检索结果-南通市图书馆

检索条件"主题词=3-DSC"

共 1 条记录，以下是1-10 订阅

全选清除本页清除全部题录导出标记到"检索档案"

详细简洁

排序：

3-去氧苏木查尔酮通过TOPK抑制皮肤癌的机制研究

3-去氧苏木查尔酮通过TOPK抑制皮肤癌的机制研究

引用

作者：付晓荣郑州大学

学位级别：硕士

皮肤癌是全球常见癌症之一,美国2010年皮肤癌的确诊人数超过200万。皮肤癌在中国的发病率较低,但由于臭氧层的破坏等环境因素的影响,皮肤癌在我国的发病率逐年上升。目前我国公共卫生系统尚未建立有效预防皮肤癌的体系,中国未来将面临... 详细信息

皮肤癌是全球常见癌症之一,美国2010年皮肤癌的确诊人数超过200万。皮肤癌在中国的发病率较低,但由于臭氧层的破坏等环境因素的影响,皮肤癌在我国的发病率逐年上升。目前我国公共卫生系统尚未建立有效预防皮肤癌的体系,中国未来将面临巨大的健康挑战。治疗皮肤癌的方案有手术治疗、放疗、化疗及靶向药物等。靶向MAPK家族的BRAF和MEK抑制剂是晚期皮肤癌的重要靶向药物,但是由此而生的耐药问题使得开发新的靶点及靶向药物越发急切。TOPK为MAPKK家族的激酶,能够诱导皮肤癌的发生发展,为新兴的抗癌靶点。3-去氧苏木查尔酮（3-dsc）是中国药用植物苏木的提取物,我们的前期研究发现该化合物靶向TOPK抑制结肠癌的发生发展,但该化合物在皮肤癌中作用尚不明确。本文主要研究3-dsc预防紫外线造成的皮肤损伤及抑制皮肤癌的作用机制,为皮肤癌的靶向药物研发提供新的思路。给予3-dsc处理组和对照组SKH1无毛小鼠急性紫外线照射,小鼠背部局部皮肤经3-dsc处理后可预防紫外照射引起的皮肤增厚,降低p-TOPK及其相关信号通路蛋白的表达量。3-dsc 可以抑制皮肤癌细胞（SK-MEL-2、SK-MEL-28、A375 和 A431）的增殖,并通过调控细胞周期,诱导细胞周期阻滞在G2/M期。同时在蛋白印迹实验中G2/M期相关蛋白质cyclinB1的表达量下调,在蛋白水平印证了 G2/M期阻滞。3-dsc可以诱导皮肤癌细胞的凋亡并上调凋亡标志蛋白质cleaved caspase-3和cleaved caspase-7的表达量。3-dsc可通过下调TOPK信号转导通路蛋白质磷酸化水平进而抑制皮肤癌细胞生长增殖及SK-MEL-2细胞异种移植瘤（cell derived xenograft,CDX）的进展。因此,本文阐明了苏木提取物3-dsc可通过抑制TOPK激酶活性,进而在体内外水平抑制皮肤癌的发生发展。该研究将为3-dsc以及其他TOPK抑制剂在皮肤癌的临床预防及治疗提供理论依据。方法1.激酶实验:用MBP底物检测2.5、5、10、20μM梯度的3-dsc对TOPK激酶活性的影响及其降低激酶活性的浓度。2.蛋白下拉实验:根据计算机模拟结合实验预测的TOPK与3-dsc之间的结合位点,构建TOPK突变质粒,并在293T细胞中过表达,收集细胞裂解液,用细胞裂解液分别和亲和配体珠子及3-dsc-亲和配体珠子孵育并洗脱,利用其物理结构结合,验证3-dsc与TOPK的结合位点。3.蛋白印迹实验:检测皮肤及其癌细胞系的TOPK表达量4.细胞毒性和生长增殖实验:利用酶标仪结合噻唑蓝以及二甲基亚砜试剂检测不同浓度梯度3-dsc处理皮肤正常细胞或皮肤癌细胞后,570 nm的吸光度值,检测3-dsc对正常皮肤细胞的毒性以及对皮肤癌细胞的增殖抑制作用。5.软琼脂集落形成实验:检测3-dsc对皮肤癌细胞系克隆形成的抑制作用。6.细胞周期实验:利用碘化丙啶（PI）染料对细胞DNA的染色并使用流式细胞仪检测细胞在G1期（1N）、S期（1N-2N）、G2/M期（2N）的分布情况,从而探究3-dsc对皮肤癌细胞生长周期的调控作用。7.细胞凋亡实验:利用Annexin V与细胞膜内侧含负电磷脂的特异性结合符合早期凋亡特性,及PI染料对活细胞不透膜的特性,并利用细胞流式仪,检测3-dsc对皮肤癌细胞凋亡的影响及活细胞、早期凋亡、晚期凋亡和坏死细胞的比例。***敲低实验:用shRNA的方法转染质粒收集shTOPK的病毒,并感染选定高表达皮肤癌细胞系,经嘌呤霉素筛选获得敲低TOPK的皮肤癌细胞,利用细胞增值实验及软琼脂集落形成实验检测TOPK敲低组细胞与对照组相比对3-dsc的敏感性差异。9.对细胞信号转导通路TOPK/ERK/RSK/c-Jun的检测:对皮肤癌细胞系（SK-MEL-2、SK-MEL-28、A375和A431）应用 3-dsc（0、5、10、20μM）后,用蛋白印迹实验探究不同浓度的3-dsc对TOPK磷酸化及其下游信号通路的影响10.急性紫外线照射实验:模拟太阳紫外线照射,检测3-dsc对紫外线处理后的小鼠皮肤厚度及TOPK信号转导通路蛋白表达水平的影响。11.小鼠体内细胞异种移植（CDX）模型实验:通过对构建的皮肤癌细胞系SK-MEL-2细胞异种移植小鼠模型腹腔注射3-dsc,检测其在小鼠体内对皮肤癌生长的抑制情况。结果1.激酶实验中3-dsc（2.5-20 μM）可以抑制TOPK激酶底物的磷酸化,表明3-dsc可抑制TOPK激酶的磷酸化。2.下拉实验中,3-dsc可以与未突变TOPK结合,表明3-dsc可以靶向TOPK。3-dsc与Thr42和Asn172位点突变TOPK几乎不结合,表明3-dsc与TOPK激酶的结合位点为Thr42和Asn172。3.蛋白印迹实验中,SK

关键词：皮肤癌 TOPK 3-dsc 靶向治疗

来源：

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

全选清除本页清除全部题录导出标记到“检索档案”

共1页 << < 1 > >>

回到顶部

执行限定条件

欢迎您,

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

在线全文

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：

通借通还

欢迎您,

建议与咨询 留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

在线全文

请选择保存的检索档案： 新增检索档案 确定 取消

请选择收藏分类： 新增自定义分类 确定 取消

通借通还

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：