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中国脊柱脊髓杂志 2020年第12期30卷 1118-1128页

作者：李亚伟徐洁涛蒋彬戴瑜亮李鹏志李磊李力吕国华王冰中南大学湘雅二医院脊柱外科湖南省长沙市410011

目的:探讨a型激酶锚定蛋白2(A-kinase anchoring protein 2,AKAP2)基因表达对生长板软骨细胞(growth plate chondrocytes,GPCs)增殖、分化及细胞外基质代谢的影响及作用机制。方法:设计AKAP2过表达和基因敲除质粒转染GPCs对AKAP2进行过... 详细信息

目的:探讨a型激酶锚定蛋白2(A-kinase anchoring protein 2,AKAP2)基因表达对生长板软骨细胞(growth plate chondrocytes,GPCs)增殖、分化及细胞外基质代谢的影响及作用机制。方法:设计AKAP2过表达和基因敲除质粒转染GPCs对AKAP2进行过表达或干扰,构建AKAP2过表达阴性对照组(Vector组)、AKAP2过表达组(AKAP2 OE组)、AKAP2干扰阴性对照组(si-NC组)、AKAP2干扰组(si-AKAP2组)和AKAP2 OE+U0126组[U0126:细胞外信号调节蛋白激酶1/2 (extracellular signal regulated kinase 1/2,ERK1/2)通路阻滞剂],记录各组GPCs细胞增殖活力及钙盐沉积情况,检测细胞外基质中Ⅱ型胶原α1(collagen typeⅡalpha 1,COL2A1)、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)、Ⅱ型胶原(collagen typeⅡ,COLⅡ)、增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)和性别决定区Y框蛋白9(SRY-related high-mobility group box gene 9,SOX9)以及ERK1/2表达和磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)磷酸化水平,并进行统计学分析。结果 :与Vector组相比,AKAP2 OE组细胞内AKAP2、ALP、COL2A1基因表达与AKAP2、PCNA、SOX9、ALP、COLⅡ蛋白表达及48h细胞活力、p-ERK1/2磷酸化水平均升高,橘红色钙结节显著增多,差异均有统计学意义(P蛋白表达及48h细胞活力、p-ERK1/2磷酸化水平均降低,橘红色钙结节减少,差异均有统计学意义(P0.05)。结论:AKAP2基因可以通过调控ERK1/2信号通路影响软骨细胞增殖、分化和细胞外基质代谢,并可能进一步改变正常的生长板软骨内成骨模式。

关键词： a型激酶锚定蛋白2 软骨细胞增殖分化 ERK1/2信号通路

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微小RNA-186靶向调控ARAP2表达及对口腔鳞癌细胞侵袭迁移的影响

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临床肿瘤学杂志 2019年第8期24卷 695-699页

作者：刘荣光张营游会林解放军第960医院口腔科

目的探讨微小RNA-186(miR-186)靶向调控a型激酶锚定蛋白2(ARAP2)表达及对口腔鳞癌(OSCC)细胞侵袭迁移的影响。方法采用实时定量PCR(QPCR)检测OSCC细胞HN13和人口腔黏膜正常上皮细胞HOK的miR-186水平;脂质体法向HN13细胞分别转染miR-186... 详细信息

目的探讨微小RNA-186(miR-186)靶向调控a型激酶锚定蛋白2(ARAP2)表达及对口腔鳞癌(OSCC)细胞侵袭迁移的影响。方法采用实时定量PCR(QPCR)检测OSCC细胞HN13和人口腔黏膜正常上皮细胞HOK的miR-186水平;脂质体法向HN13细胞分别转染miR-186模拟物(Mimics组)、抑制物(Inhibitor组)和对照随机序列(对照组),QPCR检测miR-186水平,活细胞计数CCK-8试剂盒检测增殖能力,Transwell侵袭和迁移实验检测穿膜细胞数,双荧光素酶报告基因实验验证miR-186与ARAP2的靶向关系,Western blotting检测ARAP2的蛋白水平。结果HN13细胞的miR-186水平高于HOK细胞(3.945±0.712 vs.1.049±0.268,P型3′端非翻译区的相对荧光素酶活性(P型无影响(P>0.05)。与对照组(0.436±0.026)相比,Mimics组的ARAP2水平(0.024±0.013)降低,而Inhibitor组(0.657±0.019)升高,差异有统计学意义(P型生物治疗的靶点。

关键词：口腔鳞状细胞癌微小RNA-186 侵袭迁移 a型激酶锚定蛋白2

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