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过表达中期因子增强SMMC 7721细胞对5-Fu耐药及可能机制研究

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中国现代医生 2019年第18期57卷 41-45页

作者：慎华平徐杰伟朱霄峰邱建魏云海张国雷黄惠莲严强浙江省湖州市中心医院普外科浙江湖州313000 浙江省湖州市中心医院妇产科浙江湖州313000 浙江省湖州市中心医院精准医学临床研究中心浙江湖州313000

目的探讨过表达中期因子(MK)增强SMMC 7721细胞对5-氟尿嘧啶(5-Fu)耐药及其可能的机制。方法将SMMC 7721细胞转染pIRES2-EGFP-MK重组质粒过表达,采用实时荧光定量PCR(qPCR)和蛋白质印迹法(WB)检测MK mRNA和蛋白的表达。5-Fu处理后,采用... 详细信息

目的探讨过表达中期因子(MK)增强SMMC 7721细胞对5-氟尿嘧啶(5-Fu)耐药及其可能的机制。方法将SMMC 7721细胞转染pIRES2-EGFP-MK重组质粒过表达,采用实时荧光定量PCR(qPCR)和蛋白质印迹法(WB)检测MK mRNA和蛋白的表达。5-Fu处理后,采用MTT法检测SMMC 7721细胞对5-Fu的耐药。采用WB法检测磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶(p-PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)和NF-κB及Bcl-2、survivin、caspase-3的表达。结果将SMMC 7721细胞转染pIRES2-EGFP-MK重组质粒过表达后,MK mRNA和蛋白的表达增加,ConC组细胞对5-Fu的IC50显著高于Con-A组、Con-B组[(27.36±4.31)mg/L vs (4.57±0.34)mg/L,(4.96±0.46)mg/L],差异具有统计学意义(P细胞p-PI3K(0.66±0.04 vs 0.35±0.03,0.57±0.03)、p-Akt (0.31±0.02 vs 0.17±0.02、0.25±0.02)、NF-κB (0.63±0.05 vs 0.27±0.02,0.53±0.04)、Bcl-2(0.42±0.04 vs 0.13±0.01, 0.38±0.04)、survivin(0.58±0.04 vs 0.18±0.02,0.51±0.04)呈现高表达,caspase-3(0.41±0.04vs 0.88±0.06,0.43±0.03)呈现低表达(P7721细胞对5-Fu耐药,其机制可能与激活PI3K/AKT信号通路有关。

关键词：肝癌 SMMC 7721细胞中期因子 5-氟尿嘧啶磷脂酰肌醇3-激酶蛋白激酶B

GSTθ高表达对肝癌7721细胞的生长及侵袭性的影响

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苏州大学学报（医学版） 2012年第1期32卷 23-25,88页

作者：乔惠萍李启民王英包头医学院第一附属医院放疗科内蒙古包头014010

目的探讨增加GSTθ表达水平对人类肝癌7721细胞生长及侵袭能力的影响。方法通过脂质体Lipo-fectAMINE将pcDNA3-GSTθ真核质粒载体转染获得高GSTθ表达水平的7721稳定转染细胞;采用RT-PCR检测GSTθmRNA的表达水平;采用细胞记数法测定细... 详细信息

目的探讨增加GSTθ表达水平对人类肝癌7721细胞生长及侵袭能力的影响。方法通过脂质体Lipo-fectAMINE将pcDNA3-GSTθ真核质粒载体转染获得高GSTθ表达水平的7721稳定转染细胞;采用RT-PCR检测GSTθmRNA的表达水平;采用细胞记数法测定细胞的生长;采用Boyden小室方法观察细胞侵袭能力的改变。结果 GSTθ高水平表达对7721细胞的生长无明显影响,但使7721细胞的侵袭能力下降。结论本实验证实了在7721细胞中,GSTθ高水平表达可以降低细胞的侵袭能力。

关键词： GSTθ 7721细胞细胞生长侵袭

人肝癌细胞系7721与原代人胎肝细胞用于体外培养HCV的对比研究

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第三军医大学学报 2001年第2期23卷 204-207页

作者：宋志强郝飞闵峰马巧玉刘国栋第三军医大学附属西南医院感染病科全军传染病专科中心重庆400038

目的　研究丙型肝炎病毒 (HCV)在体外培养原代人胎肝细胞和人肝癌细胞系 772 1中复制和表达的异同 ,探讨HCV体外培养条件。方法　原代人胎肝细胞和人肝癌细胞系 772 1分别与HCV感染血清共孵育后 ,用逆转录聚合酶链反应、原位杂交、免... 详细信息

目的　研究丙型肝炎病毒 (HCV)在体外培养原代人胎肝细胞和人肝癌细胞系 772 1中复制和表达的异同 ,探讨HCV体外培养条件。方法　原代人胎肝细胞和人肝癌细胞系 772 1分别与HCV感染血清共孵育后 ,用逆转录聚合酶链反应、原位杂交、免疫组化检测细胞和培养上清中的HCVRNA和抗原表达。结果　从孵育的第 2～ 3天 ,即可在细胞内和 /或培养上清中间断地检出HCVRNA(其中HCV在 772 1细胞株中的复制至少可达 66d ,HCV在人胎肝细胞中的复制持续 2 5d) ;HCV抗原可在感染细胞内得到稳定表达 ,感染细胞内存在HCV负链RNA杂交信号 ,且多位于细胞浆。结论　两种肝细胞对HCV易感 ,尤其是 772 1细胞可以稳定地支持HCV体外复制 ,可用于HCV体外长期培养的靶细胞。

关键词：丙型肝炎病毒人胎肝细胞 7721细胞细胞培养细胞模型 HCV 肝癌

肝癌细胞增殖受M-CSF胞内和胞外自分泌的双重调控

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中国病理生理杂志 2005年第12期21卷 2382-2387页

作者：张蒙夏罗红梅唐圣松雷小勇龙治锋张晓红汪煜华南华大学医学院湖南衡阳421001 南华大学药物药理研究所药物蛋白质组学研究室湖南衡阳421001

目的:研究胞内M-CSF及其受体在肝癌SMMC 7721细胞的表达与性质,探讨胞内M-CSF对SMMC 7721细胞增殖的影响及其机制。方法:以高表达M-CSF的人肝癌细胞系(SMMC 7721细胞)为模型,以免疫组化、流式细胞计数、反义技术与蛋白印迹等方法观测胞... 详细信息

目的:研究胞内M-CSF及其受体在肝癌SMMC 7721细胞的表达与性质,探讨胞内M-CSF对SMMC 7721细胞增殖的影响及其机制。方法:以高表达M-CSF的人肝癌细胞系(SMMC 7721细胞)为模型,以免疫组化、流式细胞计数、反义技术与蛋白印迹等方法观测胞内M-CSF对SMMC 7721细胞增殖的影响及其机制。结果:M-CSF 及其受体主要在SMMC 7721细胞的胞质、胞核中表达,胞内的M-CSF 的相对分子量为20 000,M-CSFR的相对分子量为120 000;免疫共沉淀分析证明M-CSF在细胞内与M-CSFR以复合物的形式存在;M-CSF的单克隆抗体及其反义寡聚核苷酸能抑制SMMC 7721细胞的增殖、下调CYCLIND1/E的表达和上调P16的表达,且M-CSF的单克隆抗体及其反义寡聚核苷酸的联合使用能进一步加强对SMMC 7721细胞抑制作用和增加下调CYCLIND1／E和上调P16的表达幅度。结论:SMMC 7721细胞受M-CSF胞外自分泌和胞内自分泌的双重调控。

关键词：巨噬细胞集落刺激闪子 SMMC 7721细胞肝肿瘤

Ras癌基因及nm23抑癌基因对细胞膜磷脂酶D活性的影响

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肿瘤 2004年第1期24卷 50-52页

作者：王武康刘飞郭鹏王秋雁江南大学医学系生化室无锡2140632 上海复旦大学医学院卫生部糖复合物重点实验室

目的　为研究ras癌基因和nm2 3抑癌基因的高表达对细胞膜磷脂酶D (PLD)活性的影响。方法　用ras癌基因和nm2 3抑癌基因构建的重组质粒 ,分别转染人肝癌细胞株 772 1,建立了高表达ras癌基因和nm2 3抑癌基因的H ras/772 1和nm2 3 H/772 1... 详细信息

目的　为研究ras癌基因和nm2 3抑癌基因的高表达对细胞膜磷脂酶D (PLD)活性的影响。方法　用ras癌基因和nm2 3抑癌基因构建的重组质粒 ,分别转染人肝癌细胞株 772 1,建立了高表达ras癌基因和nm2 3抑癌基因的H ras/772 1和nm2 3 H/772 1细胞株 ,测定 772 1、mock细胞 (空载体转染的 772 1细胞 )、H ras/772 1和nm2 3 H/772 1四种细胞中 ,细胞膜PLD酶活性和PLD酶蛋白表达量。结果　在H ras/772 1细胞中 ,PLD酶活性比 772 1、mock细胞中PLD酶活性显著升高。nm2 3 H/772 1细胞中 ,酶活性却显著降低。但在两种细胞中 ,PLD酶蛋白的量未见显著变化。结论　ras癌基因和nm2 3抑癌基因的高表达对PLD酶活性的影响 ,可能主要是通过影响PLD酶活性的调节因素来实现的。

关键词： Ras癌基因 nm23抑癌基因细胞膜磷脂酶D 活性 7721细胞

同型半胱氨酸对肝癌细胞基因mRNA表达的影响

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中国公共卫生 2004年第12期20卷 1452-1453页

作者：高景玉郭俊生倪瑾第二军医大学军队卫生教研室上海200433 第二军医大学防原医学教研室

目的　观察同型半胱氨酸 (Hcy)对人肝癌细胞株 - 772 1细胞固醇调控元件结合蛋白 - 1(SREBP - 1)基因mRNA表达的影响。方法　用反转录多聚酶联反应法 (RT -PCR)不同浓度 (0 2 ,1和 5mmol/L)、不同时间 (2 ,4 ,8,2 4h) ,Hcy对 772 1细胞... 详细信息

目的　观察同型半胱氨酸 (Hcy)对人肝癌细胞株 - 772 1细胞固醇调控元件结合蛋白 - 1(SREBP - 1)基因mRNA表达的影响。方法　用反转录多聚酶联反应法 (RT -PCR)不同浓度 (0 2 ,1和 5mmol/L)、不同时间 (2 ,4 ,8,2 4h) ,Hcy对 772 1细胞SREBP - 1基因mRNA表达的影响作用。结果　Hcy可使 772 1细胞SREBP - 1基因mR NA表达上调 ,在Hcy浓度为 5mmol/L ,作用 18hSREBP - 1的mRNA表达相对较高。结论　Hcy使 772 1细胞SREBP - 1基因mRNA表达上调。

关键词：同型半胱氨酸 7721细胞 SREBP-1 mRNA

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细菌内毒素诱导人肝癌细胞凋亡的实验研究

西北民族大学学报（自然科学版） 2007年第2期28卷 58-61页

作者：冯若飞西北民族大学生物工程与技术国家民委重点实验室甘肃兰州730030

目的:探讨细菌内毒素对人肝癌细胞株7721的影响程度.方法:用含有细菌内毒素1000 EU/mL、500EU/mL、100 EU/mL、50 EU/mL、0EU/mL的DMEM细胞培养液来培养7721细胞,通过细胞计数来绘制细胞生长曲线,台盼蓝排除法测定细胞活率、用DNA梯形... 详细信息

目的:探讨细菌内毒素对人肝癌细胞株7721的影响程度.方法:用含有细菌内毒素1000 EU/mL、500EU/mL、100 EU/mL、50 EU/mL、0EU/mL的DMEM细胞培养液来培养7721细胞,通过细胞计数来绘制细胞生长曲线,台盼蓝排除法测定细胞活率、用DNA梯形条带法及TUNEL原位法检测细胞凋亡情况.结果:细菌内毒素对肝癌细胞7721生长有明显的抑制作用,且呈剂量依赖性.此种抑制是通过诱导细胞凋亡达到的,肿瘤坏死因子检测结果没有发现规律性.结论:内毒素在体外可以诱导肺腺癌细胞的凋亡,且存在明显的剂量关系,并且此凋亡不是依赖TNF-α途径发生的,为临床上诱导肿瘤细胞凋亡,从而为预防和治疗肿瘤提供了理论依据.

关键词：细菌内毒素 7721细胞凋亡肿瘤坏死因子

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丁酸钠诱导人肝癌细胞凋亡机制

中华实验外科杂志 2006年第11期23卷 1412-1412页

作者：王波涌邵荣江雷道雄艾中立武汉大学中南医院普外科 430071 天津市天和医院普外科

丁酸钠（NaB）作为一种组蛋白去乙酰化酶（HDAC）抑制剂，已被证实能抑制多种体外培养的肿瘤细胞增殖、诱导肿瘤细胞衰老和凋亡。我们拟用NaB作用于人肝癌SMMC-7721细胞，采用FCM检测细胞周期、逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）方法及Wes... 详细信息

丁酸钠（NaB）作为一种组蛋白去乙酰化酶（HDAC）抑制剂，已被证实能抑制多种体外培养的肿瘤细胞增殖、诱导肿瘤细胞衰老和凋亡。我们拟用NaB作用于人肝癌SMMC-7721细胞，采用FCM检测细胞周期、逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）方法及Western blot方法在mRNA及蛋白水平检测p21WAF。

关键词：癌细胞凋亡机制丁酸钠人肝癌组蛋白去乙酰化酶肿瘤细胞增殖 7721细胞聚合酶链反应 FCM检测

THE INFLUENCE OF HUMAN SINGLE CHAIN INTELEUKIN-12 GENE TRANSDUCTION ON THE BIOLOGICAL BEHAVIOR OF HEPATOMA 7721 CELLS

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Chinese Medical Sciences Journal 2001年第3期16卷 147-152页

作者：金莉来保长耿宜萍王一理司履生 Department of Immunopathology Xi'an Medical University Xi'an 710061. China

Objective. To investigate the anti- tumor effects of human single chain interleukin- 12 (hscIL- 12). Method. pcDNA/ hscIL- 12 recombinant was transfected into human hepatic carcinoma cells (7721 cells) by lipofectin method. The 7721/hscIL- 12 cells which secrete hscIL- 12 stably, were obtained via G418 selection, and in vitro the influence of hscIL- 12 gene transduction on the growth of tumor cells was evaluated by cell cycle analysis. In vivo, genetically engineered 7721 cells (7721/hscIL- 12, 7721/pcDNA) and parental cells were implanted into BALB/c nude mice,respectively. 7721/pcDNA and 7721/hscIL- 12 groups were divided into two sub- groups on day 8: one was administered with hPBL twice, 6 days at interval; the other was given equal volume of PBS. Mice were sacrificed on day 26, and spleens and tumors were taken out for histologic assay. Results. hscIL- 12 produced stably by 7721/hscIL- 12 cells had bioactivity, and it was proved by Western blot, immunocytochemistry, and in situ hybridization. In vitro, compared with 7721 and 7721/pcDNA, the 7721/hscIL- 12 grew much more slowly. FACS assay showed apparent G1 arrest of 7721/hscIL- 12 cells. In animal experiment, on day 8 after inoculation, the tumors of 7721 and 7721/pcDNA group were up to 5～ 7mm,while those of 7721/hscIL- 12 group were 2～ *** treated with hPBL, the tumor of 7721/hscIL- 12 group disappeared completely. Histologically, the tumors from 7721/hscIL- 12 without hPBL treatment had numerous lymphocyte infiltration, the tumor cells displayed depression looking, atrophy, focal necrosis and apoptosis , whereas the tumors of 7721 and 7721/pcDNA groups grew thrivingly. Conclusion. hscIL- 12 transduced 7721 cells could induced significant antitumor immune response which resulted in tumor regression totally when the hPBL was inoculated, and also hscIL- 12 has certain effects on mice immune system. These findings suggest that hscIL- 12 and hscIL- 12 gene therapy might have promising prospects in clinical a

关键词：人单链白细胞介素-12 基因转染肝细胞癌 7721细胞免疫功能 hscIL-12 抗肿瘤活性