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Cloning,Structural Organization and Chromosomal Mapping of Rat Costimulatory Molecule 4-1bbl

Acta Biochimica et Biophysica Sinica 2005年第10期37卷 694-701页

作者： Qiu-Ming DONG~1 Li-Jie MA~2 Guang-Bo ZHANG~1 Ya-Fang WU~3 Jia-Yao SHEN~1 Ying CHEN~1 Yong-Jing CHEN~1 Xiang-Ke PU~1 Sai-Yu HANG~1 Xue-Guang ZHANG~(1*) 1 Biotechnology Institute,Soochow University,Suzhou 215007,China 2 Genetics Institute,Fudan University,Shanghai 200433,China 3 First Affiliated Hospital of Soochow University,Suzhou 215006,China Biotechnology Institute Soochow UniversitySuzhou 215007 China Genetics Institute Fudan UniversityShanghai 200433 China First Affiliated Hospital of Soochow UniversitySuzhou 215006 China

4-1bbl (TNFSF9) is a member of the tumor necrosis factor (TNF) ligand superfamily,whichis expressed on some activated antigen presenting cells and B *** isolated a rat cDNA clone encodingthe rat homologue of the human 4-1bbl (GenBank accession ***259541).The deduced rat 4-Ibblprotein,consisting of 308 amino acids with a molecular weight of 33,469 Da,was a typical type Ⅱtransmembrane glycoprotein,the same as human and routine 4-Ibbl.“SDAA” in the cytoplasmic domain ofrat 4-1bbl was deduced to act as the phosphorylation site for casein kinase Ⅰ(“SXXS” motif),which ispresent in the cytoplasmic domains of human and murine 4-1bbl,and all other TNF ligand family membersknown to utilize reverse *** two introns of 4-1bbl were also cloned (GenBank accession ***332409).Rat 4-Ibbl is much more homologous with murine 4-1bbl than with human 4-1bbl,in bothnucleotide and amino acid *** 4-1bbl was expressed in all tested tissues:brain,lung,colon,liver,thymus,testicle,kidney,adrenal,stomach,spleen and *** chromosomal location of rat 4-1bbl wasfirst identified by bioinformatics,then by fluorescence in situ hybridization at 9q11(GenBank accessionUni Gene ***.46783).Rat,murine and human 4-1bbl genes are evolved from a common *** and characterization of the rat counterpart of human 4-1bbl will facilitate studies of the biologicalfunction of this molecule.

关键词： TNF superfamily rat 4-1bbl cloning mapping

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Transgenic 4-1bbl-engineered vaccine stimulates potent Gag-specific therapeutic and long-term immunity via increased priming of CD44＋CD62Lhigh IL-7R＋ CTLs with up- and downregulation of anti- and pro-apoptosis genes

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Cellular & Molecular Immunology 2015年第4期12卷 456-465页

作者： Rong Wang Andrew Freywald Yue Chen Jianqing Xu Xin Tan Jim Xiang Cancer Research Unit Saskatchewan Cancer Agency Saskatoon Saskatchewan Canada Department of Oncology University of Saskatchewan Saskatoon Saskatchewan Canada Department of Pathology University of Saskatchewan Saskatoon Saskatchewan Canada Department of Epidemiology and Community Health University of Ottawa Canada Shanghai Public Health Clinical Center Fudan University Shanghai China School of Life Science Beijing Institute of Technology Beijing China

Human immunodeficiency virus type-1 （HIV-1）-specific dendritic cell （DC） vaccines have been used in clinical trials. However, they have been found to only induce some degree of immune responses in these studies. We previously demonstrated that the HIV-1 Gag-specific Gag-Texo vaccine stimulated Gag-specific effector CD8＋ cytotoxic T lymphocyte （CTL） responses, leading to completely protective, but very limited, therapeutic immunity. In this study, we constructed a recombinant adenoviral vector, adenovirus （AdV）4-1bbl, which expressed mouse 4-1BB ligand （4-1bbl）, and generated transgenic 4-1bbl-engineered OVA-Texo/4.1BSL and Gag-Texo/4.1BSL vaccines by transfecting ovalbumin （OVA）-Texo and Gag-＇rexo cells with AdV4.1bbl, respectively. We demonstrate that the OVA-specific OVA-Texo/*** vaccine stimulates more efficient OVA-specific CTL responses （3.26%） compared to OVA-Texo-activated responses （1.98%） in wild-type C57BIJ6 mice and the control OVA-TeXO/Nu, vaccine without transgenic 4-1bbl expression, leading to enhanced therapeutic immunity against 6-day established OVA-expressing B16 melanoma BL6-1OovA cells. OVA-Texo/4.1bbl-stimulated CTLs, which have a CD44＋CD62Lhigh IL-7R＋ phenotype, are likely memory CTL precursors, demonstrating prolonged survival and enhanced differentiation into memory CTLs with functional recall responses and long-term immunity against BL6-1OovA melanoma. In addition, we demonstrate that OVA-Texo/4_Zbbl-Stimulated CTLs up- and downregulate the expression of anti-apoptosis （Bcl2110, Naipl, No13, Pak7 and Tnfrsfllb） and pro-apoptosis （Casp12, Trp63 and Trp73） genes, respectively, by RT2 Profiler PCR array analysis. Importantly, the Gag-specific Gag-Texo/4.1bbl vaccine also stimulates more efficient Gag-specific therapeutic and long-term immunity against HLA-A2/Gag-expressing B 16 melanoma BL6-1OGag/A2 cells than the control Gag-TeXO/NuH vaccine in transgenic HLA-A2 mice. Taken together, our novel Gag-Texo/4-Zbbl vaccine, which is capable of st

关键词： 4-1bbl Gag HLA-A2 mice T cell-based vaccine therapeutic immunity

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4-1bbl胞膜外区蛋白对人外周血淋巴细胞体外活性的调节作用

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细胞与分子免疫学杂志 2008年第5期24卷 431-433,437页

作者：郭红星程昕苏晔范冬梅邵晓枫许元富杨纯正熊冬生中国医学科学院北京协和医学院血液学研究所血液病医院实验血液学国家重点实验室天津300020

目的:研究4-1bbl胞膜外区融合蛋白(ex4-1bbl)对人外周血淋巴细胞(PBL)体外活性的调节作用。方法:表达纯化人4-1bbl胞膜外区融合蛋白,台盼蓝计数观察其对淋巴细胞增殖的作用;CytoTox 96非放射性细胞毒试剂盒检测培养液的乳酸脱氢酶(LDH)... 详细信息

目的:研究4-1bbl胞膜外区融合蛋白(ex4-1bbl)对人外周血淋巴细胞(PBL)体外活性的调节作用。方法:表达纯化人4-1bbl胞膜外区融合蛋白,台盼蓝计数观察其对淋巴细胞增殖的作用;CytoTox 96非放射性细胞毒试剂盒检测培养液的乳酸脱氢酶(LDH)水平,ELISA检测白介素-2(IL-2)水平。CytoTox 96检测其联合应用anti-CD3/anti-Pgp微型双功能抗体及PBL对靶细胞K562/A02细胞的杀伤作用。结果:4-1bbl胞膜外区融合蛋白能够促进淋巴细胞增殖,减少细胞死亡,促进IL-2分泌;联合应用ex4-1bbl的淋巴细胞组的杀伤效率优于对照组。结论:ex4-1bbl可能成为增强淋巴细胞活性的重要免疫佐剂。

关键词： 4-1bbl 淋巴细胞 anti-CD3/anti-Pgp 双功能抗体

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4-1bbl单克隆抗体激发U937细胞NF-κB的核转位及4-1bbl/CD28同型异构分子共定位

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中国实验血液学杂志 2013年第5期21卷 1121-1125页

作者：张蔚仇红霞田甜陈纬凤王菊娟杨向绸许戟段丽敏南京医科大学第一附属医院江苏省人民医院血液科老年血液科

本研究探讨共刺激分子4-1bbl逆向信号在人急性单核细胞白血病细胞株U937中的分子机制。选择U937细胞株作为靶细胞,与鼠抗人4-1bbl激发型单克隆抗体1F1(mAb 1F1)共培养。应用激光共聚焦显微镜观察U937细胞株上NF-κB核转位及4-1bbl分子与... 详细信息

本研究探讨共刺激分子4-1bbl逆向信号在人急性单核细胞白血病细胞株U937中的分子机制。选择U937细胞株作为靶细胞,与鼠抗人4-1bbl激发型单克隆抗体1F1(mAb 1F1)共培养。应用激光共聚焦显微镜观察U937细胞株上NF-κB核转位及4-1bbl分子与CD28同型异构分子(CD28i)的共定位;使用流式细胞术及RTPCR检测U937细胞4-1bbl和CD28i的分子表达。结果表明:U937细胞经mAb 1F1刺激后,出现明显的NF-κB核内转位及细胞膜上4-1bbl与CD28i分子的共定位。结论:介导U937细胞生长的4-1bbl逆向信号的传导与NF-κB的核转位相关;CD28i分子可能参与了4-1bbl逆向信号的传导。

关键词： 4-1bbl 逆向信号 U937细胞株 NF-κB CD28同型异构体

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4-1bbl介导的逆向信号对人外周血T细胞体外活化的调节作用

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中华微生物学和免疫学杂志 2006年第2期26卷 101-104页

作者：居颂文居颂光仇红霞王凤鸣王明元胡玉敏刘彤刘高勤张学光苏州大学医学生物技术研究所苏州大学附属第一人民医院临床免疫实验室215007

目的探讨表达于活化T细胞上的4-1bbl分子对T细胞的调节作用及可能机制。方法鼠抗人4-1bbl单克隆抗体1F1加入CD3单抗联合CD28单抗激发的T细胞培养体系。细胞计数分析T细胞的增殖;PI/AnnexinⅤ双染法分析T细胞的凋亡;ELISA法测定培养上清... 详细信息

目的探讨表达于活化T细胞上的4-1bbl分子对T细胞的调节作用及可能机制。方法鼠抗人4-1bbl单克隆抗体1F1加入CD3单抗联合CD28单抗激发的T细胞培养体系。细胞计数分析T细胞的增殖;PI/AnnexinⅤ双染法分析T细胞的凋亡;ELISA法测定培养上清中细胞因子的分泌水平;流式细胞仪分析T细胞的表型。结果单抗1F1能够有效地抑制活化T细胞的体外增殖并诱导其凋亡,同时单抗1F1还可抑制活化T细胞分泌IL-2和IFN-γ及上调T细胞表面CD95和PD-1分子的表达。结论在T细胞活化过程中,活化T细胞表达的4-1bbl分子通过逆向信号抑制其细胞因子的分泌和上调负性调控分子,进而抑制T细胞的过度活化和下调T细胞介导的免疫应答。

关键词： 4-1bbl 逆向信号共刺激分子 T细胞活化

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4-1bbl联合Hsp70-肿瘤抗原肽抑制小鼠黑色素瘤肺转移

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癌症 2005年第7期24卷 781-786页

作者：邱惠张桂梅张慧袁野李东冯作化华中科技大学同济医学院生化与分子生物学系湖北武汉430030

背景与目的正调节性共刺激分子表达偏低是肿瘤逃避机体免疫系统攻击的重要原因之一,增加这些分子的表达是促进抗肿瘤免疫的研究热点。小鼠黑色素瘤B16-F1细胞株是弱免疫原性癌细胞株。本研究旨在观察4-1bbl联合Hsp70-抗原肽对小鼠黑色... 详细信息

背景与目的正调节性共刺激分子表达偏低是肿瘤逃避机体免疫系统攻击的重要原因之一,增加这些分子的表达是促进抗肿瘤免疫的研究热点。小鼠黑色素瘤B16-F1细胞株是弱免疫原性癌细胞株。本研究旨在观察4-1bbl联合Hsp70-抗原肽对小鼠黑色素瘤肺转移的抑制作用,并探讨其机制。方法建立小鼠黑色素瘤肺转移模型,Hsp70-B16抗原肽小鼠皮下免疫,同时从尾静脉注射4-1bbl表达质粒p4-1bbl。于接种后第17天,解剖小鼠取肺组织,解剖显微镜下计数黑色素瘤肺转移结节的数目,并检测小鼠部分免疫学指标及肝、肾功能。结果4-1bbl联合Hsp70-B16抗原肽治疗组小鼠黑色素瘤肺转移结节数降至50±8,明显少于二者单独治疗组的500±80和450±40;联合治疗组小鼠血清IL-2和IFN-γ的分泌水平分别增加了4倍和3倍,与对照组相比均存在显著性差异(P1);单独应用4-1bbl基因或与Hsp70-B16抗原肽联合应用对小鼠肝、肾的功能均无明显影响。结论表达4-1bbl联合应用Hsp70-B16抗原肽主要通过增强外周T淋巴细胞功能活性而有效抑制小鼠黑色素瘤肺转移。

关键词： 4-1bbl Hsp70-抗原肽联合作用黑色素瘤/免疫疗法肺肿瘤/继发性小鼠

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人4-1bbl胞外区/抗CD20融合蛋白的构建和表达

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细胞与分子免疫学杂志 2008年第6期24卷 543-545,549页

作者：刘荣姜文国刘芳张砚君范冬梅杨铭熊冬生杨纯正中国医学科学院北京协和医学院血液学研究所血液病医院实验血液学国家重点实验室天津300020 滨州医学院药理教研室山东滨州256603

目的:构建和表达人4-1bbl胞外区/抗CD20双功能融合蛋白,并测定该融合蛋白的生物学活性。方法:采用PCR和ovelap PCR方法构建人4-1bbl胞外区/抗CD20双功能融合蛋白,并用双脱氧终止法测定DNA序列;采用亲和层析法纯化该产物,并用150g/L SDS-... 详细信息

目的:构建和表达人4-1bbl胞外区/抗CD20双功能融合蛋白,并测定该融合蛋白的生物学活性。方法:采用PCR和ovelap PCR方法构建人4-1bbl胞外区/抗CD20双功能融合蛋白,并用双脱氧终止法测定DNA序列;采用亲和层析法纯化该产物,并用150g/L SDS-PAGE和Western blot鉴定纯化产物;采用FACS法鉴定纯化产物与靶细胞的结合活性。结果:DNA序列测定结果表明:人4-1bbl胞外区/抗CD20双功能融合蛋白已构建成功,表达可溶性产物的产量达4mg/L以上,具有与Raji细胞(CD20+)和A549(4-1BB+)细胞结合的活性。结论:利用融合蛋白形式,首次成功地构建了人4-1bbl胞外区/抗CD20融合蛋白,并获得较高表达。表达产物具有与相应2个靶抗原结合的活性。

关键词： 4-1bbl CD20 融合蛋白免疫治疗

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华西口腔医学杂志 2013年第4期32卷 408-411页

作者：张敬李贞王婧娇漆明宁夏医科大学总医院口腔内科宁夏医科大学研究生学院银川750004

目的研究口腔扁平苔藓(OLP)患者外周血中维甲酸相关核孤儿受体γ(tRORγt)和4-1BB/4-1bbl mRNA的表达。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)法检测30例OLP患者和30例健康人外周血中RORγt和4-1BB/4-1bbl的基因表达水平。结果在OL... 详细信息

目的研究口腔扁平苔藓(OLP)患者外周血中维甲酸相关核孤儿受体γ(tRORγt)和4-1BB/4-1bbl mRNA的表达。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)法检测30例OLP患者和30例健康人外周血中RORγt和4-1BB/4-1bbl的基因表达水平。结果在OLP患者中,RORγt、4-1BB、4-1bbl mRNA的表达水平显著高于对照组(P4.005倍。RORγt和4-1BB mRNA的表达水平无明显相关性(P>0.05),4-1BB和4-1bbl mRNA表达水平呈正相关(r=0.455 0,P4-1BB/4-1bbl在OLP的发病中起了一定作用。

关键词：维甲酸相关核孤儿受体γt 4-1BB 4-1bbl 口腔扁平苔藓

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sPD-1和4-1bbl体内联合表达对小鼠实验性肝癌的治疗作用

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中华微生物学和免疫学杂志 2006年第9期26卷 831-835页

作者：韩凌斐张桂梅刘毅李东邱惠耿辉肖晗吴丰华冯作化华中科技大学同济医学院生化与分子生物学系武汉430030

目的探讨sPD-1和4-1bbl联合治疗肿瘤的效应和相关的免疫学机制。方法以H22肝癌细胞接种于BALB／c小鼠右后腿肌肉内,建立小鼠肿瘤模型;采用4-1bbl和可溶性PD-1(sPD- 1)真核表达质粒通过肌肉转染进行基因治疗;检测小鼠肿瘤生长情况,并检... 详细信息

目的探讨sPD-1和4-1bbl联合治疗肿瘤的效应和相关的免疫学机制。方法以H22肝癌细胞接种于BALB／c小鼠右后腿肌肉内,建立小鼠肿瘤模型;采用4-1bbl和可溶性PD-1(sPD- 1)真核表达质粒通过肌肉转染进行基因治疗;检测小鼠肿瘤生长情况,并检测转染基因及肿瘤微环境中免疫调控相关基因的表达,检测肿瘤组织中的淋巴细胞数量的变化。结果单独转染4-1bbl基因或sPD-1基因均显示出抗肿瘤作用,而联合治疗对肿瘤生长抑制作用更为明显,该组抑瘤率高达92．3％(以pcDNA3．1组为对照),显著高于4-1bbl组(78％)、sPD-1组(70．2％)。联合治疗不仅使TGF-β、IL-10的表达下调,而且在治疗后期更有效地促进IFN-γ和IL-2基因表达上调,且使瘤组织中CD8+T淋巴细胞数量较其他各组显著增加。结论4-1bbl和sPD-1联合治疗可使肿瘤微环境中的免疫相关基因表达更有利于抗肿瘤免疫应答,增强肿瘤免疫治疗效果。

关键词： 4-1bbl sPD-1 共刺激分子基因治疗肝癌

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同时表达4-1bbl B7.1及B7.2三个共刺激分子基因小鼠肝癌细胞系的建立和意义

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中国肿瘤临床 2006年第22期33卷 1261-1264页

作者：李国强王学浩印洁俞悦南京医科大学第一附属医院肝脏外科活体肝移植研究所南京市210029

目的:建立同时表达4-1bbl、B7.1及B7.2三个共刺激分子基因小鼠原发性肝细胞癌(hepatocellularcarcinoma,HCC)细胞系。方法:将B7.1和B7.2全长cDNA的质粒酶切,构建pcDNA3.1-B7.1-IRES-B7.2重组子,酶切法鉴定。用阳离子脂质体(LipofectamineReagent)将重组子转染H22,经均霉素(Hygromycin,300!g/ml)筛选,阳性克隆命名为H22-CD80/CD86+细胞。逆转录-聚合酶链反应(reversetranscription-polymerasechainreaction,RT-PCR)检测目的基因在H22-CD80/CD86+变异株的表达。采用同样方法将pCI-neo-4-1bbl质粒转入H22-CD80/CD86+细胞,G418筛选,阳性克隆命名为H22-CD80/CD86/CD137L+细胞。流式细胞仪检测三种基因在细胞克隆中的表达。结果:pcDNA3.1-B7.1-IRES-B7.2重组子经酶切鉴定,同时获得B7.1(862bp)和B7.2(984bp)目的基因片段和5.6kbp线性化pcDNA3.1载体片段;重组子测序结果与Genebank中B7.1和B7.2序列相符,证实构建成功。RT-PCR及FCM检测结果显示B7.1、B7.2及4-1bbl基因分别在H22-CD80/CD86+细胞及H22-CD80/CD86/CD137L+细胞中获得稳定、高效联合表达。结论:pcDNA3.1-B7.1-IRES-B7.2重组子构建正确,H22-CD80/CD86/CD137L+变异株可同时稳定表达B7.1、B7.2和4-1bbl三个共刺激分子基因。

关键词：基因重组癌肝细胞 B7.1 B7.2 4-1bbl

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