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孵育和激活剂作用时间对山羊核移植胚胎早期发育的影响

中国海洋与湖沼学会甲壳动物学分会、中国动物学会、中国海洋与湖沼学会生态学分会2000年学术研讨会

作者：吴长功张晓军崔朝霞周令华相建海中国科学院海洋研究所中国科学院海洋研究所中国科学院海洋研究所中国科学院海洋研究所中国科学院海洋研究所

应用高压液相色谱技术对中国对虾及中华绒赘蟹多倍体诱导中6—dmap在卵子内的残留量进行检测.400umol/L6-dmap抑制第二极体释放可以获得三倍体,最高诱导率可达100%.以海水配制的含300μmol/L的6-dmap溶液中处理中华绒螯蟹尚未分裂的卵子... 详细信息

应用高压液相色谱技术对中国对虾及中华绒赘蟹多倍体诱导中6—dmap在卵子内的残留量进行检测.400umol/L6-dmap抑制第二极体释放可以获得三倍体,最高诱导率可达100%.以海水配制的含300μmol/L的6-dmap溶液中处理中华绒螯蟹尚未分裂的卵子,四倍体囊胚期检测诱导率最高可达58%.Waters-NOVAPAKC柱（5mm×15mm）作固定相,以甲醇和水（1:1）为流动相,在紫外254nm处可以检测出6—dmap的存在,最低检测浓度为0.003ug/ml.检测结果表明,处理后的虾卵及蟹卵,经过海水洗涤3次以上,便检测不出6—dmap的存在.在虾卵孵化过程中,6—dmap会得到进一步的稀释,孵化中的对虾膜内无节幼体亦未检测出6—dmap.6-dmap在自然条件下可以降解、不会在环境中积累,研究表明6—dmap在对虾及中华绒螯蟹多倍诱导中个仅是有效的也是安全可靠的.

关键词： 6-dmap 中国对虾中华绒螯蟹多倍体诱导

来源： cnki会议评论

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安徽农业大学学报 2014年第1期41卷 10-13页

作者：李斌曹陈冲陈立子汪存利赵焕李东伟陶勇章美林章孝荣上海交通大学医学院附属第九人民医院上海200011 安徽农业大学动物科技学院合肥233036

探讨了电融合前对重构卵继续孵育及激活剂6-dmap不同作用时间对山羊核移植胚胎体外发育的影响。结果显示，重构卵在成熟液中继续培养后，9～10h组的融合后卵子死亡率（27．42％）显著低于30min和90min组（49．26％和56.3％）（P〈0．05... 详细信息

探讨了电融合前对重构卵继续孵育及激活剂6-dmap不同作用时间对山羊核移植胚胎体外发育的影响。结果显示，重构卵在成熟液中继续培养后，9～10h组的融合后卵子死亡率（27．42％）显著低于30min和90min组（49．26％和56.3％）（P〈0．05），胚胎卵裂率（68．15％）则显著高于30min和90min组（55．6％和54．24％）（P〈0．05）；重构卵用离子霉素激活后，再用6-dmap激活0h、2h、3h、4h、5h及8～10h，各组间的胚胎卵裂率均无显著差异（P〉0．05），但均显著高于未用6-dmap组的卵裂率（氏0．05）。本试验结果表明，电融合前，继续成熟培养重构卵有利于降低电融合时的卵子死亡率，提高卵子利用率；联合使用离子霉素和6-dmap有利于提高激活效果，而6一dmap的作用时间（2～10h）不影响核移植胚胎的卵裂。

关键词：山羊重构卵核移植胚胎化学激活 6-dmap

6-甲氨基嘌呤诱导栉孔扇贝三倍体的细胞学机理

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海洋水产研究 2000年第1期21卷 22-26页

作者：杨爱国王清印孔杰刘志鸿刘萍王如才姜明孟瑞萍中国水产科学研究院黄海水产研究所青岛266071 青岛海洋大学水产青岛海洋大学水产学院 266003 青岛市渔业技术推广站 266001

以 6 0 mg/ L的 6 -甲氨基嘌呤 (简称 6 - dmap)诱导栉孔扇贝三倍体时 ,在荧光显微镜下观察受精卵的染色体行为以及核相组成 ,对照三倍体率和孵化率 ,探讨了不同减数分裂期 6 - dmap处理对染色体倍数性的影响。结果表明 ,处理 5～ 15mi... 详细信息

以 6 0 mg/ L的 6 -甲氨基嘌呤 (简称 6 - dmap)诱导栉孔扇贝三倍体时 ,在荧光显微镜下观察受精卵的染色体行为以及核相组成 ,对照三倍体率和孵化率 ,探讨了不同减数分裂期 6 - dmap处理对染色体倍数性的影响。结果表明 ,处理 5～ 15min可见 3种类型图像 ,第 1种图像可见第一极体和一个雌性及雄性原核 ;第 2种图像可见第一极体和两个雌性原核及一个雄性原核 ;第 3种图像可见两个雌性原核和一个雄性原核 ,随着处理时间延长雌雄原核逐渐形成泡状结构。 6 - dmap抑制第二极体产生的三倍体主要来源于发育至第 2次减数分裂中期的受精卵 ,使一个双倍性的雌性原核与一个雄性原核结合形成三倍体 ;受精卵在第 2次减数分裂的后期时接受处理 ,可使部分受精卵的两个雌性原核和一个雄性原核在融合和分离过程中发生异常。实验证明 ,6 - dmap有效抑制了栉孔扇贝受精卵的染色体分离和原核移动 ,并可造成染色质分散。

关键词：栉孔扇贝三倍体 6-dmap 细胞学核相人工诱导

Studies on Methods and Influencing Factors of Porcine Oocyte Activation

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Agricultural Sciences in China 2003年第11期2卷 1266-1270页

作者： SUNXing-shen YUEKui-zhong LUOMing-jiu TANJing-he CollegeofLifeScience NortheastAgriculturalUniversityHarbin150030P.R.China CollegeofAnimalScienceandVeterinaryMedicine ShandongAgriculturalUniversityTai‘an217018P.R.China

The effects of ionomycin, electrical pulses, dithiothreitol(DTT), 6-dmap and thimersal, used either alone or in combinations, on the activation rate, pronuclear type and cleavage of porcine oocyte were studied in this paper. The results are as follows:(1)The activation rates of oocytes treated with ionomycin(88.9%)or pulsed(80.0%)alone did not differ significantly from each other and from those in oocytes treated in combination with 6-dmap(84. 3 and 79. 1%, respectively). While 6-dmap improved electrical activation(increased the proportion of oocytes with 1 PN), it had no effect on oocyte activation by ionomycin;(2)Post-treatment with DTT significantly enhanced the thimersal activation of porcine oocytes with activation rates increased from 4.6 to 82.6%;(3)When pulsed, the activation rates of oocytes with crimped(85.4%)or fragmented first polar bodies(86. 2%)were significantly higher than those of oocytes with intact polar bodies(58. 8%); the ratio of 1 PN activated oocytes(78. 8%)was significantly higher, but that of 2 PN oocytes(18. 2%)was significantly lower in oocytes with intact polar bodies;(4)The cleavage rate of oocytes activated by electrical stimulus(52.4%)was significantly higher than that in oocytes activated by ionomycin(23.0%)when combined with 6-dmap, but it was not significantly different from that in oocytes activated by electrical stimulus alone(46.1%).

关键词： Oocyte activation Electrical pulse lonomycin 6-dmap Pig

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三种方法诱导熊本牡蛎三倍体的比较研究

水生生物学报 2021年第2期45卷 352-359页

作者：李玲蔚李海昆于瑞海马培振张哲王永旺中国海洋大学海水养殖教育部重点实验室青岛266003

为获得高效的熊本牡蛎的三倍体诱导方法,分别比较了6-dmap、高盐和低盐3种诱导方法在不同的诱导浓度(盐度)、起始诱导时间和持续诱导时间下的卵裂率、孵化率和三倍体率,同时比较了3种方法获得的幼虫的生长、存活和三倍体率变化情况。结... 详细信息

为获得高效的熊本牡蛎的三倍体诱导方法,分别比较了6-dmap、高盐和低盐3种诱导方法在不同的诱导浓度(盐度)、起始诱导时间和持续诱导时间下的卵裂率、孵化率和三倍体率,同时比较了3种方法获得的幼虫的生长、存活和三倍体率变化情况。结果表明,在6-dmap诱导组中,三倍体率和诱导效率分别可达37.97%—58.01%和34.30%—42.50%,培育期间幼虫的平均存活率27.19%,生长率13.03μm/d,三倍体率降低了24.94%;在低盐诱导组中,三倍体率和诱导效率分别可达7.32%—42.25%和2.17%—31.41%,培育期间幼虫的平均存活率33.92%,生长率12.71μm/d,三倍体率降低了20.64%;在高盐诱导组中,三倍体率和诱导效率分别可达7.47%—63.03%和6.58%—49.41%,培育期间幼虫的平均存活率31.66%,生长率13.08μm/d,三倍体率降低了17.64%。综合来看,高盐诱导是诱导三倍体熊本牡蛎的最优方法,其诱导条件的最佳组合为盐度55,起始诱导时间受精后15min,持续诱导时间20min。研究为熊本牡蛎的三倍体诱导提供了技术支持,对熊本牡蛎的多倍体育种具有重要的理论指导意义。

关键词：熊本牡蛎 6-dmap 高盐低盐三倍体率

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化学联合激活可明显提高小鼠孤雌胚胎发育率

动物学杂志 2009年第4期44卷 135-141页

作者：刘京威倪和民郭勇徐杨鲍文玉刘云海北京农学院动物科学技术系北京102206

为探讨一种高效的小鼠卵母细胞孤雌激活的方案,进一步提高孤雌囊胚发育率。用不同浓度的氯化锶及不同作用时间的乙醇,并分别联合6-dmap对不同卵龄小鼠卵母细胞进行活化,统计小鼠卵母细胞卵裂率和体外发育状况。结果显示,15～16h、18～19... 详细信息

为探讨一种高效的小鼠卵母细胞孤雌激活的方案,进一步提高孤雌囊胚发育率。用不同浓度的氯化锶及不同作用时间的乙醇,并分别联合6-dmap对不同卵龄小鼠卵母细胞进行活化,统计小鼠卵母细胞卵裂率和体外发育状况。结果显示,15～16h、18～19h和20～21h卵龄组卵母细胞经6mmol/LSrCl2联合6-dmap处理后,三组的激活率随卵龄增长而升高,其中20～21h卵龄组显著高于15～16h、18～19h组(P6mmol/L和10mmol/L的SrCl2联合6-dmap均能有效地激活小鼠卵母细胞,激活率分别为76.4%和83.6%,桑葚胚率分别为50.0%和56.3%;70ml/L乙醇联合6-dmap以处理7min组获得了较好的激活率和囊胚发育率,分别为77.1%和42.4%,囊胚率均显著高于4min和10min处理组(P6-dmap与SrCl2或乙醇联合应用可以有效抑制第二极体的排出,提高激活胚的二倍体比率;孤雌囊胚的平均细胞数显著低于正常受精囊胚(P6-dmap的激活效果较好。

关键词：小鼠孤雌激活乙醇氯化锶 6-dmap

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栉孔扇贝雄核发育二倍体的人工诱导

中国水产科学 2006年第4期13卷 585-590页

作者：袁媛李琪于瑞海中国海洋大学教育部海水养殖重点实验室中国海洋大学教育部海水养殖重点实验室山东青岛266003

研究了利用6-二甲基氨基嘌呤(60μg/mL;6-dmap)抑制第1卵裂诱导栉孔扇贝[Chlamys farreri(Jones et Pre-ston)]雄核发育二倍体的条件。雄核发育单倍体是将强度为2.8 mW/(cm2.s)的紫外线照射20 s的卵子与正常精子受精后得到的。6-dmap不... 详细信息

研究了利用6-二甲基氨基嘌呤(60μg/mL;6-dmap)抑制第1卵裂诱导栉孔扇贝[Chlamys farreri(Jones et Pre-ston)]雄核发育二倍体的条件。雄核发育单倍体是将强度为2.8 mW/(cm2.s)的紫外线照射20 s的卵子与正常精子受精后得到的。6-dmap不仅可以有效地抑制减数分裂,还可以有效地抑制有丝分裂;抑制第1卵裂的适宜起始时间为受精后80 min,诱导率为21.0%~22.6%。细胞学观察显示,6-dmap抑制第1卵裂产生的雄核发育二倍体主要来源于第1卵裂中期的受精卵,由于阻止了染色体分离和原核移动,导致一个融合的二倍性雌性原核的形成;经紫外线照射的卵核在第1卵裂中期没能形成染色体,而是形成1个浓缩的染色质小体,没有参与第1卵裂后期的核分裂。尽管倍化率和D形幼虫发生率较低,但本研究证实了栉孔扇贝雄核发育二倍体人工诱导的可行性。[中国水产科学,2006,13(4):585-590]

关键词：栉孔扇贝雄核发育二倍体 6-dmap

诱导三倍体太平洋牡蛎群体发育过程中三倍体率的变化

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青岛海洋大学学报（自然科学版） 2001年第5期31卷 666-672页

作者：李赟王昭萍王如才青岛海洋大学教育部水产养殖重点实验室青岛266003

借助染色体计数和流式细胞计数计对 6 - dmap处理和冷休克两种诱导方法获得太平洋牡蛎 (Crassostrea gigas)三倍体群体在各个发育时期三倍体率进行了系统检测。结果发现 ,在 4～ 8细胞时期 ,6 - dmap诱导三倍体率为 75 % ,冷休克诱导三... 详细信息

借助染色体计数和流式细胞计数计对 6 - dmap处理和冷休克两种诱导方法获得太平洋牡蛎 (Crassostrea gigas)三倍体群体在各个发育时期三倍体率进行了系统检测。结果发现 ,在 4～ 8细胞时期 ,6 - dmap诱导三倍体率为 75 % ,冷休克诱导三倍体率为 5 0 % ,在发育至 D形幼虫期和稚贝期 ,两类三倍体群体的三倍体率均有所下降。如从 4～ 8细胞期发育至稚贝期 ,冷休克诱导群体下降了 5 3.0 8%以上 ,6 - dmap诱导群体三倍体率下降了 2 7.36 %。养殖一年后 ,6 - dmap诱导群体三倍体率仍保持在 6 0 %以上 ,而冷休克诱导群体三倍体率已下降至不足 10 %。这一结果说明 ,利用 6 -

关键词：太平洋牡蛎诱导三倍体 6-dmap 流式细胞计数计染色体计数冷休克

栉江珧第1卵裂抑制型雌核发育二倍体人工诱导的研究

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海洋科学 2009年第10期33卷 63-67页

作者：杨青李琪于瑞海孔令锋郑小东中国海洋大学水产学院山东青岛266003

利用6-二甲基氨基嘌呤(60 mg/L;6-dmap)抑制第一卵裂,成功诱导出栉江珧(Atrina pectinata)雌核发育二倍体。研究结果表明在培养温度为24℃的条件下,受精后60 min用质量浓度为60 mg/L的6-dmap处理栉江珧受精卵15 min进行雌核发育二倍体... 详细信息

利用6-二甲基氨基嘌呤(60 mg/L;6-dmap)抑制第一卵裂,成功诱导出栉江珧(Atrina pectinata)雌核发育二倍体。研究结果表明在培养温度为24℃的条件下,受精后60 min用质量浓度为60 mg/L的6-dmap处理栉江珧受精卵15 min进行雌核发育二倍体的诱导效果理想,D形幼虫发生率和诱导率分别为14.7%和22.7%。细胞学观察显示,6-dmap阻止了纺锤体的形成和染色体的移动,导致一个融合的二倍性雌性原核的形成。本研究结果首次提供了栉江珧雌核发育二倍体的细胞学证据。

关键词：栉江珧(Atrina pectinata) 第一卵裂抑制型雌核发育二倍体 6-dmap