0.38）、（44.14±0.71）、（25.73±0.24）μmol/L，与单环刺螠天然酶解肽F2、F3、F4、F5、F7对ace抑制活性的IC50[（75.47±0.61）、（110.45±0.37）、（46.32±0.42）、（56.35±0.53）、（60.23±0.48）μmol/L]相比，均有显著降低，提示重排后多肽的ace抑制活性显著提高。Lineweaver-Burk图显示的酶动力学参数说明5条重排肽均为ace竞争性抑制模式。分子对接模拟结果显示，5种重排肽都能够通过与ace的活性口袋的位点形成多个氢键和疏水键等交互作用。其中F3-1与F3相比，由原来的非竞争性抑制剂转变为竞争性抑制剂，且ace抑制活性提高了17.31倍。由此可见，ace抑制肽的氨基酸序列及肽链N、C两端的疏水性对其ace抑制活性有重要影响，是天然ace抑制肽进行序列调控或修饰优化并获得高效ace抑制活性肽的有效方法。

关键词：单环刺螠重排肽分子模拟对接 ace抑制肽构效关系

鲍鱼ace抑制肽联合有氧运动对高血压小鼠相关指标的影响

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鲍鱼ACE抑制肽联合有氧运动对高血压小鼠相关指标的影响

作者：张楚涵集美大学

学位级别：硕士

高血压是心脑血管疾病中控制率极低的慢性病,一旦病发其危险系数极高。近年来,我国高血压患病人数持续攀升,引发人们对血压的管理高度重视。市售的降压药物在发挥作用的同时,常为患者带来额外的不适症状。食源性ace（Angiotensin-conver... 详细信息

高血压是心脑血管疾病中控制率极低的慢性病,一旦病发其危险系数极高。近年来,我国高血压患病人数持续攀升,引发人们对血压的管理高度重视。市售的降压药物在发挥作用的同时,常为患者带来额外的不适症状。食源性ace（Angiotensin-converting Enzyme,ace）抑制肽源于天然食物,不仅降压效果温和,同时规避了市售降压药物的副作用,成为高血压防治的重要研究对象。运动训练可通过增强中枢ace2-Ang（1-7）-Mas轴与内皮功能以及降低炎症标志物指标水平与氧化应激反应等途径,发挥下调血压的作用,从而延缓高血压的病情进展。若将ace抑制肽与运动训练联合,不仅可以对高血压起到防治作用,同样也适用于早期高血压患者的治疗。本研究以皱纹盘鲍（Haliotis discus hannai）腹足为原材料制备对ace具有抑制作用的酶解产物,从中分离纯化得到ace抑制肽,对其作用机理进行研究。在此基础上,进一步研究鲍鱼ace抑制肽联合运动干预的降压效果,对高盐及N-硝基-L精氨酸盐酸盐（NG-Nitroarginine methyl ester hydrochloride,L-NAME）诱导的高血压模型小鼠的降血压作用及其可能机制。利用分步酶解的方式,对鲍鱼腹足大分子蛋白质进行酶解,筛选体外ace抑制活性较高组分进行超滤膜浓缩、Superdex peptide 10/300 GL凝胶柱层析与RP-HPLC技术,分离纯化出酶解液中的ace抑制肽。最终通过LC-MS/MS鉴定其氨基酸序列。质谱鉴定结果显示共得到五个肽段,对五个肽段模拟胃肠道液消化后,得到九个尚未被报道的肽段,对这九个肽段进行模拟分子对接。结果显示,AN、AK、AGF、PGIADR与SGGTTM的结合能均小于-5 kcal/mol,同时含有较高的疏水性氨基酸占比,表现出较强的ace抑制效果。这可能与ace的S1、S1'与S2活性位点氨基酸残基Ala354、Glu162及Gln281等形成氢键有关。在上述基础上,探究鲍鱼ace抑制肽联合中等强度有氧运动对高血压小鼠的影响。将6周龄雄性C57BL/6J小鼠随机分为高盐饮食组（HS组,n=8）、高盐饮食+ace抑制肽组（HS+P组,n=8）、高盐饮食+运动组（HS+E组,n=8）与高盐饮食+ace抑制肽+运动组（HS+P+E组,n=8）。高盐饮食小鼠在标准饲料中添加6%Na Cl,并在饮用水中添加0.5 g/L的L-NAME,随后干预8周。ace抑制肽组小鼠每日灌胃300 mg/kg/d的鲍鱼ace抑制肽,运动组小鼠灌胃等体积灭菌水后进行中等强度有氧运动,高盐饮食组作为实验对照组灌胃等体积灭菌水。每周测定体重、摄食量及血压;待8周实验结束后,检测小鼠体重、脂肪组织重量、脏器指数;对其血清测定血脂四项、ace、一氧化氮（Nitric oxide,NO）、白细胞介素-6（Interleukin-6,IL-6）、肿瘤坏死均因子-α（Tumor necrosis factor-α,TNF-α）活性水平;对肾脏、比目鱼肌及腓肠肌进行组织病理切片分析。结果显示,（1）在生理生化指标方面,高盐饮食会引起小鼠的体重、脏器指数、脂肪重量和NO水平降低,同时上调血压、血清ace、甘油三酯（Triglyceride,TG）、低密度脂蛋白（Low density lipoprotein,LDL-C）与炎症标志物表达水平。三种干预方式对下调血清ace与IL-6水平效果相近。联合干预对小鼠的血压、TNF-α、LDL与NO的改善效果均优于单一干预。（2）对肾器官影响方面,高盐饮食使小鼠的肾小球形态发生改变,导致肾小球与球囊腔空隙增厚,部分细胞变性坏死。联合干预改善肾小球形态,显著减小肾小球与囊壁间的基膜厚度。（3）对肌肉结构影响方面,高盐饮食导致小鼠的腓肠肌与比目鱼肌微血管密度显著降低。联合干预后,小鼠的腓肠肌与比目鱼肌微血管密度显著增加,有利于后期提高有氧运动运输氧能力。综上,ace抑制肽、运动对小鼠的各项指标表现出不同程度的改善作用,而营养干预与运动联合会产生一定的叠加效应,其效果优于单一干预方式。本论文为研究以鲍鱼为原料制备抗ace功能活性肽以及运动对高血压的影响提供了理论参考。

关键词：鲍鱼 ace抑制肽高血压高盐饮食有氧运动

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杏仁蛋白源ace抑制肽的研究进展

河北北方学院学报（自然科学版） 2024年第5期40卷 13-21页

作者：张凯刘媛王健杨立亭朱旭冉王秀荣宋丽军李建军河北北方学院河北省农产品食品质量安全分析检测重点实验室河北张家口075000 承德市农林科学院河北承德067000 张家口市花园果品产业有限责任公司河北张家口075000 河北科技师范学院食品科技学院昌黎066600 张家口市农业科学院河北张家口075000

研究发现杏仁副产品中蛋白质含量极为丰富,功能活性物质种类齐全,其中也包括ace抑制肽。介绍了杏仁的营养成分,ace抑制肽的降血压机理,阐述了杏仁ace抑制肽制备方法与分离纯化方法,介绍了几种杏仁ace抑制肽的结构鉴定方法和构效关系研... 详细信息

研究发现杏仁副产品中蛋白质含量极为丰富,功能活性物质种类齐全,其中也包括ace抑制肽。介绍了杏仁的营养成分,ace抑制肽的降血压机理,阐述了杏仁ace抑制肽制备方法与分离纯化方法,介绍了几种杏仁ace抑制肽的结构鉴定方法和构效关系研究、分析检测方法,并对以后杏仁ace抑制肽的研究给出展望。

关键词：杏仁蛋白 ace抑制肽研究进展

固定化酶ESM-BAP酶解制备甜杏仁ace抑制肽及其工艺优化

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农产品加工 2024年第10期 47-52,56页

作者：张凯刘媛王健朱旭冉宋丽军王秀荣河北北方学院河北省农产品食品质量安全分析检测重点实验室河北张家口075000 承德市农林科学院河北承德067000 张家口市花园果品产业有限责任公司河北张家口075000 河北科技师范学院食品科技学院河北昌黎066600 张家口市农业科学院河北张家口075000

为优化固定化酶酶解甜杏仁蛋白制备ace抑制肽的工艺,采用交联法固定蛋壳膜(ESM)和碱性蛋白酶(BAP)后对甜杏仁蛋白进行酶解,通过单因素试验和响应面分析法对酶解条件进行优化。得到的最佳酶解工艺参数为加酶量7200 U/g,酶解时间4.1 h,酶... 详细信息

为优化固定化酶酶解甜杏仁蛋白制备ace抑制肽的工艺,采用交联法固定蛋壳膜(ESM)和碱性蛋白酶(BAP)后对甜杏仁蛋白进行酶解,通过单因素试验和响应面分析法对酶解条件进行优化。得到的最佳酶解工艺参数为加酶量7200 U/g,酶解时间4.1 h,酶解温度56.1℃,pH值10.7,在此条件下甜杏仁的ace抑制率可达65.14%。该条件适合甜杏仁蛋白ace抑制肽的制备,为实际生产和应用提供理论依据。

关键词：固定化酶酶解 ace抑制肽工艺

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双孢菇边角料制备ace抑制肽

中国食品学报 2022年第1期22卷 125-134页

作者：王睿贠建民何奎武淑娟毕阳赵风云甘肃农业大学食品科学与工程学院兰州730070

以工厂生产的双孢菇菇柄、异形菇等边角料为原料,利用碱溶酸沉法提取双孢菇蛋白,超声波处理后,分别选用胰蛋白酶、碱性蛋白酶和复合蛋白酶对其进行酶解,通过测定蛋白水解度和ace抑制率确定最佳的蛋白酶种类。采用响应面设计方法,优化蛋... 详细信息

以工厂生产的双孢菇菇柄、异形菇等边角料为原料,利用碱溶酸沉法提取双孢菇蛋白,超声波处理后,分别选用胰蛋白酶、碱性蛋白酶和复合蛋白酶对其进行酶解,通过测定蛋白水解度和ace抑制率确定最佳的蛋白酶种类。采用响应面设计方法,优化蛋白酶酶解工艺条件,以期获得更高ace抑制率的活性肽。结果表明,碱性蛋白酶酶解双孢菇蛋白产生的ace抑制率最大,其最优酶解工艺参数为:碱性蛋白酶添加量6.25 mg/100 m L,酶解温度40.47℃,酶解时间92.97 min,酶解pH值8.04,此时ace抑制率可达43.75%,在该条件下的验证试验测得水解液的ace抑制率为43.4%,与预测值相近。经真空冷冻干燥,制得具有抑制ace活性的肽样品,得率为24.36 mg/g,工业化生产前景良好,可为双孢菇产业边角料高值利用提供新途径。

关键词： ace抑制肽制备双孢菇边角料超声波辅助酶解高值利用

辣木籽ace抑制肽的分离纯化、结构鉴定及其体外活性评价

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食品科学 2023年第24期44卷 118-126页

作者：钟玉旺徐万莉范尧珠黎依艳王雪峰云南农业大学食品科学技术学院云南昆明650201 丽江职业技术学院云南丽江674100 资阳环境科技职业学院四川资阳641300

采用超滤、离子交换层析分离辣木籽蛋白酶解产物,以血管紧张素转换酶(angiotensin-converting enzyme,ace)抑制率为评价指标,筛选具有较高降压活性的肽组分,并通过高效液相色谱-串联质谱鉴定其肽序列,结合生物信息学和分子对接技术筛选... 详细信息

采用超滤、离子交换层析分离辣木籽蛋白酶解产物,以血管紧张素转换酶(angiotensin-converting enzyme,ace)抑制率为评价指标,筛选具有较高降压活性的肽组分,并通过高效液相色谱-串联质谱鉴定其肽序列,结合生物信息学和分子对接技术筛选出潜在的ace抑制肽,进一步利用傅里叶变换红外光谱、酶反应抑制剂动力学和四甲基偶氮唑蓝法实验解析其二级结构特征及体外活性。结果表明:分离得到的F-b肽组分具有较好的降压效果,共鉴定出11条肽序列,进一步筛选出肽QGPRPQ为潜在的ace抑制肽(IC_(50)=(1.15±0.3)mmol/L),分子对接表明QGPRPQ可以与ace以氢键、疏水作用更好地结合;二级结构分析表明QGPRPQ由22.8%α-螺旋、33.3%β-折叠和43.9%β-转角构成;QGPRPQ的抑制模型为混合型抑制,且质量浓度低于0.01 mg/mL时对HepG2细胞无毒性作用。该研究可为辣木籽蛋白源降压肽的开发利用提供一定的理论参考。

关键词：辣木籽 ace抑制肽高效液相色谱-串联质谱分子对接二级结构酶反应抑制动力学