检索结果-南通市图书馆

检索条件"主题词=4-香豆酰-辅酶A连接酶"

共 1 条记录，以下是1-10 订阅

全选清除本页清除全部题录导出标记到"检索档案"

详细简洁

排序：

不同4CL基因家族成员对植物苯丙烷衍生物代谢调控的研究

不同4CL基因家族成员对植物苯丙烷衍生物代谢调控的研究

引用

作者：张士花山东师范大学

学位级别：硕士

苯丙烷代谢产物在植物体内具有重要的生物学功能。木质素是重要的苯丙烷类代谢产物之一,其增强了植物对逆境胁迫的防御和抵抗能力,但也是造纸污染的主要来源,饲草中的木质素不利于牲畜的消化和营养吸收。近年来,木质素合成途径中主要酶... 详细信息

苯丙烷代谢产物在植物体内具有重要的生物学功能。木质素是重要的苯丙烷类代谢产物之一,其增强了植物对逆境胁迫的防御和抵抗能力,但也是造纸污染的主要来源,饲草中的木质素不利于牲畜的消化和营养吸收。近年来,木质素合成途径中主要酶的基因已经被克隆出来,利用现代生物技术调节植物木质素的生物合成不仅有利于阐明木质素及其它苯丙烷代谢产物合成的分子机理,而且在优良造纸原料与饲草的生产上具有重要的应用价值。4-香豆酰-CoA连接酶(4CL)是苯丙烷类代谢途径转向下游分支途径的最后一个酶,是调控木质素生物合成的关键限速酶,在苯丙烷类衍生物代谢途径中处于终端位置。通过基因工程研究4CL基因功能有利于揭示苯丙烷衍生物代谢的机制,为改良维管植物木质素含量及组成提供理论基础。本研究利用从741毛白杨获得的基因Pto4CL2和Pto4CL3的全长cDNA片段,探讨Pto4CL2和Pto4CL3基因在苯丙烷衍生物代谢途径特别是木质素生物合成中的作用及其在基因工程育种中的应用前景。本文以模式植物烟草和741毛白杨为试材,利用Pto4CL2和Pto4CL3基因cDNA开展了基因工程下游的研究工作。本文利用正义pBI121-4CL2,pBI121-4CL3两个载体进行农杆菌介导的烟草遗传转化,同时利用反义pBI121-4CL2和pBI121-4CL3进行农杆菌介导的毛白杨遗传转化,获得转基因植株。分析该基因的过量或抑制表达对转基因植株表型性状所产生的影响,并测定植物体不同组织木质素含量及其主要结构的变化。本论文主要结果如下:1)4CL基因序列的生物信息学分析:利用NCBI网站提供的数据和Mega4.0软件对毛白杨4CL基因序列进行Blastn分析,并和其它物种4CL基因序列进行多重比对分析,并构建系统进化树。该基因家族系统进化树可分为Class I和Class II两大类群。本实验所用的Pto4CL2属于Class II家族,与颤杨Pt4CL2同源性最高,与大豆Gm4CL3和Gm4CL4也有很高的同源性;Pto4CL3属于Class I家族,与颤杨Pt4CL1、毛白杨Pto4CL1同源性较高。利用相关软件对所克隆的4CL2和4CL3基因进行氨基酸同源性比对,其蛋白同源性为58.52%。同时对4CL2和4CL3蛋白的理化性质及初步功能进行了预测。2)PCR及Southern blot检测:PCR结果显示,以转基因烟草叶片基因组DNA为模板,用4CL的特异引物能扩增出特异DNA片段,而野生型植株未见特异条带,说明正义pBI121-4CL2、正义pBI121-4CL3基因片段可能已成功导入烟草基因组DNA中。Southern blot结果显示,除了对照烟草外,转基因植株都能显示出杂交信号,证明重组载体基因已整合到烟草基因组DNA中。同时成功获得了转反义pBI121-4CL2、反义pBI121-4CL3的杨树抗性苗,并进行了初步的PCR检测。3)以移栽生长6周的转正义4CL2和4CL3烟草植株及野生型对照为实验材料,以4-香豆酸为底物测定不同组织和部位的4CL酶活性。结果表明,韧皮部4CL酶活性最高,木质部次之,根中的4CL酶活性很低,叶中几乎测不到4CL酶活性。与非转基因植株相比,转正义4CL2和正义4CL3基因烟草的韧皮部和木质部中4CL酶活都有不同程度的升高。对转化植株木质部和叶中酚酸含量进行测定,结果表明与对照植株相比,木质部中4-香豆酸、咖啡酸、阿魏酸、芥子酸、肉桂酸的含量都明显升高,叶中4-香豆酸、咖啡酸和肉桂酸含量显著增加。4)以移栽生长6周的转正义4CL2和4CL3烟草植株及野生型对照为实验材料,测定不同组织和部位的木质素含量。结果表明,无论是转入正义4CL2基因还是正义4CL3基因,均影响木质素在烟草不同部位的生物合成和分配。韧皮部、木质部和根部木质素含量与对照相比均有不同程度的升高,其中根中木质素含量与对照相比升高的幅度最大,且差异极显著。对茎杆综纤维素含量进行测定,结果表明,转基因植株中综纤维素与对照相比没有明显差异。对茎杆切片进行Wiesner反应和高锰酸钾染色反应分析,显微观察表明转基因植株与对照相比没有明显区别。将对照与转基因烟草在温室中进行4个月的形态特征和生长发育的观察,发现其在株高、胸径、茎的颜色等外部形态上没有明显差别,而且都能正常开花结实,在时间上也没有明显的差异。

关键词： 4-香豆酰-辅酶a连接酶苯丙烷衍生物木质素转基因烟草转基因毛白杨

来源：

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

全选清除本页清除全部题录导出标记到“检索档案”

共1页 << < 1 > >>

回到顶部

执行限定条件

欢迎您,

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

在线全文

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：

通借通还

欢迎您,

建议与咨询 留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

在线全文

请选择保存的检索档案： 新增检索档案 确定 取消

请选择收藏分类： 新增自定义分类 确定 取消

通借通还

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：