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共刺激分子4-1bbl和B7-1在人脑胶质瘤细胞中的表达

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癌症 2006年第3期25卷 326-329页

作者：牟永告彭辉张俊英邵翠杰吴长有陈忠平华南肿瘤学国家重点实验室中山大学中山医学院免疫学教研室广东广州510089

背景与目的:4-1bbl和B7-1为诱导和维持T细胞活化提供了重要的共刺激信号,目前被认为是提高抗肿瘤免疫的治疗靶点。本研究探讨4-bbl和B7-1在7株胶质瘤细胞系表面的表达情况。方法:用流式细胞仪检测7株胶质瘤细胞株表面的共刺激分子4-1bbl... 详细信息

背景与目的:4-1bbl和B7-1为诱导和维持T细胞活化提供了重要的共刺激信号,目前被认为是提高抗肿瘤免疫的治疗靶点。本研究探讨4-bbl和B7-1在7株胶质瘤细胞系表面的表达情况。方法:用流式细胞仪检测7株胶质瘤细胞株表面的共刺激分子4-1bbl和B7-1的表达,同时用MTT法分析胶质瘤细胞系对抗癌药物长春新碱(VCR)敏感性,并分析4-1bbl的表达与耐药性的相关性。结果:发现在所检测的胶质瘤细胞表面有不同程度的表达4-1bbl,但均不表达B7-1。其中T98G和MGR1细胞表面的4-1bbl表达>30%,对VCR不敏感,UW28、SKMG1、MGR2、SF767、SKMG4细胞表面的4-1bbl表达4-1bbl,并且4-1bbl高表达的胶质瘤细胞对长春新碱敏感性差。

关键词：胶质瘤人脑胶质瘤细胞株 4-1bbl B7-1 长春新碱药敏性

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人4-1bbl胞外区基因的克隆与表达研究

生物工程学报 2005年第5期21卷 703-707页

作者：姜文国熊冬生邵晓枫王金宏许元富刘芳郭红星朱祯平杨纯正中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所实验血液学国家重点实验室天津300020

用RTPCR方法从人单核THP1细胞系克隆人41bbl胞外区基因,将其重组到pAYZ表达载体中,构建成人41bbl胞外区基因表达载体。将该载体转化大肠杆菌16C9,获得稳定表达,表达产物主要以可溶性状态存在;SDSPAGE和Westernblot分析显示,其分子量约为... 详细信息

用RTPCR方法从人单核THP1细胞系克隆人41bbl胞外区基因,将其重组到pAYZ表达载体中,构建成人41bbl胞外区基因表达载体。将该载体转化大肠杆菌16C9,获得稳定表达,表达产物主要以可溶性状态存在;SDSPAGE和Westernblot分析显示,其分子量约为22kD,与预期结果一致。这是首次在大肠杆菌中获得41bbl胞外区可溶性表达。生物学活性检测显示41bbl对于维持T淋巴细胞系因子释放非常有益,同时PI单染表明它能抑制Jurkat细胞的凋亡。这将在抗肿瘤免疫治疗中具有潜在应用前景。

关键词： 4-1bbl 协同刺激分子原核表达

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4-1bbl在不同分化胃癌细胞株上的表达

中华实验外科杂志 2010年第4期27卷 444-446页

作者：宋振川李勇王磊檀碧波范立侨赵群河北医科大学第四医院外三科石家庄050011 河北省人民医院胃肠外科

目的观察共刺激分子4-1bbl在人胃高分化腺癌细胞株MKN-28、人胃中分化腺癌细胞株SGC-7901、人胃低分化腺癌细胞株BGC-823、人胃黏液腺癌细胞株MGC-803上的表达。方法用逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）和免疫细胞化学法检测以上4种胃癌... 详细信息

目的观察共刺激分子4-1bbl在人胃高分化腺癌细胞株MKN-28、人胃中分化腺癌细胞株SGC-7901、人胃低分化腺癌细胞株BGC-823、人胃黏液腺癌细胞株MGC-803上的表达。方法用逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）和免疫细胞化学法检测以上4种胃癌细胞株4-1bblmRNA和蛋白的表达；噻唑蓝（MTT）比色法检测人淋巴细胞对不同胃癌细胞的体外杀伤活性；酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测人淋巴细胞与不同胃癌细胞共培养上清液中白细胞介素（IL）-2、IL-10、肿瘤坏死因子（TNF）-α的含量。结果RT—PCR结果示4-1bblmRNA表达从高到低依次为MKN-28（46．63％）、SGC-7901（37．13％）、BGC-823（20．43％）、MGC-803（14．14％）。免疫细胞化学结果示4—1bbl着色程度由深到浅依次为MKN-28、SGC-7901、BGC-823、MGC-803。MTT结果示不同时段不同效靶比下人淋巴细胞对胃癌细胞的体外杀伤活性由高到低为MKN-28、SGC-7901、BGC-823、MGC-803。ELISA结果示不同效靶比下人淋巴细胞与胃癌细胞共培养48h上清液中IL-2、TNF-α的含量由高到低为MKN-28、SGC-7901、BGC-823、MGC-803。而IL-10的含量由高到低为MGC-803、BGC-823、SGC-7901、MKN-28。结论人胃癌细胞株MKN-28、SGC-7901、BGC-823、MGC-803中4-1bbl基因在蛋白和mRNA水平均有表达，且胃癌细胞株的分化程度越高4-1bbl表达水平越高。淋巴细胞对高表达4-1bbl胃癌细胞株的杀伤力较高，而且4—1bbl可能通过促进细胞因子TNF—α、IL-2和细胞抑制因子IL一10的产生调节肿瘤免疫。

关键词：胃癌肿瘤免疫 4-1bbl

转4-1bbl基因细胞诱导带瘤宿主抗瘤效应的体内研究

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中华肝脏病杂志 2002年第6期10卷 409-412页

作者：李晓虹李晓冬卫立辛陈列平郭亚军黄建勇吴孟超上海出入境检验检疫局动植物与食品检验中心 200135 上海第二军医大学国际合作肿瘤研究所上海华源生命科学研究开发有限公司上海第二军医大学东方肝胆外科医院

目的观察协同刺激分子4-1BB Ligand(4-1bbl)基因导入小鼠肝癌细胞Hrpal-6后在小鼠体内诱导的抗瘤效应。方法应用逆转录病毒载体,将小鼠4-1bbl导入小鼠肝癌细胞Hepal-6细胞中,Histidinol(HisD)筛选后获高表达4-1bbl分子附性细胞克隆,... 详细信息

目的观察协同刺激分子4-1BB Ligand(4-1bbl)基因导入小鼠肝癌细胞Hrpal-6后在小鼠体内诱导的抗瘤效应。方法应用逆转录病毒载体,将小鼠4-1bbl导入小鼠肝癌细胞Hepal-6细胞中,Histidinol(HisD)筛选后获高表达4-1bbl分子附性细胞克隆,经丝裂霉素C(MMC)处理制备成肿瘤细胞瘤苗TCV4-1bbl,观察其对下同动物模型的体内免疫保护作用和免疫治疗作用。结果(1)能对同系肝癌细胞产生完全的免疫保护作用,并能保持无瘤状志长期存活(100d以上)。(2)对早期(接种 7d)形成的肿瘤有强的治疗作用。(3)对晚期(接种14d)肿瘤,有明显的治疗作用,使大部分小鼠的肿瘤消退。结论4-1bbl修饰的肿瘤细胞疫苗能明显刺激增强带瘤宿主的抗瘤效应。

关键词： 4-1bbl 肝细胞癌肿瘤疫苗基因疗法小鼠转基因

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4-1bbl在口腔鳞癌中的表达及临床意义

口腔医学研究 2015年第6期31卷 609-612页

作者：黄敬东孟玉生林玉婷杨宏宇王锋北京大学深圳医院口腔科广东深圳518036

目的:研究4-1bbl在口腔鳞癌组织和炎症组织中的表达特征。方法:PCR、Real-time PCR、免疫组化检测4-1bbl mRNA和蛋白在口腔鳞癌组织、炎症组织和正常黏膜组织中的表达。结果:PCR结果显示4-1bbl在口腔鳞癌组织、炎症组织和正常黏膜组织... 详细信息

目的:研究4-1bbl在口腔鳞癌组织和炎症组织中的表达特征。方法:PCR、Real-time PCR、免疫组化检测4-1bbl mRNA和蛋白在口腔鳞癌组织、炎症组织和正常黏膜组织中的表达。结果:PCR结果显示4-1bbl在口腔鳞癌组织、炎症组织和正常黏膜组织中均有表达,并且Real-time PCR结果显示:与正常组织组比较,口腔鳞癌组4-1bbl mRNA表达量为其2.2106倍,(P1.1151倍,也高于正常组织组(P1.516倍(P4-1bbl表达显著增高;炎症组织4-1bbl表达介于正常组和鳞癌组之间。同时4-1bbl在不同分化程度的鳞癌组织中,其表达随分化程度的增高而增强。结论:口腔鳞癌组织4-1bbl mRNA和蛋白表达显著高于正常组织和炎症组织;且其表达随分化程度的升高而增强。

关键词： 4-1bbl 口腔鳞癌炎症组织

4-1bbl逆向信号促进单核细胞的增殖和分泌细胞因子的作用

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现代免疫学 2004年第6期24卷 445-448页

作者：居颂光居颂文王明元王凤鸣周斌徐颖马泓冰胡玉敏於葛华葛彦邱玉华张学光苏州大学生物技术研究所苏州215007

采用抗人 4 1bbl单克隆抗体 1F1包被 2 4孔培养板 ,加入经免疫磁珠阴性选择获得的高纯度人外周血单核细胞 ,动态观察细胞的生长状态 ,并用3 H TdR掺入法分析单核细胞增殖 ,应用ELISA动态测定培养上清中IL 6、IL 10、M CSF和FL等细胞因... 详细信息

采用抗人 4 1bbl单克隆抗体 1F1包被 2 4孔培养板 ,加入经免疫磁珠阴性选择获得的高纯度人外周血单核细胞 ,动态观察细胞的生长状态 ,并用3 H TdR掺入法分析单核细胞增殖 ,应用ELISA动态测定培养上清中IL 6、IL 10、M CSF和FL等细胞因子水平。结果发现 1F1非常有效地促进单核细胞的增殖 ,1F1组单核细胞分泌高水平的M CSF以及IL 6和FL增加 ,但 1F1组单核细胞分泌IL 10水平低于对照组 (P 4 1bbl单克隆抗体 1F1通过激发单核细胞 4 bbl逆向信号 ,介导单核细胞分泌M CSF、IL 6和FL。上述细胞因子联合作用 ,从而促进了单核细胞的增殖。

关键词： 4-1bbl 逆向信号单克隆抗体共刺激分子单核细胞

转染4-1bbl的前列腺癌细胞瘤苗体外诱导抗肿瘤免疫作用

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中华男科学杂志 2010年第9期16卷 773-777页

作者：匡幼林翁小东刘修恒陈志远祝恒成江波涛武汉大学人民医院泌尿外科湖北武汉430060

目的:观察转染4-1bbl重组腺病毒载体的小鼠前列腺癌细胞瘤苗体外诱导抗肿瘤免疫作用及机制。方法:利用复制缺陷型腺病毒AdEasy-1系统,通过基因重组技术构建Ad-m4-1bbl及Ad-eGFP。将Ad-m4-1bbl和Ad-eGFP感染小鼠前列腺癌细胞RM-1,以丝裂... 详细信息

目的:观察转染4-1bbl重组腺病毒载体的小鼠前列腺癌细胞瘤苗体外诱导抗肿瘤免疫作用及机制。方法:利用复制缺陷型腺病毒AdEasy-1系统,通过基因重组技术构建Ad-m4-1bbl及Ad-eGFP。将Ad-m4-1bbl和Ad-eGFP感染小鼠前列腺癌细胞RM-1,以丝裂霉素C(MMC)处理,制成肿瘤细胞疫苗(TCV,TCV-Ad-eG-FP,TCV-Ad-m4-1bbl),经体外与同系小鼠脾淋巴细胞共同培养,ELISA法检测脾细胞分泌细胞因子(IL-2,INF-γ)的影响,CCK-8试剂检测脾淋巴细胞特异性杀伤活性。结果:转染4-1bbl基因的小鼠前列腺癌细胞瘤苗TCV-Ad-m4-1bbl高表达4-1bbl蛋白,培养上清中细胞因子IL-2[(180.24±2.22)pg/ml]和INF-γ[(1 512.46±23.64)pg/ml]表达水平均明显高于TCV和TCV-Ad-eGFP组(P4-1bbl瘤苗诱导RM-1细胞特异性杀伤率[(34.24±2.64)%],相比TCV-Ad-eGFP[(14.65±3.21)%]和TCV[(9.82±1.48)%],差异有显著性(P4-1bbl的小鼠前列腺癌细胞瘤苗能诱导有效的抗肿瘤免疫反应。

关键词： 4-1bbl 肿瘤疫苗共刺激分子前列腺癌

真核表达4-1bbl调节淋巴细胞功能活性及抗肿瘤效应的研究

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中国免疫学杂志 2005年第12期21卷 918-923页

作者：邱惠张桂梅张慧袁野李东冯作化华中科技大学同济医学院生化与分子生物学系武汉430030

目的在非免疫非肿瘤细胞中转染表达4-1bbl,并研究4-1bbl在调节淋巴细胞功能活性及抗肿瘤方面的作用和机制。方法构建含有4-1bbl全长cDNA序列的表达质粒p4-1bbl,脂质体介导体外转染BHK细胞,G418筛选出阳性克隆,RT-PCR、免疫细胞化学染色... 详细信息

目的在非免疫非肿瘤细胞中转染表达4-1bbl,并研究4-1bbl在调节淋巴细胞功能活性及抗肿瘤方面的作用和机制。方法构建含有4-1bbl全长cDNA序列的表达质粒p4-1bbl,脂质体介导体外转染BHK细胞,G418筛选出阳性克隆,RT-PCR、免疫细胞化学染色及免疫印迹检测4-1bbl的表达,检测BHK细胞表达的4-1bbl对脾淋巴细胞增殖和杀伤活性的影响;建立小鼠H22肝细胞癌移植瘤模型,裸DNA肌肉注射法体内转染表达4-1bbl进行肿瘤治疗,检测肿瘤生长速度;另外,利用免疫组化染色法分析瘤周组织中CD8+T淋巴细胞。结果BHK细胞转染表达的4-1bbl能够显著增强肿瘤抗原肽激活的脾淋巴细胞增殖和杀瘤活性(P1),并显著提高IL-2和IFN-γ表达水平(P1),同时增强非特异性免疫杀伤活性。肿瘤接种部位转染表达4-1bbl,瘤周组织中CD8+T淋巴细胞数量显著增加(P1),肿瘤生长速率显著低于生理盐水对照组和空载体对照组(P1)。结论在肿瘤微环境中的正常细胞转染表达4-1bbl,能够有效促进T细胞增殖及杀伤等功能活性,可望成为肿瘤免疫生物治疗的一种新的手段。

关键词：共刺激分子 4-1bbl H22肝细胞癌肿瘤免疫

一株鼠抗人4-1bbl功能性单克隆抗体的研制及其生物学特性的研究

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中国免疫学杂志 2008年第5期24卷 439-442,451页

作者：王旭东周斌李文香於葛华张光波张学光苏州大学医学生物技术研究所苏州215007 苏州大学附属第一医院临床免疫学实验室苏州215006

目的:鼠抗人4-1bbl功能性单克隆抗体的研制及其生物学特性的鉴定。方法:以高表达人4-1bbl分子的基因转染细胞L929/4-1bbl为免疫原,常规免疫BALB/c小鼠,采用B淋巴瘤杂交瘤技术进行细胞融合,经流式细胞术分析和多次克隆化培养,筛选特异性... 详细信息

目的:鼠抗人4-1bbl功能性单克隆抗体的研制及其生物学特性的鉴定。方法:以高表达人4-1bbl分子的基因转染细胞L929/4-1bbl为免疫原,常规免疫BALB/c小鼠,采用B淋巴瘤杂交瘤技术进行细胞融合,经流式细胞术分析和多次克隆化培养,筛选特异性杂交瘤细胞株;采用Ig亚型快速定性试纸法、染色体核型分析、竞争结合抑制试验、间接免疫荧光法对单抗的生物学特性进行鉴定,并采用体外细胞计数和ELISA检测分析单抗对单核细胞的作用。结果:获得1株持续、稳定分泌鼠抗人4-1bbl单抗的杂交瘤细胞株,命名为3E7。该单抗能识别人白血病细胞株和单核细胞表面的4-1bbl分子。对单抗生物学功能的研究结果表明,该单抗能有效地促进外周血单核细胞体外生长,并促进IL-6和TNF-α的分泌。结论:成功地获得了一株鼠抗人4-1bbl功能性单克隆抗体3E7,该单抗能特异地识别人4-1bbl分子,并有效地通过激发4-1bbl逆向信号通路促进单核细胞的体外生长及细胞因子的分泌。

关键词： 4-1bbl 单克隆抗体共刺激信号杂交瘤