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作者：张仁娟遵义医科大学

学位级别：硕士

第一部分锰暴露对APP/PS1小鼠脑内清除Aβ的影响目的:验证锰暴露对APP/PS1小鼠脑皮质清除Aβ的影响。方法:采用课题组前期建立锰暴露致APP/PS1小鼠认知障碍动物模型,20只转基因型小鼠随机分为锰暴露组(APP/PS1-Mn),对照组(APP/PS1-Contr... 详细信息

第一部分锰暴露对APP/PS1小鼠脑内清除Aβ的影响目的:验证锰暴露对APP/PS1小鼠脑皮质清除Aβ的影响。方法:采用课题组前期建立锰暴露致APP/PS1小鼠认知障碍动物模型,20只转基因型小鼠随机分为锰暴露组(APP/PS1-Mn),对照组(APP/PS1-Control),同等数量的同窝野生型小鼠分为锰暴露组(WT-Mn),对照组(WT-Control),用生理盐水进行配制染锰溶液,锰暴露组染毒剂量为60 mg/kg,染毒方式为灌胃,对照组用生理盐水进行等量同等方式处理,一天一次,一周五次。染锰期为4个月,当染锰组小鼠出现认知障碍,记忆减退时处死小鼠,取其脑皮质,Elisa法测定各组小鼠脑皮质中Aβ40,aβ42含量,免疫荧光法测定各组小鼠脑皮质中星形胶质细胞的数量,Real time-PCR检测各组小鼠脑皮质中P53,Bcl-2,Bax,caspase-9,caspase-3的mRNA表达量;Western Blot测定各组小鼠脑皮质中P53,Bcl-2,Bax,caspase-9,caspase-3蛋白的表达量。结果:1.各组小鼠脑皮质中Aβ40,aβ42的含量:WT-Mn组小鼠脑皮质中Aβ40含量显著高于WT-Control组(3.04±0.78 vs 2.27±0.30),aβ42含量显著高于WT-Control组(2.49±0.84 vs 2.06±0.36),差异具有统计学意义(均Paβ42含量显著高于APP/PS1-Control组(2.78±0.26 vs 2.45±0.25),差异具有统计学意义(均P0.05)。4.各组小鼠脑皮质中细胞凋亡相关蛋白的表达量:APP/PS1-Mn组小鼠脑皮质中P53蛋白含量显著高于APP/PS1-Control组(1.02±0.02 vs 0.60±0.01),Bax蛋白含量显著高于APP/PS1-Control组(0.34±0.01 vs 0.19±0.00),caspase-9蛋白含量显著高于APP/PS1-Control组(0.27±0.02 vs 0.12±0.01)和caspase-3蛋白含量显著高于APP/PS1-Control组(0.56±0.02 vs 0.27±0.02),Bcl-2蛋白含量显著低于APP/PS1-Control组(0.25±0.01 vs 0.64±0.02),以上比较均具有统计学意义(P<0.05);WT-Mn组小鼠脑皮质中P53含量显著高于WT-Control组(0.67±0.01 vs 0.22±0.01),Bax含量显著高于WT-Control组(0.49±0.02 vs 0.20±0.02),caspase-9蛋白含量显著高于WT-Control组(0.29±0.02 vs 0.16±0.01),caspase-3含量显著高于WT-Control组(0.61±0.02 vs 0.29±0.02),Bcl-2蛋白含量显著低于WT-Control组(0.08±0.01 vs0.49±0.02),以上比较具有统计学意义(均P<0

关键词：锰暴露 aβ42 星形胶质细胞细胞凋亡线粒体

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枸杞多糖的结构鉴定及其生物活性研究

枸杞多糖的结构鉴定及其生物活性研究

作者：周立爽遵义医学院

学位级别：硕士

目的:对枸杞(Lycium barbarum L.)多糖的化学结构和生物活性进行研究。多糖作为枸杞子中主要的活性成分,其具体的结构与相关的生物活性仍不清楚,故深入研究其结构与活性可为基于枸杞多糖创新药物研究奠定基础。方法:本课题利用干燥成熟... 详细信息

目的:对枸杞(Lycium barbarum L.)多糖的化学结构和生物活性进行研究。多糖作为枸杞子中主要的活性成分,其具体的结构与相关的生物活性仍不清楚,故深入研究其结构与活性可为基于枸杞多糖创新药物研究奠定基础。方法:本课题利用干燥成熟的枸杞果实通过酶(纤维素酶,木瓜蛋白酶,淀粉酶)-水联合提取的方法获得枸杞粗多糖(LBP1)。枸杞粗多糖LBP1采用阴离子交换法(DEAE)以及凝胶过滤色谱法(Sephacryl S-200 HR及Sephacryl S-300 HR)分离纯化得到均一多糖。采用高效液相色谱法(HPGPC)对多糖的分子量进行测定。采用PMP-HPLC柱前衍生法和GC法测定单糖组成、综合运用红外、甲基化、部分酸水解、核磁等各种物理和化学方法表征枸杞多糖理化性质并对其结构进行解析。采用氯磺酸-吡啶法对LBP1B-S-2进行硫酸化衍生得到硫酸化多糖Sul-LBP1B-S-2;采用人微血管内皮细胞(HMEC-1细胞)管腔形成实验来评价LBP1B-S-2及其硫酸化产物Sul-LBP1B-S-2的抗血管生成活性。采用MTT法测定LBP1B-S-2及其硫酸化产物Sul-LBP1B-S-2对HMEC-1细胞生长的影响。以稳定转染淀粉样蛋白(Amloidβpeptide,aβ42)前体蛋白APP和β-分泌酶1-BACE1的人仓鼠细胞(CHO/APPBACE1)和稳定转染aβ42前体蛋白APP的Swetish突变的人胚胎肾细胞(APP Swedish mutant K595N/M596L(HEK293-APPsw))为主要细胞模型,采用ELISA实验评价LBP1A1-1及LBP1C-2对上述细胞中aβ42水平的影响。采用MTT和CCK-8法分别检测LBP1A1-1及LBP1C-2处理后,对CHO/APPBACE1和HEK293-APPsw细胞活力的影响。采用硫磺素T法测定LBP1A1-1对aβ42聚集的影响。采用Tricine-SDS-PAGE来检测LBP1A1-1对aβ42单体,寡聚体和原纤维的影响。采用蛋白质印迹分析测定LBP1C-2对aβ42前体蛋白APP,β-分泌酶1(BACE1),早老素1(presenilin1),s APPβ,ADAM10,胰岛素降解酶(IDE)和β-肌动蛋白(β-actin)的影响。采用RT-PCR(逆转录-PCR)法检测相关基因的在m RNA水平的表达情况。结果:(1)从5.0 kg枸杞子中得到酶-水联合提取粗多糖LBP1(129.0 g,得率为2.58%)(2)LBP1经分离纯化得到四种均一多糖LBP1A1-1,LBP1B-S-2,LBP1C-2和LBP1C-5。经高效凝胶色谱(HPGPC)分析表明上述多糖的相对分子量分别为45.0k Da,80.0 k Da,99.8 k Da和9.8 k Da。其中LBP1A1-1为中性多糖,LBP1B-S-2,LBP1C-2和LBP1C-5为酸性多糖。本论文中我们对LBP1A1-1、LBP1C-2及LBP1B-S-2进行了后续的结构解析,首先是LBP1A1-1,由鼠李糖(Rhamnose,Rha),阿拉伯糖(Arabinose,Ara),葡萄糖(Glucose,Glc)和半乳糖(Galactose,Gal)组成,摩尔比为1.2:47.8:1.4:49.8。结构分析表明LBP1A1-1是以1,4-α-Glc,1,3-β-Gal,1,6-β-Gal为主链,支链主要包括Terminal(T)-β-Rha,T-β-Gal,T-α-Ara,T-β-Ara和1,5-α-Ara。支链连接于主链糖残基1,3-β-Gal的C-6位和1,6-β-Gal的C-3位。而LBP1B-S-2由鼠李糖Rha,葡萄糖醛酸Glc A(Glucuronic acid),半乳糖Gal及阿拉伯糖Ara组成,其摩尔比为3.13:3.95:39.37:53.55。结构分析表明LBP1B-S-2是以1,3-β-Gal,1,6-β-Gal为主链,支链主要包括1,4-β-Glc A,T-β-Rha,T-β-Gal,T-α-Ara,T-β-Ara,1,5-α-Ara及部分1,6-β-Gal。支链连接于主链糖残基1,3-β-Gal的C-6位和1,6-β-Gal的C-3位。LBP1C-2由阿拉伯糖Ara,半乳糖Gal,鼠李糖Rha,半乳糖醛酸Gal A组成,其摩尔比为57.0:26.5:8.2:8.3。结构分析表明LBP1C-2是以1,2-α-Rha和1,4-α-Gal A为主链交替连接,支链主要包括T-α-Ara,1,5-α-Ara,T-β-Rha,T-β-Gal,1,3-β-Gal,1,6-β-Gal及1,3,6-β-Gal,支链连接于主链糖残基1,2,4-α-Rha的C-4位。生物活性实验表明:(1)以

关键词：枸杞多糖结构解析硫酸化衍生物抗血管生成 aβ42 阿尔茨海默病

金钗石斛总生物碱对海马中Aβ及其相关分泌酶的影响

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金钗石斛总生物碱对海马中Aβ及其相关分泌酶的影响

作者：黄娟遵义医学院

学位级别：硕士

目的:观察金钗石斛总生物碱对SD大鼠海马神经元中α、β和γ-分泌酶的影响。方法:原代SD大鼠海马神经元,培养至第8 d。利用显微镜观察不同时间SD大鼠海马神经元的生长状态;免疫荧光法检测海马神经元纯度。分别给予不同浓度的DNLA(0.35、... 详细信息

目的:观察金钗石斛总生物碱对SD大鼠海马神经元中α、β和γ-分泌酶的影响。方法:原代SD大鼠海马神经元,培养至第8 d。利用显微镜观察不同时间SD大鼠海马神经元的生长状态;免疫荧光法检测海马神经元纯度。分别给予不同浓度的DNLA(0.35、3.5、35、350和700 ng/m L)处理48 h后,收集细胞检测其各项指标:MTT法检测SD大鼠海马神经元活力;Western blot检测SD大鼠海马神经元中APP、α-分泌酶(ADAM10和ADAM17)、β-分泌酶(BACE1)、γ-分泌酶(PS1)及aβ42的蛋白表达水平。结果:本实验培养的SD大鼠海马神经元纯度至少为84.5%;DNLA对SD大鼠海马神经元细胞活力无明显影响;DNLA减少SD大鼠海马神经元中APP、ADAM10、BACE1和aβ42的蛋白表达,增加ADAM17的蛋白表达,而PS1的蛋白表达有增加的趋势,但无统计学差异。结论:本实验条件下,DNLA能下调SD大鼠海马神经元中APP、α-分泌酶(ADAM10)和β-分泌酶(BACE1)的蛋白表达,上调α-分泌酶ADAM17蛋白表达,从而减少Aβ产生。目的:探究金钗石斛总生物碱(Dendrobium nobile ***,DNLA)对db/db小鼠海马组织中APP、BACE1及aβ42蛋白表达的影响。方法:雄性C57BL/Ks J小鼠为正常组,雄性db/db小鼠随机分为模型组、DNLA低剂量组(20 mg/kg)、DNLA中剂量组(40 mg/kg)及DNLA高剂量组(80 mg/kg)。小鼠从4周(week,w)龄开始灌胃,连续给药17 w,Western blot检测海马组织中APP、BACE1及aβ42的蛋白表达。结果:与正常组比较,模型组小鼠海马组织中APP、BACE1及aβ42的蛋白表达显著增加。与模型组比较,DNLA给药组显著减少db/db小鼠海马组织APP、BACE1及aβ42蛋白表达,且呈现剂量依赖性减少。结论:本实验条件下,DNLA能减少db/db小鼠海马组织中aβ42蛋白表达,其作用机制可能与下调APP和BACE1有关。

关键词：金钗石斛总生物碱海马神经元 α-分泌酶 β-分泌酶 γ-分泌酶 aβ42 db/db小鼠血糖 APP BACE1

MoCA量表在云南部分少数民族地区AD筛查中的应用研究

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MoCA量表在云南部分少数民族地区AD筛查中的应用研究

作者：李芳昆明医科大学

学位级别：硕士

【目的】探讨北京汉语版蒙特利尔认知评估量表(Montreal Cognitive Assessment MoCA)在云南白族和彝族地区阿尔茨海默病(Alzheimer Disease,AD)筛查中的适用性。【方法】使用北京汉语版蒙特利尔认知评估量表(MoCA)对云南省保山市隆阳区... 详细信息

【目的】探讨北京汉语版蒙特利尔认知评估量表(Montreal Cognitive Assessment MoCA)在云南白族和彝族地区阿尔茨海默病(Alzheimer Disease,AD)筛查中的适用性。【方法】使用北京汉语版蒙特利尔认知评估量表(MoCA)对云南省保山市隆阳区瓦马彝族白族乡拉攀村和大理白族自治州西邑镇小水井村50岁以上的少数民族人群进行认知评估,本次研究一共发出量表373份,收回有效量表342份。有效量表中认知评估得分>25分的村民有24人,该人群年龄在52-77岁之间,将其作为健康对照组。实验组是在年龄分布在52-77岁之间的108名认知评估得分≤13分的村民中随机抽取,其中文盲85人,小学及以上39人,根据样本量计算公式计算抽样样本容量为70.218(人按个计算),故抽取71人。健康对照组和实验组均采集血样进行aβ42、Aβ40检测,通过对比实验组和对照组aβ42、Aβ40浓度及aβ42/Aβ40比值的结果,验证MoCA量表在少数民族地区AD筛查中的准确性。数据使用SPSS22.0统计分析软件进行统计分析。【结果】1.本次研究对象共342人,女性173人,占50.58%;男性169人,占49.42%,平均年龄为66.50±8.20岁,MoCA量表总分平均分为15.82±6.33分,MoCA评分≤13分124人,占36.26%,25分≥北京汉语版MoCA评分>13分194人,占56.73%,MoCA评分>25分24人,占7.02%,得分普遍偏低。2.本研究视空间与执行功能平均得分1.37±1.37、抽象平均得分0.27±0.58、延迟回忆平均1.64±1.82,几项测试题目分值均明显偏低。***量表认知评估男性平均得分为18.14±6.12分,女性平均得分为13.54±5.70分,男性得分显著高于女性。4.本研究中文盲的MoCA量表总分平均分为12.01±5.15分,小学平均分为17.71±5.77分,总分平均分为:20.53±4.38分,高中及以上的总分平均分为22.90±4.68分,教育程度越高MoCA平均得分越高。5.本研究实验组、对照组性别、年龄组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。实验组、对照组Aβ40、aβ42的浓度及aβ42/Aβ40的比值进行对比差异无统计学意义(P>0.05)。【结论】1.少数民族地区白族和彝族采用MoCA量表进行认知评估筛查得分普遍偏低,其中大部分人群的分值达到AD诊断分值。2.少数民族地区白族和彝族MoCA量表认知评估总分平均分及各测试项目的平均分均男性高于女性,教育程度越高对应的MoCA分值越高。3.少数民族地区白族和彝族MoCA量表评估分值≤13分的人群血浆中aβ42、Aβ40的浓度及aβ42/Aβ40均在正常范围,本次MoCA筛查结果疑诊为AD的患者可能不是AD患者,不能确诊。4.少数民族地区白族和彝族MoCA量表评测结果不能反应该地区真实的认知水平,故不建议使用汉语版MoCA量表对少数民族地区的白族和彝族进行AD筛查。

关键词：阿尔茨海默病 aβ42 Aβ40 蒙特利尔认知评估量表

SAMP8小鼠增龄性氧化应激与炎症相关蛋白表达及SS31肽的干预作用

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SAMP8小鼠增龄性氧化应激与炎症相关蛋白表达及SS31肽的干预作用

作者：郝志华河北医科大学

学位级别：硕士

目的:阿尔茨海默病（Alzheimer disease,AD）是最常见的、与年龄相关的中枢神经系统退行性疾病。其临床特征主要表现为认知功能逐渐减退,日常生活能力不断下降,并伴有行为障碍和神经精神症状等;病理学特征主要表现为脑组织神经元数量减... 详细信息

目的:阿尔茨海默病（Alzheimer disease,AD）是最常见的、与年龄相关的中枢神经系统退行性疾病。其临床特征主要表现为认知功能逐渐减退,日常生活能力不断下降,并伴有行为障碍和神经精神症状等;病理学特征主要表现为脑组织神经元数量减少,细胞外β-淀粉样蛋白（β-Amyloid peptide,Aβ）沉积、颗粒空泡样变性及神经原纤维缠结（NFTs）等。65岁以上人群AD发病率高达7%0%,给社会和家庭带来了沉重负担。因此,探讨AD的发病机制并寻求有效的治疗药物是当今医学界研究的热点。已有证据表明,该病的发病机制可能与老化、Aβ沉积、慢性神经炎症反应及氧化应激有关。Aβ蛋白是老年斑（senile plaques,SP）的主要成分,是AD病理和导致神经退行性病变主要的致病分子。核转录因子NF-κB（nuclear factor kappa B）可参与调控炎症反应和免疫反应中各种细胞因子和趋化因子的表达,引起炎性细胞的激活及炎性因子的释放,进而调节细胞分裂和凋亡反应。核转录因子NF-E2相关因子（nuclear factor erythroid 2-related factor2,Nrf2）是参与细胞氧化反应的关键因子,通过激活Nrf2/ARE通路,调节一系列抗氧化反应蛋白和Ⅱ相解毒酶的表达,发挥其抗氧化作用。快速老化SAMP8（senescence accelerated mouse prone 8,SAMP8）小鼠模型具有与AD相关的典型的行为学改变和病理学特征,被认为是研究AD病情发展过程中神经退行性改变及可能治疗策略的理想动物模型。正常老化SAMR1（senescence-accelerated mouse-resistant 1,SAMR1）小鼠作为其正常对照模型。新型线粒体靶向抗氧化剂SS31肽（H-D-Arg-DmtLys-Phe-NH2）,易通过血脑屏障到达线粒体内膜,具有清除氧自由基（reactive oxygen species,ROS）、抗炎性反应、保护线粒体和神经元突触结构的功能,但SS31的分子机制及将其应用于AD模型SAMP8小鼠的干预作用尚不十分明确。本实验旨在探讨4、8、12月龄SAMP8小鼠随年龄增长出现的Aβ蛋白水平、NF-κB及Nrf2信号通路变化;8月龄SAMP8小鼠经SS31肽干预8周后Aβ蛋白、NF-κB及Nrf2通路的表达变化情况,进一步探讨SS31的干预作用,为AD的发病机制及治疗方法提供新的思路。方法:以25～32g雄性SAMP8及SAMR1小鼠为研究对象,小鼠均购自天津中医药大学,清洁级动物,于河北省人民医院临床研究中心饲养,以标准鼠粮及饮用水喂养至合适月龄。实验1:18只SAMP8小鼠随机分为三组（n=6）,分别喂养至4月龄（4M group）、8月龄（8M group）和12月龄（12M group）。实验2:8月龄SAMR1溶媒盐水注射组（SAMR1vehicle group,n=6）,作为正常对照组;8月龄SAMP8小鼠12只随机分为2组:溶媒盐水注射组（SAMP8 vehicle group,n=6）,作为快速老化对照组;SS31处理组（SS31 group,n=6）,注射前应先将SS31溶于生理盐水中,浓度为1n M（该剂量已被证实为有效且无毒副作用）。以上三组均以5 mg/kg/day的剂量连续腹腔注射8周。取各组小鼠海马组织,采用western blot蛋白分析法测定aβ42、NF-κB p65、HO-1的总蛋白表达量及Nrf2在胞核（nuclear Nrf2,N-Nrf2）、胞浆（cytoplasm Nrf2,C-Nrf2）中的蛋白表达量;采用RT-q PCR技术测定NF-κB、Nrf2、HO-1的m RNA表达量。结果:1快速老化过程中,SAMP8小鼠海马组织aβ42蛋白水平、NF-κB及Nrf2/ARE信号通路活性随月龄增长呈现增高趋势1.1 aβ42的蛋白水平随月龄增长表达增强aβ42的蛋白水平在4M,8M,12M呈逐渐增高趋势,其中12M较4M增高明显（Paβ42在海马组织随月龄增长其蛋白表达逐渐增强（Fig.2B）。1.2 NF-κB p65在快速老化过程中,其通路活性随月龄增长逐渐增强NF-κB p65基因表达和蛋白水平在4M,8M,12M呈逐渐增高趋势,其中12M较4M明显增高（P<0.05）,表明NF-κB信号通路逐渐激活,炎症反应随月龄增长逐渐加重（Fig.1A,Fig.2A）。1.3 Nrf2/ARE信号通路在快速老化过程中,随月龄增长活性增加Nrf2基因表达和N-Nrf2蛋白水平在4M,8M,12M呈缓慢增高趋势,而C-Nrf2蛋白水平则相应减少;表明随月龄增长,Nrf2表达增多,且逐渐由胞浆转移至胞核中（

关键词：阿尔茨海默病 SAMP8小鼠 SS31肽 aβ42 NF-κB p65 Nrf2

PICALM rs3851179对阿尔兹海默症脑萎缩、认知及脑脊液β淀粉样蛋白和tau蛋白的影响

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PICALM rs3851179对阿尔兹海默症脑萎缩、认知及脑脊液β淀粉样蛋...

作者：武志伟苏州大学

学位级别：硕士

第一部分:PICALM rs3851179和年龄对阿尔兹海默症疾病谱的脑萎缩和认知的影响目的:PICALM rs3851179和年龄是阿尔兹海默症(Alzheimer's disease,AD)的风险因素。AD被认为是连续性的疾病,其疾病谱的临床阶段从认知正常(cognitive normal,... 详细信息

第一部分:PICALM rs3851179和年龄对阿尔兹海默症疾病谱的脑萎缩和认知的影响目的:PICALM rs3851179和年龄是阿尔兹海默症(Alzheimer's disease,AD)的风险因素。AD被认为是连续性的疾病,其疾病谱的临床阶段从认知正常(cognitive normal,CN)到轻度认知障碍(mild cognitive impairment,MCI)再到痴呆。AD 按年龄可分为早发型 AD(early-onset Alzheimer's disease,EOAD)(0.05),然而在GG型基因携带者中,左侧壳核的灰质体积从CN到MCI再到AD显著降低(P0.05)。在A型基因携带者中,EOAD的整体认知好于LOAD(P<0.05),但是在GG型基因携带者中LOAD的整体认知、记忆能力和执行功能均好于EOAD患者(P<0.05)。相关性分析表明,在AD组中,A型基因携带者的左侧壳核的灰质体积与认知损伤、记忆功能和执行功能评分显著相关(P<0.05)。结论:PICALM rs3851179 A等位基因对左侧壳核具有保护作用,可以缓解左侧壳核的萎缩,在A型基因携带者中,左侧壳核的体积与更好的整体认知、记忆功能和执行功能相关。EOAD患者的左侧角回及右侧枕上回萎缩得比LOAD严重,提示EOAD与LOAD脑萎缩的机制可能不同。PICALM和年龄共同影响着AD疾病谱的认知表现,PICALM的基因型不同,EOAD与LOAD认知域的损伤也不相同。第二部分:PICALM对阿尔兹海默症脑脊液β淀粉样蛋白和tau蛋白的影响目的:PICALM rs3851179是阿尔兹海默症(Alzheimer's disease,AD)的风险因素,被认为可以调节β淀粉样蛋白(Amyloid β,Aβ)和tau蛋白的代谢。AD疾病谱的临床阶段从认知正常(cognitive normal,CN)到轻度认知障碍(mild cognitive impairment,MCI)再到痴呆。本研究旨在探讨PICALM rs3851179对AD疾病谱的脑脊液Aβ和tau水平的影响。材料与方法:本研究从第一部分的研究者中筛选出接受腰穿检查的受试者。最终纳入了 108名CN对照者(56例A型基因携带者和52例GG型基因携带者)、189名MCI患者(117例A型基因携带者和72例GG型基因携带者)和70名AD患者(37例A型等位基因携带者和33例GG型基因携带者)。采用一般线性模型分别分析A型基因和GG型基因型携带者中

关键词：阿尔兹海默症年龄 PICALM rs3851179 壳核认知功能执行功能阿尔兹海默症 PICALM rs3851179 壳核 aβ42 tau

长期低中剂量地西泮经自噬途径改善APP/PS1小鼠认知和Aβ沉积

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长期低中剂量地西泮经自噬途径改善APP/PS1小鼠认知和Aβ沉积

作者：张明川北医学院

学位级别：硕士

目的和背景:中国是痴呆患者最多的国家,阿尔茨海默病（Alzheimer's disease,AD）是最常见的痴呆类型,较多AD患者在早期伴有痫性放电和睡眠障碍。地西泮作为最经典的苯二氮卓类药物具有抗癫痫和睡眠障碍等作用,在临床上广泛使用,甚至是A... 详细信息

目的和背景:中国是痴呆患者最多的国家,阿尔茨海默病（Alzheimer's disease,AD）是最常见的痴呆类型,较多AD患者在早期伴有痫性放电和睡眠障碍。地西泮作为最经典的苯二氮卓类药物具有抗癫痫和睡眠障碍等作用,在临床上广泛使用,甚至是AD患者。既往研究表明,苯二氮卓类药物的使用会导致认知受损,而近年来的研究表明,适当剂量的地西泮不仅没有认知损害,甚至起到神经保护作用。AD患者长期使用苯二氮卓类药物对认知的影响受到了广泛的关注。但目前的研究缺乏长期的、适当剂量的针对AD干预的研究,对机制不甚了解。因此长期使用适当剂量地西泮干预AD是否对认知有影响,具体机制值得进一步研究。方法:本研究用2月龄的APP/PS1双转基因小鼠模拟人类AD的早期阶段,将小鼠随机分为对照（CTRL）组、低剂量地西泮（LDZP）组和中剂量地西泮（MDZP）组。每天在固定的时间段灌胃指定剂量的地西泮,每周5天,连续灌胃4个月。6月龄后采用Y-迷宫和Morris水迷宫进行行为学检测,并用透射电镜观察自噬形态。利用Western Blot检测皮层和海马GABRG2、m TOR、p62、LC3-II/LC3-I的水平。免疫组织化学染色检测皮层和海马Aβ、Neu N、p62、LC3B的表达。结果:与对照组相比,LDZP组和MDZP组小鼠在Morris水迷宫显示出更短的潜伏期,Y-迷宫中有更高的交替百分比。免疫组织化学染色结果显示地西泮组小鼠皮层和海马Aβ沉积、p62表达减少,Neu N、LC3B表达更多。Western Blot结果显示,LDZP组和MDZP组地西泮作用受体GABRG2表达增多,自噬相关蛋白LC3-II/LC3-I表达增多,而m TOR和p62表达降低,总的来说,地西泮干预后自噬增强。结论:我们的研究发现,长期低中剂量地西泮可以通过激活和增强自噬,改善APP/PS1双转基因小鼠的认知功能和减少Aβ沉积。该研究阐明了适当剂量地西泮对早发性AD神经保护作用机制,为临床上早发性AD早期使用适当剂量地西泮提供了理论依据,并为AD的早期干预提供了新的思路。

关键词：地西泮 AD APP/PS1 自噬 aβ42

轴突形态学改变在血管性痴呆发病机制中的作用

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轴突形态学改变在血管性痴呆发病机制中的作用

作者：陈喜娟郑州大学

学位级别：硕士

缺血性脑卒中是老年人常见的脑血管疾病,因其发病率高、致残率高,病理生理损伤机制复杂而一直是医学研究的热点。传统观点认为,脑缺血特别是一过性脑缺血与阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease, AD）是各自独立的疾病;在临床上,主要由... 详细信息

缺血性脑卒中是老年人常见的脑血管疾病,因其发病率高、致残率高,病理生理损伤机制复杂而一直是医学研究的热点。传统观点认为,脑缺血特别是一过性脑缺血与阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease, AD）是各自独立的疾病;在临床上,主要由脑缺血引起的血管性痴呆（Vascular Dementia, VaD）与AD也被划分为两种不同类型的痴呆。然而,近年的一些临床回顾性研究发现,各种脑缺血相关的危险因素同时与AD的高发病率相关联,而且有脑血管梗塞病史的AD患者,其发生认知功能障碍的几率和程度均明显高于没有脑血管梗塞的单纯AD患者。另外,在一些动物实验研究中也发现了局部脑缺血-再灌注的动物模型可以表现出部分AD的病理特征。可以由此推测,AD与脑缺血之间存在着密切联系,探讨脑缺血影响AD发生发展的作用机制可能有助于AD的早期预防和治疗。目前,有关AD确切的发病机制以及脑缺血与AD的相互作用机制仍不清楚。近年来,轴突病变在AD等神经系统退行性疾病中的作用引起了广泛关注,其主要表现为肿胀的轴突和膨体以及轴突转运的障碍。轴突的这些改变在AD患者以及AD动物模型的脑组织中均有发现,且这些病变的发生要早于AD的典型病理学改变,即神经纤维缠结（Neurofibrillary tangle, NFTs）和细胞外老年斑（Senile plaque, SP）的形成。目前,有关一过性脑缺血与轴突病变的关系尚待研究。在前期研究的基础上,为了探究脑缺血在AD发病风险中的重要性,本课题通过可逆性大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型,利用神经在体示踪技术观察了一过性脑缺血后缺血侧不同脑区轴突形态学的时程变化。同时,我们还检测了脑缺血对β淀粉样蛋白（β-amyloid,Aβ）和磷酸化Tau蛋白表达水平及分布的影响,为进一步阐明脑缺血与AD相互作用的病理机制提供了新的研究思路。方法：线栓法阻断大鼠大脑中动脉血供0.5h建立缺血再灌注模型（MCAO）,在模型存活不同时间点（6h,24h,1w,2w,3w,4w）,将神经示踪剂BDA注射在缺血侧各脑区,示踪剂显色后,依据显示的轴突和轴突膨体的直径增加程度进行半定量分级;使用免疫组化及westernblot方法检测脑缺血对β淀粉样蛋白和磷酸化Tau蛋白表达的影响。结果： 1.在短暂性脑缺血再灌注后6h,缺血侧的皮层即可观察到肿胀的轴突和膨体,甚至轴浆物质的漏出。缺血侧的海马以及缺血皮层旁的投射纤维也存在类似的轴突改变,且这种轴突损伤从缺血再灌注后24h至4w持续存在。评分结果显示轴突及膨体的肿胀在缺血再灌注后两周最为明显（P＜0.05）。轴突肿胀和膨体肿胀在各时间点的对照组仅个别出现。 2.再灌注后6h至4w,在缺血侧各脑区肿胀的轴突和膨体以及轴索末端周围均未观察到淀粉样斑块的分布以及aβ42的过表达;磷酸化Tau蛋白染色分布在缺血侧的皮层,海马部位表达不明显。对照组各时间点未观察到明显aβ42和磷酸化Tau蛋白表达。 3. Westernblot结果显示从再灌注后6h起即有磷酸化Tau蛋白水平的增高（P＜0.05）,其表达在1w时显著高于其它时间点,（与对照P＜0.05;与MCAO组其他时间点相比较,P＜0.05）结论：本研究发现一过性的短暂脑缺血再灌注可诱导轴突肿胀等改变,还可引起了磷酸化Tau表达水平的升高;轴突的改变与aβ42和Tau蛋白的表达在空间和时间上存在一定相关性。

关键词：短暂性脑缺血轴突病变阿尔茨海默病 aβ42 Tau

橙皮素早期干预对APPswe/PS1dE9小鼠学习记忆能力和Aβ代谢的影响

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橙皮素早期干预对APPswe/PS1dE9小鼠学习记忆能力和Aβ代谢的影响

作者：王志成承德医学院

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阿尔兹海默症（Alzheimer’s disease,AD）作为一种慢性的神经退行性疾病,其主要特征为学习记忆能力下降导致的记忆障碍等痴呆症状,是引发痴呆症的主要来源。AD发病机制复杂,β淀粉样蛋白（Amyloid beta peptide,Aβ）沉积形成老年斑（S... 详细信息

阿尔兹海默症（Alzheimer’s disease,AD）作为一种慢性的神经退行性疾病,其主要特征为学习记忆能力下降导致的记忆障碍等痴呆症状,是引发痴呆症的主要来源。AD发病机制复杂,β淀粉样蛋白（Amyloid beta peptide,Aβ）沉积形成老年斑（Senileplaques,SP）,进而引发神经元损伤和学习记忆能力降低已得到广泛认可,因此减少脑组织中Aβ生成、增强Aβ清除,减少Aβ在脑组织中沉积成为研究的热点。AD发病阶段分为临床前驱期、轻度认知功能障碍期（Mild cognitive impairment,MCI）以及痴呆期,多年来,以Aβ为治疗靶点的新药在MCI和痴呆期患者临床试验阶段难以达到预期治疗效果。研究发现,在AD患者出现痴呆症状前,脑组织中Aβ经历了长达17年的沉积,从可检测至阈浓度约12年,海马萎缩约4.2年,记忆力减退约3.3年,推测大量临床试验失败的可能原因为MCI和痴呆期患者脑内Aβ含量很高,且脑内神经元已经产生了不可逆损伤,此时减少Aβ含量已是杯水车薪,难以达到治疗效果。从Aβ可检测到记忆能力减退需17年的时间,为早期干预AD进展提供了机会。美国FDA在2018年发布最新AD指南指出,将支持极早期干预。有学者在2014年构想出比临床前驱期更早的主观认知减退（Subjective cognitive decline,SCD）概念。大量的临床试验失败除错过了最佳干预阶段外,可能还与只针对Aβ单靶点作用有关。AD发病原因极其复杂,Aβ在脑组织中大量沉积导致的氧化应激和免疫炎性反应进而引发脑组织中神经元的凋亡,因此开发可以减少Aβ沉积,同时具有降低炎症因子、清除自由基以及保护神经元等作用的药物成为研究热点。黄酮类化合物本身具有抗氧化、降低炎症因子的作用,有实验证实,姜黄素、灯盏花素早期干预AD动物模型,均具有增加Aβ降解酶活性,降低体内Aβ含量,提高学习记忆能力的效果。橙皮素（Hesperetin）是天然二氢黄酮化合物,具有抗炎、抗氧化的药理作用。本实验使用APPswe/PS1d E9双转基因小鼠,以橙皮素早期干预3月龄小鼠6个月,观察橙皮素早期干预对Aβ降解酶活性,神经元损伤以及学习记忆能力的影响,为黄酮类化合物早期干预、多靶点预防AD发生提供理论依据。目的:探讨橙皮素早期干预对APPswe/PS1d E9双转基因小鼠Aβ代谢清除、神经元损伤及学习记忆能力的影响。方法:设立3月龄C57BL/6J小鼠为对照组、对照给药橙皮素10、20剂量组（0.5%CMC、10、20 mg/kg/d）;设立3月龄APPswe/PS1d E9双转基因小鼠为模型组、橙皮素低、中、高给药组（0.5%CMC、20、40、80 mg/kg/d）,每组小鼠灌胃1次/天,连续进行6个月。灌胃结束后,追加3月龄野生型C57BL/6J小鼠为正常对照组。本实验采用Morris水迷宫、Barnes迷宫行为学实验观察各组小鼠的学习记忆能力;通过HE染色观察小鼠脑组织中海马CA1区的神经元细胞状态;免疫组织化学（Immunohistochemistry,IHC）、蛋白印迹法（Western Blot）观察各组小鼠脑组织中aβ42、脑啡肽酶（Neprilysin,NEP）、胰岛素降解酶（Insu Lin-degrading enzyme,IDE）的表达差异;ELISA法检测小鼠血清中aβ42含量。结果:1.行为学实验Morris水迷宫定向航行实验:与对照组相比,模型组小鼠寻找水下平台潜伏期明显延长（P＜0.01）,对照橙皮素给药10、20剂量组、正常对照组寻找水下平台潜伏期明显缩短（P＜0.01）;与模型组相比橙皮素低、中、高剂量组寻找水下平台的潜伏期明显缩短（P＜0.01）。空间探索实验:与对照组相比,模型组小鼠穿越平台位置次数明显减少（P＜0.05）,对照给药橙皮素20剂量组、正常对照组小鼠穿越平台位置次数明显增加（P＜0.05）;与模型组相比,橙皮素低、中、高剂量组小鼠穿越平台位置次数均显著增加（P＜0.01）。Barnes迷宫实验:与对照组相比,模型组的小鼠逃避潜伏期和错误次数均明显增加（P＜0.05）,对照给药橙皮素20剂量组小鼠逃避潜伏期和错误次数均明显减少（P＜0.05）;与模型组相比,橙皮素低、中、高剂量组小鼠逃避潜伏期和寻找目标箱的错误次数均显著降低（P＜0.01）。***染色对照组脑组织海马CA1区神经元层数为3-4层,各细胞之间较为紧密,细胞核结构相对比较完整,对照橙皮素给药10、20剂量组海马CA1区神经元层数为4-5层,排列更为紧密,神经元形态完整、清晰,正常对照组小鼠海马CA1区神经元层数为5-6层,神经元排列十分致密,胞核饱满,边界清晰;模型组脑组织海马CA1区神经元细胞层数为2-3层,疏密程度降低,细胞间

关键词：阿尔茨海默症橙皮素 aβ42 脑啡肽酶胰岛素降解酶

β-淀粉样蛋白单体和寡聚体在星形胶质细胞中的内吞、转运及降解机制的探索与比较

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β-淀粉样蛋白单体和寡聚体在星形胶质细胞中的内吞、转运及降解...

作者：李娅丽华中科技大学

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阿尔茨海默症(AD)是一种常见的具有高发病率、高患病率及高致残率的神经退行性疾病。许多研究证明β-淀粉样蛋白寡聚体(oAβ)具有极大的细胞毒性，能够促使神经元死亡，导致AD发生。星形胶质细胞倾向于清除oAβ，但是机制仍不清楚。因... 详细信息

阿尔茨海默症(AD)是一种常见的具有高发病率、高患病率及高致残率的神经退行性疾病。许多研究证明β-淀粉样蛋白寡聚体(oAβ)具有极大的细胞毒性，能够促使神经元死亡，导致AD发生。星形胶质细胞倾向于清除oAβ，但是机制仍不清楚。因此，本文以星形胶质细胞瘤U87细胞系为实验对象，通过体外制备oAβ并采用硫磺素T(ThT)染色和透射电镜对其表征，利用激光共聚焦荧光显微技术，研究β-淀粉样蛋白单体(sAβ)和寡聚体在星形胶质细胞上的内吞、转运及降解机制的差异。胞吞实验结果表明，sAβ和oAβ均能通过巨胞饮途径进入星形胶质细胞，而且胆固醇在它们的内吞中发挥重要作用，但是统计数据表明二者对同一种胞吞途径的依赖程度不同。同时，经典的网格蛋白介导的胞吞途径并不参与这两种形态多肽的内吞过程，但是dynamin2的剪切作用却是此过程必不可少的。此外，利用RNA干扰技术沉默脂蛋白受体相关蛋白1(lipoprotein receptor-related protein1, LRP1)则抑制了sAβ的内吞过程，但oAβ的内吞不受影响。以上结论表明星形胶质细胞内吞sAβ和oAβ的机制存在差异，而且数据分析显示其更倾向于吸收oAβ。共定位实验结果表明sAβ和oAβ在胞内转运的早期会进入早期内涵体，但最终则在溶酶体中积累。通过细胞活力测定实验(MTS)和体外降解实验进一步证实星形胶质细胞具备降解sAβ和oAβ的能力，及时避免了oAβ的细胞毒性，然而，与sAβ相比，oAβ却更难以被星形胶质细胞降解。因此，我们的研究是首次探究并比较了sAβ和oAβ在星形胶质细胞上的内吞、转运及降解机制的差异，为AD的预防和治疗提供新的靶点。

关键词：星形胶质细胞 aβ42 胞吞途径胞内转运降解