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静脉移植5-brdu标记骨髓间充质干细胞参与创面愈合的作用研究

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中国美容医学 2007年第1期16卷 28-31页

作者：马晓菁张娇章庆国东南大学附属中大医院整形外科江苏南京210009

目的:探讨经尾静脉移植入体内的骨髓间充质干细胞(BMSCs)参与皮肤创面愈合的情况。方法:以SD大鼠为研究对象,分离、培养并鉴定大鼠BMSCs。制作大鼠全层皮肤缺损动物模型;经尾静脉注入经5-brdu标记的骨髓间充质干细胞,于不同时间点(3、7... 详细信息

目的:探讨经尾静脉移植入体内的骨髓间充质干细胞(BMSCs)参与皮肤创面愈合的情况。方法:以SD大鼠为研究对象,分离、培养并鉴定大鼠BMSCs。制作大鼠全层皮肤缺损动物模型;经尾静脉注入经5-brdu标记的骨髓间充质干细胞,于不同时间点(3、7、14、21、28天)观察移植细胞参与创面愈合的情况。结果:经流式细胞仪鉴定细胞表达CD29、CD90表达阳性;CD45表达呈阴性;经体外标记的5-溴脱氧尿嘧啶标记率>90%;标记后的干细胞进行移植4周后,实验组大鼠创面局部及边缘可见brdu标记的阳性细胞聚集,对照组中未发现明显的聚集现象。结论:5-brdu完全能够满足移植细胞的标记需要。经尾静脉注射移植入体内的BMSCs可能参与皮肤创面愈合。

关键词：骨髓间充质干细胞 5-brdu 细胞移植创面愈合

体外冲击波结合自体5-brdu标记骨髓间充质干细胞移植治疗骨不连的实验研究

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生物骨科材料与临床研究 2010年第3期7卷 1-4页

作者：王旭明邢更彦韩新明云南省蒙自县武警8750部队医院外科云南蒙自县661100 北京武警总医院关节四肢外科北京100039

目的在体外成功分离培养标记兔骨髓间充质干细胞(Bone mesenchymal stem cells,BMSCs)的基础上,观察体外冲击波疗法(Extracorporeal shock wave therapy,ESWT)结合自体BMSCs移植治疗骨不连的疗效。方法制作兔骨不连模型并根据干预方式... 详细信息

目的在体外成功分离培养标记兔骨髓间充质干细胞(Bone mesenchymal stem cells,BMSCs)的基础上,观察体外冲击波疗法(Extracorporeal shock wave therapy,ESWT)结合自体BMSCs移植治疗骨不连的疗效。方法制作兔骨不连模型并根据干预方式不同随机分为4个组:冲击波结合干细胞组,干细胞组,冲击波组,完全对照组。定期拍片测量骨折间隙宽度变化(2周、6周、10周)、免疫组化观察,10周后比较愈合率。结果标记后的干细胞移植6周后,在冲击波结合干细胞组、干细胞组骨痂中可见(5-bromodeoxyuridine,brdu)标记的阳性细胞聚集,冲击波组和对照组中未发现明显的聚集现象;冲击波结合干细胞组干预后6周、10周,与其它各组骨不连间隙差异有显著性;10周后冲击波结合干细胞组骨不连愈合效果好,与其他各组统计学上差异有意义。结论移植的自体干细胞可能参与了骨不连的成骨,结合冲击波的微动力学刺激,有利于骨折的愈合,有望成为一种较好的骨不连治疗方法。

关键词：体外冲击波疗法骨髓间充质干细胞 5-brdu 自体移植骨不连

乳猪窦房结细胞原代培养及与ColⅠ纤维支架复合培养实验研究

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中国修复重建外科杂志 2009年第8期23卷 980-984页

作者：万居易钟晓琳廖斌王明勇邓明彬泸州医学院附属医院胸心外科四川泸州646000

目的对乳猪窦房结所在部位进行准确定位,建立一套可靠的窦房结细胞取材、分离、纯化培养技术;观察窦房结细胞与ColⅠ纤维支架的相容性。方法24h内新生纯种长白山乳猪5只,雌雄不拘,体重0.45～0.55kg。实验动物采用多导电生理记录仪标记... 详细信息

目的对乳猪窦房结所在部位进行准确定位,建立一套可靠的窦房结细胞取材、分离、纯化培养技术;观察窦房结细胞与ColⅠ纤维支架的相容性。方法24h内新生纯种长白山乳猪5只,雌雄不拘,体重0.45～0.55kg。实验动物采用多导电生理记录仪标记房波最早出现的部位,在该位置取材行原代窦房结细胞培养,分别采用常规方法培养和差速贴壁分离技术、5-brdu处理纯化培养;于左心房部位取材行心房肌细胞纯化培养作为对照。倒置显微镜观察细胞形态、细胞贴壁时间、单细胞出现搏动时间、搏动频率等。将纯化培养的窦房结细胞以5×105个/mL密度接种至经预湿处理的ColⅠ纤维支架复合培养5d,行HE染色观察及扫描电镜观察。结果房波最早出现的位置即为窦房结所在部位。纯化培养的窦房结细胞有3种形态,即梭形、三角形与不规则形,其中梭形细胞最多;心房肌细胞主要为三角形及不规则形,而无梭形细胞。窦房结细胞纯化培养与常规培养比较,梭形细胞所占比例分别为73.0%±2.9%、44.7%±2.3%,二者差异有统计学意义(P5%,二者差异无统计学意义(P>0.05)。窦房结细胞复合ColⅠ纤维支架培养5d,HE染色观察示ColⅠ纤维支架材料中有大量细胞;扫描电镜见细胞成团吸附于支架表面及孔隙侧壁,并可见细胞间通过突起相互连接,或伸出伪足贴附于支架孔隙壁上。结论通过准确窦房结定位,采用差速贴壁结合5-brdu处理的纯化培养可明显提高乳猪窦房结梭形细胞比例,是一种可靠的窦房结细胞纯化培养技术。窦房结细胞和ColⅠ纤维支架有较好的细胞相容性。

关键词：窦房结细胞培养差速贴壁技术 5-brdu Col Ⅰ纤维支架猪

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腹膜乳斑在胃癌腹膜播散过程中的作用

中华实验外科杂志 2000年第3期17卷 243-244页

作者：安伟德胡祥郭文斌沈忠义大连医科大学附属第一医院普外科 116011 大连市中心医院

目的　研究胃癌腹膜播散过程中腹膜乳斑的作用。方法　在 3组实验动物中 ,分别向大鼠腹腔内接种经 5 溴脱氧尿苷 ( 5 bromodeoxyurdine ,5 brdu)标记的Sy86B裸鼠可移植性人胃癌细胞 ,每毫升数量分别为 1× 1 0 5 个、1× 1 0 6 个和 1×... 详细信息

目的　研究胃癌腹膜播散过程中腹膜乳斑的作用。方法　在 3组实验动物中 ,分别向大鼠腹腔内接种经 5 溴脱氧尿苷 ( 5 bromodeoxyurdine ,5 brdu)标记的Sy86B裸鼠可移植性人胃癌细胞 ,每毫升数量分别为 1× 1 0 5 个、1× 1 0 6 个和 1× 1 0 7个。应用免疫组织化学染色 ,观察癌细胞的分布。计数网膜乳斑或非乳斑区标记细胞的数量 ,确定癌细胞的分布。结果　在乳斑或非乳斑区平均标记细胞数 3组的比率分别是 1 63∶1 ( 1× 1 0 5 个 /ml组 )、2 80∶1 ( 1× 1 0 6 个 /ml组 )和 697∶1 ( 1× 1 0 7个/ml组 )。在乳斑或非乳斑区标记细胞数比较差异有非常显著性 (P <0 .0 1 )。结论　标记细胞选择性地侵入网膜乳斑。在胃癌腹膜播散的早期。

关键词：腹膜播散胃癌腹膜乳斑 5-brdu

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脂肪源性干细胞对冻伤创面愈合作用的研究

脂肪源性干细胞对冻伤创面愈合作用的研究

作者：桑晨大连医科大学

学位级别：硕士

目的：提取脂肪源性干细胞（ASCs）并培养;观察干细胞形态及生长传代情况;建立SD大鼠局部冻伤模型;探索脂肪源性干细胞对局部冻伤的治疗作用，为冻伤治疗探索新思路。方法：切取双侧腹股沟皮下脂肪组织。用酶消化法提取ASCs，L-DMEM培... 详细信息

目的：提取脂肪源性干细胞（ASCs）并培养;观察干细胞形态及生长传代情况;建立SD大鼠局部冻伤模型;探索脂肪源性干细胞对局部冻伤的治疗作用，为冻伤治疗探索新思路。方法：切取双侧腹股沟皮下脂肪组织。用酶消化法提取ASCs，L-DMEM培养基培养，1×105个/ml接种于培养皿。利用倒置显微镜对原代细胞进行形态学观察，培养干细胞至第三代，并应用流式细胞仪鉴定。不同终浓度的5-溴脱氧尿嘧啶核苷（5-brdu）标记ASCs，并行细胞免疫荧光染色，于荧光显微镜下观察标记情况;建立SD大鼠冻伤模型：于动物背部设计直径22mm的圆形创面，通过手动制压泵将液氮匀速泵出喷射于实验区，致伤时间分别为0s、3s、5s、8s。致冻次日应用激光多普勒血流探测仪测定血流灌注量并行统计学分析。处死动物后行皮肤组织HE染色。于致冻后3d，1w，2w对8只SD大鼠32个创面进行大体观察。采用含5-brdu标记的第三代干细胞（浓度1×106/ml）1ml应用于冻伤SD大鼠， A组空白对照组，B组经尾静脉注入经5-brdu标记的ASCs悬液1ml，C组经尾静脉注射0.9%氯化钠注射液1ml，D组局部注射5-brdu标记的ASCs悬液，E组局部注射0.9%氯化钠注射液1ml，分别于移植术后7d，14d处死大鼠，切取冻伤创面进行组织固定，石蜡包埋，切片，HE染色及免疫荧光染色。观察移植细胞参与创面愈合的情况。结果：细胞呈成纤维细胞样生长，原代培养的细胞7～10d即达80%以上融合。可进行常规传代培养。流式细胞仪鉴定第三代细胞表达：CD29、CD44表达阳性，CD31、CD45表达呈阴性。应用手动液氮制压泵致冻时间8s可造成SD大鼠背部皮肤重度冻伤创面。10mmol/L5-brdu体外标记第三代ASCs，孵育48h后标记率达80%左右。5-brdu体内示踪实验组：细胞移植14d后大鼠创面局部及边缘可见5-brdu标记的阳性细胞聚集;对照组中未发现明显的聚集现象;抗5-brdu／FVIII、抗5-brdu／波形蛋白免疫双标技术检测结果显示：在创伤部位有部分ASCs分化，提示血管内皮细胞和成纤维细胞参与创面愈合。结论：ASCs取材方便，体外培养及扩增迅速，具有干细胞特性。应用手动液氮制压泵致冻8s可建立标准重度冻伤模型。SD大鼠自体脂肪源性干细胞参与冻伤创面愈合。

关键词：冻伤脂肪源性干细胞 5-brdu

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胃低分化腺癌中标记滞留细胞的病理学研究

胃低分化腺癌中标记滞留细胞的病理学研究

作者：宗园媛山东大学

学位级别：硕士

目的：近来国外很多研究理论认为肿瘤中可能存在一小部分细胞，称为肿瘤起始细胞(tumor initiating cell)，或者肿瘤干细胞(cancer stem cell)。此类细胞是肿瘤的“种子”细胞，可能决定了该肿瘤的生物学行为，并与肿瘤的发展、预... 详细信息

目的：近来国外很多研究理论认为肿瘤中可能存在一小部分细胞，称为肿瘤起始细胞(tumor initiating cell)，或者肿瘤干细胞(cancer stem cell)。此类细胞是肿瘤的“种子”细胞，可能决定了该肿瘤的生物学行为，并与肿瘤的发展、预后、耐药等息息相关。此类细胞具有正常干细胞的一些特性，如慢周期性，可较长时间处于G期，在DNA合成期时可摄取5-溴，2-脱氧尿嘧啶(brdu)标记物并可较长时间地存在于细胞核中，故被称为标记滞留细胞(LRC，lable-retaining cell)。肿瘤干细胞理论与研究仍在初步阶段，存在较多的争议，如肿瘤内是否真正存在此类细胞，此类细胞的形态、数量、生物学特性、以及是否存在特异的标记物等。本研究试图采用brdu标记法观察胃低分化腺癌中标记滞留细胞的数量、分布、形态及特征，为进一步研究肿瘤中标记滞留细胞提供线索和基础。方法： 1、裸鼠胃癌肿瘤模型的建立：将培养的人胃癌细胞株BGC-823接种于裸鼠右腋窝皮下，约一周后裸鼠右腋窝下出现肉眼可见的肿瘤结节。 2、brdu 2mg裸鼠腹腔内注射，隔日一次，连续一周。 3、注射brdu后分别于5，10，15，20，28，35，80天杀死裸鼠，取出裸鼠右腋下肿瘤结节，保存于液氮罐中。 4、取部分肿瘤标本制成冰冻切片及石蜡切片，选用抗brdu抗体以S-P间接法进行免疫组织化学染色，应为细胞核阳性。在光镜下随机选取10个高倍视野，计数每个视野中细胞的阳性细胞数及阳性细胞百分率，对结果进行分析。结果：

关键词：标记滞留细胞胃低分化腺癌裸鼠肿瘤模型 5-brdu 肿瘤干细胞免疫组织化学

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胃癌组织中标记滞留细胞的初步鉴定

济宁医学院学报 2009年第6期32卷 385-387页

作者：魏红李劲松宗园媛王舟孔灵玲彭圣智崔文王旭济宁医学院基础学院山东日照276826 山东大学医学院山东济南250012

目的研究裸鼠胃癌组织中标记滞留细胞的存在及其分布特点。方法培养人胃癌细胞株BGC-823,5-brdu标注后接种于裸鼠右腋窝皮下。于接种后10、20、28、35、42、49、56d处死裸鼠,取其右腋下肿瘤结节进行免疫组化检测。结果实验组接种后第10... 详细信息

目的研究裸鼠胃癌组织中标记滞留细胞的存在及其分布特点。方法培养人胃癌细胞株BGC-823,5-brdu标注后接种于裸鼠右腋窝皮下。于接种后10、20、28、35、42、49、56d处死裸鼠,取其右腋下肿瘤结节进行免疫组化检测。结果实验组接种后第10天,裸鼠肿瘤组织中标记滞留细胞(LRCs)表达最高,达到96.14%,随着时间的增加,LRCs逐渐降低,到第80天在肿瘤中仅有极少量细胞表达brdu,约占0.51%,主要位于癌巢的边缘部位,细胞形态与brdu阴性细胞无明显的差异。结论胃癌BGC-823细胞株在裸鼠体内形成的肿瘤内存在标记滞留细胞,这部分细胞与肿瘤干细胞密切相关,可能在维持肿瘤生长、转移、复发方面发挥重要作用。

关键词：标记滞留细胞胃癌 5-brdu 肿瘤干细胞免疫组织化学

bMSC对肾小管上皮细胞的保护作用及其作用机制

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中华全科医学 2013年第11期11卷 1666-1668,F0003页

作者：仙淑丽刘英莉方均燕张薇上海交通大学附属第九人民医院肾脏内科上海市200011

目的探讨骨髓间充质干细胞(bMSC)移植对大鼠UUO模型肾小管上皮细胞超微结构的改善作用及其可能的作用机制。方法体外分离培养雄性Wistar大鼠bMSC,体外brdu标记,将brdu-bMSC注入同种大鼠体内。45只受体大鼠随机分为3组:假手术对照组(SH组... 详细信息

目的探讨骨髓间充质干细胞(bMSC)移植对大鼠UUO模型肾小管上皮细胞超微结构的改善作用及其可能的作用机制。方法体外分离培养雄性Wistar大鼠bMSC,体外brdu标记,将brdu-bMSC注入同种大鼠体内。45只受体大鼠随机分为3组:假手术对照组(SH组,n=15)、brdu-bMSC+UUO组(BM组,n=15)、生理盐水+UUO组(NS组,n=15)。分别在3 d、7 d和14 d处死大鼠,取下肾脏组织,电镜观察肾小管上皮细胞微结构变化。采用免疫组织化学方法检测brdu阳性bMSC。结果电镜下,随着结扎时间延长肾小管上皮细胞微结构破坏逐渐加重,术后3 d、7 d BMSC组肾小管上皮细胞超微结构明显改善;未在大鼠肾脏组织中发现brdu阳性细胞。结论 bMSC移植可短期内改善肾小管上皮细胞超微结构,对肾小管间质病变起到保护作用,其作用机制可能是通过旁分泌作用。

关键词： 5-brdu 骨髓间充质干细胞单侧输尿管结扎超微结构