检索结果-南通市图书馆

作者：郑艳玲天津科技大学

学位级别：硕士

母乳是婴幼儿最佳营养来源,人乳寡糖(HMOs)是母乳中仅次于乳糖和脂类的第三大营养成分,对人体健康成长具有重要意义。2'-岩藻糖基乳糖(2'-FL)和3-岩藻糖基乳糖(3-FL)是母乳中两种重要的低聚糖,有研究表明3-FL发挥与2'-FL互补的生物学功... 详细信息

母乳是婴幼儿最佳营养来源,人乳寡糖(HMOs)是母乳中仅次于乳糖和脂类的第三大营养成分,对人体健康成长具有重要意义。2'-岩藻糖基乳糖(2'-FL)和3-岩藻糖基乳糖(3-FL)是母乳中两种重要的低聚糖,有研究表明3-FL发挥与2'-FL互补的生物学功能,由于母乳中3-FL含量低因此开发比较缓慢。目前最有效合成3-FL的方法是全细胞微生物合成法,具有成本低且操作方便等优势,但是对合成途径的改造和优化并不理想,核心酶α-1,3-岩藻糖基转移酶(α-1,3-Fucts)活性低仍然是限制生产水平的关键因素。为了提高核心酶α-1,3-Fucts的活性,本研究首先通过查阅文献和数据库比对挑选7个不同来源的α-1,3-Fucts,分别命名为1A、2A、3A、4A、5A、6A、7A,通过中拷贝质粒p Trc99a表达后转化至实验室已有生产菌株Z(*** K12 MG1655△lac Z::trc-wca G-gmd△adh E::trc-man B-man A),以10 g/L甘油,5 g/L乳糖为底物发酵48 h,检测3-FL产量分别为0.69 g/L、0.81 g/L、0.71 g/L、0.65 g/L、0.65 g/L、0.53 g/L、0.49g/L,说明α-1,3-Fuct的活性对产量影响非常大。为了进一步提高酶活,本研究构建一种基于生长偶联的高通量筛选方法,首先敲除甘露糖利用途径,在菌株Z基础上敲除man A、wca J、lac A、yih S、man X、pfk A基因,构建一株能够将甘露糖全部用于合成3-FL的大肠杆菌。其次利用中拷贝质粒p Trc99a将α-1,3-岩藻糖苷酶(Afc B)过表达,构建一株能够利用3-FL水解的岩藻糖为唯一碳源生长的大肠杆菌,使得3-FL产量越高菌株生长越好。为了验证高通量筛选方法的可行性,通过低拷贝质粒p SB4K5分别将基因2A、3A、6A过表达,构建3株3-FL产量不同的大肠杆菌,发现3-FL合成产量与菌株生长水平相偶联,与预期结果一致。最后对3A基因建立突变体文库,以10 g/L甘露糖,1 g/L乳糖为底物,利用固体筛选和液体筛选富集优势菌株,获得的菌株(编号6.1)产量为0.91 g/L,比表达野生型关键酶的对照菌株产量0.42 g/L约高2倍。本研究构建了一种新型高通量筛选方法,将3-FL合成途径强弱与菌株生长水平相偶联,以此技术为核心,筛选活性大幅提高的核心酶突变体,为提高更多糖基转移酶的活性奠定基础,对其它核心酶进化具有重要意义。

关键词： α-1,3-岩藻糖基转移酶进化筛选 3-岩藻糖乳糖大肠杆菌

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液态乳制品中单双糖和乳寡糖组分分析

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中国食物与营养 2022年第8期28卷 26-28,33页

作者：杨学宏种克于连洋孔凡华石家庄润启生物科技有限公司石家庄050000 石家庄科技信息职业学院石家庄050000 北京生物制品研究所有限责任公司北京100176 北京市营养源研究所有限公司北京100069

目的与方法:采用高效液相色谱法(HPLC)和高效液相色谱-串联质谱法(HPLC-MS/MS)测定28种液态乳制品中单双糖和乳寡糖的含量。结果:鲜牛奶和纯牛奶中3-岩藻糖乳糖的含量整体高于风味发酵乳和风味酸乳,6-唾液酸乳糖的含量与风味发酵乳和风... 详细信息

目的与方法:采用高效液相色谱法(HPLC)和高效液相色谱-串联质谱法(HPLC-MS/MS)测定28种液态乳制品中单双糖和乳寡糖的含量。结果:鲜牛奶和纯牛奶中3-岩藻糖乳糖的含量整体高于风味发酵乳和风味酸乳,6-唾液酸乳糖的含量与风味发酵乳和风味酸乳相近。羊乳中3-岩藻糖乳糖的含量和纯牛奶接近,6-唾液酸乳糖的含量和液态牛乳接近。不同风味发酵乳和风味酸乳中乳糖含量差异较大,不同鲜牛奶和纯牛奶中乳糖含量相对稳定。鲜牛奶和纯牛奶样品中基本不含葡萄糖、果糖和蔗糖。结论:本研究通过测定28种液态乳中单双糖和乳寡糖的含量,为消费者购买高品质液态乳提供了科学依据。

关键词：液态乳制品单双糖 3-岩藻糖乳糖 6-唾液酸乳糖

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