检索结果-南通市图书馆

微生物学报 2009年第8期49卷 1081-1085页

作者：李耀东关振宏严景华中国科学院微生物研究所北京100101 中国科学院研究生院北京100049 吉林大学畜牧兽医学院北京130062

【目的】筛选细胞内与a型流感病毒m2蛋白(A/m2)相互作用的蛋白质。【方法】将A/m2编码序列插入真核表达载体pCAGGS-CFlag,重组质粒pCAGGS-CFlag-A/m2转染HEK-293T细胞,裂解细胞,以Flag单抗偶联的琼脂糖球珠免疫沉淀A/m2-Flag蛋白,清洗... 详细信息

【目的】筛选细胞内与a型流感病毒m2蛋白(A/m2)相互作用的蛋白质。【方法】将A/m2编码序列插入真核表达载体pCAGGS-CFlag,重组质粒pCAGGS-CFlag-A/m2转染HEK-293T细胞,裂解细胞,以Flag单抗偶联的琼脂糖球珠免疫沉淀A/m2-Flag蛋白,清洗去除非特异性结合的杂蛋白后,SDS-PAGE银染法显示与A/m2共沉淀的蛋白,从胶上切下此蛋白条带进行质谱分析。【结果】成功构建了A/m2的表达质粒,免疫印迹证实了A/m2蛋白在293T细胞中能够表达,免疫共沉淀筛选到与A/m2结合的多种蛋白,分析质谱结果,确定ataxin 10和3个真核翻译起始因子(eIF)为候选蛋白。【结论】ataxin 10与A/m2相互作用为流感病毒感染或接种流感疫苗引发小脑性共济失调提供了解释,eIF与A/m2相互作用表明A/m2可能在调控病毒蛋白合成方面起重要作用。

关键词：免疫共沉淀 a型流感病毒m2蛋白质谱蛋白相互作用

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