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旋毛虫重组抗原P53对小鼠骨髓源树突状细胞表达吲哚胺2,3-双加氧酶的影响

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中国热带医学 2022年第5期22卷 406-411页

作者：杨雪娇马晓刘东明李晓云宋铭忻韩彩霞东北农业大学黑龙江省动物源性人兽共患病重点实验室黑龙江哈尔滨150030

目的研究旋毛虫重组抗原P53对小鼠骨髓来源的树突状细胞(DC2.4)吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)的表达及炎性因子分泌情况的影响。方法设立实验组(旋毛虫重组抗原P53,终浓度为20μg/mL)、阳性对照组(IFN-γ,来源于提高树突状细胞IDO表达的小... 详细信息

目的研究旋毛虫重组抗原P53对小鼠骨髓来源的树突状细胞(DC2.4)吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)的表达及炎性因子分泌情况的影响。方法设立实验组(旋毛虫重组抗原P53,终浓度为20μg/mL)、阳性对照组(IFN-γ,来源于提高树突状细胞IDO表达的小鼠,浓度为1 000 U/mL)和阴性对照组(PBS),分别刺激细胞0、3、6、12、24 h后收集样品,利用qPCR技术对细胞内IDO、IL-10、IL-6、TNF-α的mRNA的转录水平进行检测;利用Western-blot方法检测各组IDO蛋白表达水平。进一步利用间接免疫荧光技术对细胞内的IDO进行检测。结果 qPCR结果表明,旋毛虫P53蛋白能引起胞内IDO、IL-10、IL-6及TNF-α的mRNA的转录水平增加,且呈现出时间依赖性。在24 h时,相比于阴性对照组,P53蛋白刺激组IDO及IL-6转录水平上调了5倍左右,抑炎因子IL-10 mRNA转录水平更是上调了9倍左右,TNF-α mRNA转录水平上调了7倍左右;Western-blot结果显示,旋毛虫P53蛋白刺激组和IFN-γ阳性对照组的细胞内IDO的蛋白表达水平均显著高于空白对照组,在刺激时间为24 h时相比于空白对照组上调了4倍;间接免疫荧光结果显示,旋毛虫P53蛋白刺激组相比于阴性对照组出现了明显的荧光。结论旋毛虫重组抗原P53能够诱导树突状细胞IDO表达水平的上调,且呈现时间依赖性,可能与旋毛虫逃避宿主的免疫有一定关系。

关键词：旋毛虫重组抗原P53 树突状细胞吲哚胺2 3-双加氧酶

靶向色氨酸降解酶在肿瘤免疫治疗中的研究进展

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生命科学 2023年第5期35卷 576-582页

作者：康玲姜凯龙李佳中国药科大学南京210000 中科中山药物创新研究院中山528400

免疫疗法为肿瘤患者带来了巨大希望。色氨酸作为人体必需氨基酸,在肿瘤免疫中具有重要意义。吲哚胺-2,3-双加氧酶1和2(indoleamine-2,3-dioxygenase 1/2,IDO1/2)、色氨酸-2,3-双加氧酶2(tryptophan-2,3-dioxygenase 2,TDO2)和白介素4诱导蛋白1(interleukin-4-induced-1,IL4I1)是催化色氨酸降解的关键酶。研究表明靶向色氨酸降解酶能够恢复抗肿瘤免疫反应,并与其他免疫疗法(如免疫检查点抑制剂)具有协同作用,这给免疫肿瘤学领域带来了希望。然而,IDO1抑制剂的临床试验却带来了令人失望的结果。本综述将讨论色氨酸降解酶及其抑制剂在肿瘤免疫治疗中的潜在效果和问题,并提出了可选的规避方法。

关键词：肿瘤免疫治疗色氨酸降解吲哚胺-2 3-双加氧酶1 吲哚胺-2 3-双加氧酶2 色氨酸-2 3-双加氧酶白介素4诱导蛋白1

旋毛虫感染对小鼠脾树突状细胞吲哚胺2,3-双加氧酶表达的影响

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中国兽医科学 2021年第3期51卷 331-336页

作者：刘昊杨雪娇李晓云宋铭忻温晴邓江莹韩彩霞东北农业大学动物源性人兽共患病黑龙江省重点实验室黑龙江哈尔滨150030

为探讨小鼠感染旋毛虫后脾来源的树突状细胞在不同时间点吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)的表达情况,将一定量旋毛虫肌幼虫经口感染小鼠,感染剂量为每只300条肌幼虫,并设立对照组。分别在感染后第7、15、25、35、50天处死小鼠取脾,用免疫磁珠分... 详细信息

为探讨小鼠感染旋毛虫后脾来源的树突状细胞在不同时间点吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)的表达情况,将一定量旋毛虫肌幼虫经口感染小鼠,感染剂量为每只300条肌幼虫,并设立对照组。分别在感染后第7、15、25、35、50天处死小鼠取脾,用免疫磁珠分选CD11c+树突状细胞,实时荧光定量PCR检测IDO、IL-10、IFN-γ和TNF-αm RNA的表达水平,Western-blot检测IDO的蛋白表达水平。小鼠感染旋毛虫后用1-甲基色氨酸(1-MT)按照200 mg/kg剂量灌胃,计算旋毛虫减虫率。实时荧光定量PCR结果显示,小鼠感染旋毛虫后IDO及相关因子的表达量均显著增加(*P30%,肌幼虫减虫率为36.09%。结果证实旋毛虫感染后可刺激脾树突状细胞表达IDO,与旋毛虫逃避宿主的免疫有一定关系。

关键词：旋毛虫树突状细胞吲哚胺2 3-双加氧酶免疫耐受

吲哚胺2,3-双加氧酶基因修饰BMSCs在大鼠同种异体复合组织移植免疫排斥反应中的作用研究

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中国修复重建外科杂志 2014年第6期28卷 745-751页

作者：韩夫王耀军王耘川贾艳慧杨龙龙贾文斌方小兵白晓智胡大海第四军医大学西京医院全军烧伤中心西安710032

目的探讨吲哚胺2，3-双加氧酶（indoleamine2，3-dioxygenase，IDO）基因转染修饰大鼠BMSCs对同种异体复合组织移植免疫排斥反应的影响及其机制。方法以IDO过表达慢病毒IDO[绿色荧光蛋白（greenfluorescentprotein，GFP）1-Lenti转染供... 详细信息

目的探讨吲哚胺2，3-双加氧酶（indoleamine2，3-dioxygenase，IDO）基因转染修饰大鼠BMSCs对同种异体复合组织移植免疫排斥反应的影响及其机制。方法以IDO过表达慢病毒IDO[绿色荧光蛋白（greenfluorescentprotein，GFP）1-Lenti转染供体4～6周龄BN大鼠来源的第3代BMSCs，筛选目的基因高表达、具有生物活性的细胞株IDO-BMSCs。行RT-PCR、Westernblot检测基因修饰前后BMSCs中IDOmRNA及蛋白表达，通过测量培养上清犬尿氨酸生成量检测IDO生物学活性。在混合淋巴细胞反应体系中以IDO-BMSCs、反应细胞（受体4～6周龄LEWIS大鼠来源外周血单个核细胞）和刺激细胞（供体BN大鼠来源外周血单个核细胞）混合培养，细胞比例分别为1：5：5、1：10：10、1：50：50及1：100：100（实验组1、2、3、4）：每个反应体系另设IDO阻断孔，加入1mmol／LIDO特异性抑制剂1-甲基色氨酸（1-methyl．tryptophan，1-MT）；以IDO-BMSCs与反应细胞（1：5）培养为阴性对照组，刺激细胞与反应细胞（1：1）培养为阳性对照组，IDO-BMSCs在RPMll640培养基中单独培养作为空白对照组。于培养5d，采用MTT法检测T淋巴细胞增殖情况。进一步制备大鼠同种异体肢体移植模型，将GFP-BMSCs（A组）、IDO-BMSCs（B组）及生理盐水（C组）分别经尾静脉输入移植模型，观察移植物存活时间及免疫排斥反应。结果基因修饰后，BMSCs中IDOmRNA及蛋白表达显著提高。IDO-BMSCs较GFP-BMSCs可明显提高培养上清中犬尿氨酸含量（P〈0．05）。加入1-MT前，实验组1、2、3的T淋巴细胞增殖率随IDO-BMSCs与反应细胞比例逐渐减少而不断增加，组间比较差异均有统计学意义（P〈0．05）；实验组4的T淋巴细胞增殖率与阳性对照组比较差异无统计学意义（P〉0．05）。加入1-MT后，除实验组4的T淋巴细胞增殖率与加入前比较差异无统计学意义（P〉0．05）外，其余各实验组均高于加入前（P〈0．05）。体内输入后，IDO—BMSCs可在移植物内定植，抑制免疫排斥反应的发生；A、B、C组移植物存活时间分别为（11．5±0．6）、（14．5±0．8）、（9．0±0.3）d，B组存活时间明显长于A、C组，A组长于C组（P〈0．05）。结论ID0-BMSCs可促进大鼠同种异体复合组织移植物的成活，其机制与抑制T淋巴细胞增殖、促进BMSCs向移植物内定植有关。

关键词： BMSCs 吲哚胺2 3-双加氧酶 T淋巴细胞同种异体复合组织移植免疫排斥反应大鼠

过表达IDO骨髓间充质干细胞对腹腔异位移植心脏模型大鼠炎症反应、T细胞亚群和NF-κB/NLRP3通路的影响

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现代生物医学进展 2023年第7期23卷 1212-1217页

作者：王海晨黎明王馨笛张永健钟亮西安交通大学第一附属医院心血管外科陕西西安710061 西安交通大学医学部陕西西安710000

目的:探讨过表达吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)骨髓间充质干细胞(BMSCs)对腹腔异位移植心脏模型大鼠炎症反应、T细胞亚群和核因子(NF)-κB/核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)通路的影响。方法:慢病毒载体及基因开启技术构建过表达ID... 详细信息

目的:探讨过表达吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)骨髓间充质干细胞(BMSCs)对腹腔异位移植心脏模型大鼠炎症反应、T细胞亚群和核因子(NF)-κB/核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)通路的影响。方法:慢病毒载体及基因开启技术构建过表达IDO大鼠BMSCs,建立60只大鼠腹腔异位移植心脏模型,造模成功后,随机分为4组,每组各15只。空白组建模后未给予任何处理,吗替麦考组喂养吗替麦考40 mg/kg,空白-BMSCs组在腹腔异位移植心脏术后3 d,经尾静脉注射空白-BMSCs,IDO组在腹腔异位移植心脏术后3 d,经尾静脉注射过表达IDO-BMSCs(每只400μL,10^(6)个细胞)。检测并对比四组心功能、血清心肌酶、炎症因子、T细胞亚群、心脏病理变化以及NF-κB/NLRP3通路相关蛋白表达情况。结果:IDO组射血分数差值、环比收缩(FS)差值大于空白组、吗替麦考组、空白-BMSCs组(P酶同工酶(CK)-MB、白细胞介素(IL)-1α、IL-1β、IL-2、γ干扰素(IFN-γ)、IL-18水平以及脾脏组织CD40、CD86、CD80、MHC II、CD45RA、CD45RA+CD45RB,心脏组织NF-κB、NLRP3、半胱氨酸蛋白酶-1(Caspase)-1表达低于空白组、吗替麦考组、空白-BMSCs组(P3水平以及脾脏组织CD274、Treg表达高于空白组、吗替麦考组、空白-BMSCs组(P3信号通路的激活有关。

关键词：吲哚胺2 3-双加氧酶骨髓间充质干细胞炎症反应 T细胞亚群 NF-κB/NLRP3信号通路

槲皮素通过影响吲哚胺-2,3-双加氧酶活性抑制HeLa细胞增殖的研究

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中国药理学通报 2018年第2期34卷 219-224页

作者：张薇何龙刘潇忆韩琴葛啸垠南京中医药大学医学与生命科学学院病原与免疫学系江苏南京210023

目的研究槲皮素抑制人宫颈癌HeLa细胞增殖的机制。方法采用CCK-8法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞周期的变化;运用紫外可见分光光度计测定OD_(480)值,反映色氨酸代谢及犬尿氨酸的生成情况;qPCR法检测IDO1的mRNA表达;表达、纯化IDO1蛋... 详细信息

目的研究槲皮素抑制人宫颈癌HeLa细胞增殖的机制。方法采用CCK-8法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞周期的变化;运用紫外可见分光光度计测定OD_(480)值,反映色氨酸代谢及犬尿氨酸的生成情况;qPCR法检测IDO1的mRNA表达;表达、纯化IDO1蛋白并进行体外酶活性反应,用高效液相色谱法检测色氨酸和犬尿氨酸的含量变化。结果槲皮素抑制HeLa细胞的增殖,引起G0/G1细胞周期阻滞;槲皮素抑制色氨酸的代谢;槲皮素能够明显抑制IDO1的体外酶催化活性,但不影响IDO1的表达;外源性添加色氨酸的代谢产物犬尿氨酸可以逆转槲皮素引起的细胞增殖抑制。结论槲皮素可能通过抑制IDO1的酶催化活性,影响细胞色氨酸的代谢,这可能是槲皮素发挥其抗宫颈癌HeLa细胞增殖作用的机制之一。

关键词：槲皮素色氨酸代谢犬尿氨酸吲哚胺-2 3-双加氧酶 HeLa细胞细胞增殖

三氯卡班降解菌株Sphingomonas sp.YL-JM2C中多个邻苯二酚双加氧酶的功能

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微生物学通报 2017年第7期44卷 1513-1524页

作者：李朔许楹周宁一上海交通大学生命科学技术学院微生物代谢国家重点实验室上海200240

【目的】研究Sphingomonas sp.YL-JM2C菌株的生长特性,确定以三氯卡班作为碳源的生长情况。挖掘菌株YL-JM2C潜在的邻苯二酚1,2-双加氧酶及邻苯二酚2,3-双加氧酶基因,在大肠杆菌(Escherichia coli)中异源表达邻苯二酚双加氧酶基因并研究... 详细信息

【目的】研究Sphingomonas sp.YL-JM2C菌株的生长特性,确定以三氯卡班作为碳源的生长情况。挖掘菌株YL-JM2C潜在的邻苯二酚1,2-双加氧酶及邻苯二酚2,3-双加氧酶基因,在大肠杆菌(Escherichia coli)中异源表达邻苯二酚双加氧酶基因并研究其酶学性质。【方法】优化S.sp.YL-JM2C菌株以三氯卡班作为碳源时的培养条件,并利用全自动生长曲线测定仪测定菌株生长情况,绘制生长曲线。通过生物信息学方法挖掘潜在的邻苯二酚双加氧酶基因,并分别在Escherichia coli BL21(DE3)中进行异源表达,通过AKTA快速纯化系统纯化蛋白,分别以邻苯二酚、3-和4-氯邻苯二酚为底物检测重组蛋白的酶学特性。【结果】菌株在pH为7.0-7.5时生长最优。在以浓度为4-8 mg/L的三氯卡班做为底物时,菌株适宜生长。当R2A培养基仅含有0.01%酵母提取物和无机盐时,加入终浓度为4 mg/L的三氯卡班可促进菌株生长。挖掘到6个潜在的邻苯二酚双加氧酶基因stcA1、stcA2、stcA3、stcE1、stcE2和stcE3,表达并通过粗酶液分析证明其中5个基因stcA1、stcA2、stcA3、stcE1和stcE2编码的酶均具有邻苯二酚双加氧酶和氯邻苯二酚双加氧酶的活性;纯化酶的底物范围研究揭示了StcA1、StcA2和StcA3均属于Ⅱ型邻苯二酚1,2-双加氧酶,StcE1和StcE2为两个新型邻苯二酚2,3-双加氧酶;它们酶动力学分析研究证明了5个酶对邻苯二酚的亲和力和催化效率最高,4-氯邻苯二酚次之。【结论】在同一菌株中发现了5个具有功能的邻苯二酚双加氧酶基因,stcA1、stcA2和stcA3编码的酶均属于Ⅱ型邻苯二酚1,2-双加氧酶,stcE1和stcE2为两个新型邻苯二酚2,3-双加氧酶编码基因。5个酶均具有催化邻苯二酚和氯邻苯二酚开环反应的功能,这为更好地理解微生物基因组内代谢邻苯二酚及其衍生物氯代邻苯二酚基因的多样性奠定了基础。

关键词：鞘氨醇单胞菌YL-JM2C 三氯卡班邻苯二酚 3-氯邻苯二酚 4-氯邻苯二酚邻苯二酚1 2-双加氧酶邻苯二酚2 3-双加氧酶

吲哚胺2，3双加氧酶在HCC中的表达与临床病理参数之间的关系

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中华医学杂志 2013年第28期93卷 2186-2190页

作者：林粱杨定华黄毓李湘竑张庆玲刘萧梁鉴坤钟克波何华南方医科大学南方医院肝胆外科广州510515 南方医科大学南方医院病理科广州510515

目的观察吲哚胺2，3双加氧酶（IDO）在肝细胞肝癌（HCC）中的表达，分析其表达与临床病理参数的关系。方法采用逆转录．聚合酶链反应（RT—PCR）、荧光定量PCR、免疫组化、免疫荧光研究IDO在HCC中的表达。结果IDOmRNA在癌组织中的表达... 详细信息

目的观察吲哚胺2，3双加氧酶（IDO）在肝细胞肝癌（HCC）中的表达，分析其表达与临床病理参数的关系。方法采用逆转录．聚合酶链反应（RT—PCR）、荧光定量PCR、免疫组化、免疫荧光研究IDO在HCC中的表达。结果IDOmRNA在癌组织中的表达比相应的非癌组织明显增高（2=1．71，P=0．001），ACT值在癌组织中为6．40±2．21，非癌组织中7．17±1．90，正常肝脏组织中7．61±0．93。IDO蛋白主要在癌边缘及癌组织的胞质中表达，而在非癌及肝脏良性病变的正常肝脏组织内则不表达。IDO表达的强弱与术后复发及生存时间、是否发生转移、TNM分期有关（P〈0．05）；与肝硬化、AFP、病理分化、巴塞罗那分期、性别、年龄、乙肝表面抗原、肿瘤大小及数目无关（P〉0．05）。结论IDO的高表达可能会影响HCC患者的愈后。

关键词：吲哚胺2 3-双加氧酶肝细胞肝癌愈后

吲哚胺吡咯2,3-双加氧酶与肾细胞癌预后的预测(英文)

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中南大学学报（医学版） 2012年第7期37卷 649-655页

作者：袁芳刘映红符晓陈俊香中南大学湘雅二医院肾内科长沙410011

目的:探讨吲哚胺吡咯2,3-双加氧酶(IDO,一种具有免疫调节作用的酶)在肾细胞癌(RCC)患者中的作用。方法:在中南大学湘雅二医院诊断为RCC的患者40例,全部接受肾切除术。肾组织的免疫病理检查采用半定量方法评估。实时定量PCR(RT-qPCR)检测... 详细信息

目的:探讨吲哚胺吡咯2,3-双加氧酶(IDO,一种具有免疫调节作用的酶)在肾细胞癌(RCC)患者中的作用。方法:在中南大学湘雅二医院诊断为RCC的患者40例,全部接受肾切除术。肾组织的免疫病理检查采用半定量方法评估。实时定量PCR(RT-qPCR)检测RCC与非肾癌肾组织IDO的mRNA水平。免疫组织化学的方法检测血管内皮细胞的IDO蛋白表达。同时依据IDO的mRNA水平计算出患者的Kaplan-Meier生存曲线。结果:RCC肿瘤组织中IDO mRNA的表达明显高于正常肾组织(P<0.001)。在RCC患者中,IDO高表达的患者比那些低IDO表达的患者具有明显较长的生存时间(P=0.01)。统计学分析显示:RCC肿瘤组织中IDO的水平和肿瘤增殖标志物Ki67之间呈负相关,IDO水平高的患者Ki67水平低,反之亦然(P<0.01)。结论:IDO可能作为预测RCC患者预后的生物标志物。

关键词：吲哚胺吡咯2 3-双加氧酶肾细胞癌内皮细胞预后生物标志物