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吲哚胺2,3-双加氧酶基因修饰BMSCs在大鼠同种异体复合组织移植免疫排斥反应中的作用研究

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中国修复重建外科杂志 2014年第6期28卷 745-751页

作者：韩夫王耀军王耘川贾艳慧杨龙龙贾文斌方小兵白晓智胡大海第四军医大学西京医院全军烧伤中心西安710032

目的探讨吲哚胺2，3-双加氧酶（indoleamine2，3-dioxygenase，IDO）基因转染修饰大鼠BMSCs对同种异体复合组织移植免疫排斥反应的影响及其机制。方法以IDO过表达慢病毒IDO[绿色荧光蛋白（greenfluorescentprotein，GFP）1-Lenti转染供... 详细信息

目的探讨吲哚胺2，3-双加氧酶（indoleamine2，3-dioxygenase，IDO）基因转染修饰大鼠BMSCs对同种异体复合组织移植免疫排斥反应的影响及其机制。方法以IDO过表达慢病毒IDO[绿色荧光蛋白（greenfluorescentprotein，GFP）1-Lenti转染供体4～6周龄BN大鼠来源的第3代BMSCs，筛选目的基因高表达、具有生物活性的细胞株IDO-BMSCs。行RT-PCR、Westernblot检测基因修饰前后BMSCs中IDOmRNA及蛋白表达，通过测量培养上清犬尿氨酸生成量检测IDO生物学活性。在混合淋巴细胞反应体系中以IDO-BMSCs、反应细胞（受体4～6周龄LEWIS大鼠来源外周血单个核细胞）和刺激细胞（供体BN大鼠来源外周血单个核细胞）混合培养，细胞比例分别为1：5：5、1：10：10、1：50：50及1：100：100（实验组1、2、3、4）：每个反应体系另设IDO阻断孔，加入1mmol／LIDO特异性抑制剂1-甲基色氨酸（***，1-MT）；以IDO-BMSCs与反应细胞（1：5）培养为阴性对照组，刺激细胞与反应细胞（1：1）培养为阳性对照组，IDO-BMSCs在RPMll640培养基中单独培养作为空白对照组。于培养5d，采用MTT法检测T淋巴细胞增殖情况。进一步制备大鼠同种异体肢体移植模型，将GFP-BMSCs（A组）、IDO-BMSCs（B组）及生理盐水（C组）分别经尾静脉输入移植模型，观察移植物存活时间及免疫排斥反应。结果基因修饰后，BMSCs中IDOmRNA及蛋白表达显著提高。IDO-BMSCs较GFP-BMSCs可明显提高培养上清中犬尿氨酸含量（P〈0．05）。加入1-MT前，实验组1、2、3的T淋巴细胞增殖率随IDO-BMSCs与反应细胞比例逐渐减少而不断增加，组间比较差异均有统计学意义（P〈0．05）；实验组4的T淋巴细胞增殖率与阳性对照组比较差异无统计学意义（P〉0．05）。加入1-MT后，除实验组4的T淋巴细胞增殖率与加入前比较差异无统计学意义（P〉0．05）外，其余各实验组均高于加入前（P〈0．05）。体内输入后，IDO—BMSCs可在移植物内定植，抑制免疫排斥反应的发生；A、B、C组移植物存活时间分别为（11．5±0．6）、（14．5±0．8）、（9．0±0.3）d，B组存活时间明显长于A、C组，A组长于C组（P〈0．05）。结论ID0-BMSCs可促进大鼠同种异体复合组织移植物的成活，其机制与抑制T淋巴细胞增殖、促进BMSCs向移植物内定植有关。

关键词： BMSCs 吲哚胺2 3-双加氧酶 T淋巴细胞同种异体复合组织移植免疫排斥反应大鼠

姜黄素抑制IFN-γ诱导的肿瘤细胞内吲哚胺2,3-双加氧酶的表达

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中药材 2008年第8期31卷 1207-1211页

作者：张坤水李国成何玉文衣艳梅廖仕林王震杜军中山大学附属第二医院药学部广东广州510120 中山大学药学院微生物与生化制药教研室广东广州510120

目的:研究姜黄素对IFN-γ诱导的肿瘤细胞内吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)表达的影响。方法:利用低浓度的姜黄素作用于人乳腺癌细胞A431、人宫颈癌细胞HeLa、人肝癌细胞HepG2、人鼻咽癌细胞CNE2各24h,通过四甲基偶氮唑盐(MTT)比色检测细胞的增... 详细信息

目的:研究姜黄素对IFN-γ诱导的肿瘤细胞内吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)表达的影响。方法:利用低浓度的姜黄素作用于人乳腺癌细胞A431、人宫颈癌细胞HeLa、人肝癌细胞HepG2、人鼻咽癌细胞CNE2各24h,通过四甲基偶氮唑盐(MTT)比色检测细胞的增殖;利用免疫印记检测姜黄素对这些肿瘤细胞内IDO表达的影响;利用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测姜黄素对IDO基因表达的关键性干扰素应答因子1(IRF-1)的影响。结果:在这些肿瘤细胞内姜黄素对IDO的表达均有抑制作用,但姜黄素并没有抑制肿瘤细胞内IRF-1的转录。结论:姜黄素能抑制肿瘤细胞内IDO的表达。

关键词：姜黄素吲哚胺2 3-双加氧酶干扰素应答因子1

吲哚胺2，3-双加氧酶在尖锐湿疣皮损中表达的研究

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中华皮肤科杂志 2017年第5期50卷 337-340页

作者：谢震陈源汉王思宇万慧颖雷华杨戈林昭春四川省医学科学院四川省人民医院皮肤病性病研究所成都610031 广东省医学科学院广东省人民医院肾内科

目的分析尖锐湿疣组织中吲哚胺2，3-双加氧酶（IDO）水平，研究其局部代谢色氨酸的能力。方法免疫组化法观察尖锐湿疣患者皮肤IDO蛋白表达情况，计数IDO阳性细胞的比例。免疫荧光观察IDO（＋）细胞与树突细胞的关系。分离对照皮肤角... 详细信息

目的分析尖锐湿疣组织中吲哚胺2，3-双加氧酶（IDO）水平，研究其局部代谢色氨酸的能力。方法免疫组化法观察尖锐湿疣患者皮肤IDO蛋白表达情况，计数IDO阳性细胞的比例。免疫荧光观察IDO（＋）细胞与树突细胞的关系。分离对照皮肤角质形成细胞和疣体上皮细胞，色氨酸体外孵育后检测上清液中色氨酸代谢产物犬尿氨酸的浓度以反映细胞代谢色氨酸的能力。结果 IDO（＋）细胞在正常皮肤中非常少，但在疣体表皮中却大量聚集。疣体内IDO（＋）细胞/总体细胞48.3% ± 15.4%显著高于正常皮肤5.2% ± 2.4%，差异有统计学意义（P＜0.05）。IDO（＋）细胞的荧光信号和皮肤朗格汉斯细胞并不重合，提示来源于疣体表皮细胞。从疣体组织分离的上皮细胞在体外代谢色氨酸的能力强于健康对照皮肤中分离的表皮细胞。结论尖锐湿疣疣体中存在大量的IDO（＋）细胞，这些细胞可能参与尖锐湿疣的发病。

关键词：尖锐湿疣吲哚胺一吡咯2 3-双加氧酶郎格尔汉斯细胞免疫组织化学荧光免疫测定

吲哚胺2,3-双加氧酶在移植物抗宿主病中的作用研究进展

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中华内科杂志 2015年第11期54卷 987-989页

作者：王奕诺万峻赵晓甦深圳北京大学香港科技大学医学中心生物医学所深圳市神经结构生物学重点实验室 518036 北京大学人民医院北京大学血液病研究所造血干细胞移植治疗血液病北京市重点实验室血液学协同创新中心

异基因造血干细胞移植（allo-HSCT）是治疗急性和慢性白血病等恶性血液系统疾病的有效手段.移植物抗宿主病（GVHD）是allo-HSCT治疗后主要并发症之一,也是导致移植失败的重要因素.患者进行allo-HSCT时,组织受到预处理的损伤会产生炎症因... 详细信息

异基因造血干细胞移植（allo-HSCT）是治疗急性和慢性白血病等恶性血液系统疾病的有效手段.移植物抗宿主病（GVHD）是allo-HSCT治疗后主要并发症之一,也是导致移植失败的重要因素.患者进行allo-HSCT时,组织受到预处理的损伤会产生炎症因子,这些因子能够激活宿主的抗原提呈细胞（APC）.APC提呈宿主抗原并进一步激活移植物中具有免疫活性的T淋巴细胞,使其增殖、分化并产生效应因子（包括细胞毒性T淋巴细胞、NK细胞、TNFα、IL-1等）,引起宿主靶器官组织损伤,形成***受到许多因素的调节,其中吲哚胺2,3-双加氧酶（indoleamine 2,3-dioxygenase,IDO）是调节GVHD的一个关键因素.

关键词：移植物抗宿主病 3-双加氧酶吲哚胺 allo-HSCT 细胞毒性T淋巴细胞异基因造血干细胞移植抗原提呈细胞器官组织损伤

旋毛虫重组抗原P53对小鼠骨髓源树突状细胞表达吲哚胺2,3-双加氧酶的影响

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中国热带医学 2022年第5期22卷 406-411页

作者：杨雪娇马晓刘东明李晓云宋铭忻韩彩霞东北农业大学黑龙江省动物源性人兽共患病重点实验室黑龙江哈尔滨150030

目的研究旋毛虫重组抗原P53对小鼠骨髓来源的树突状细胞(DC2.4)吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)的表达及炎性因子分泌情况的影响。方法设立实验组(旋毛虫重组抗原P53,终浓度为20μg/mL)、阳性对照组(IFN-γ,来源于提高树突状细胞IDO表达的小... 详细信息

目的研究旋毛虫重组抗原P53对小鼠骨髓来源的树突状细胞(DC2.4)吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)的表达及炎性因子分泌情况的影响。方法设立实验组(旋毛虫重组抗原P53,终浓度为20μg/mL)、阳性对照组(IFN-γ,来源于提高树突状细胞IDO表达的小鼠,浓度为1 000 U/mL)和阴性对照组(PBS),分别刺激细胞0、3、6、12、24 h后收集样品,利用qPCR技术对细胞内IDO、IL-10、IL-6、TNF-α的mRNA的转录水平进行检测;利用Western-blot方法检测各组IDO蛋白表达水平。进一步利用间接免疫荧光技术对细胞内的IDO进行检测。结果 qPCR结果表明,旋毛虫P53蛋白能引起胞内IDO、IL-10、IL-6及TNF-α的mRNA的转录水平增加,且呈现出时间依赖性。在24 h时,相比于阴性对照组,P53蛋白刺激组IDO及IL-6转录水平上调了5倍左右,抑炎因子IL-10 mRNA转录水平更是上调了9倍左右,TNF-α mRNA转录水平上调了7倍左右;Western-blot结果显示,旋毛虫P53蛋白刺激组和IFN-γ阳性对照组的细胞内IDO的蛋白表达水平均显著高于空白对照组,在刺激时间为24 h时相比于空白对照组上调了4倍;间接免疫荧光结果显示,旋毛虫P53蛋白刺激组相比于阴性对照组出现了明显的荧光。结论旋毛虫重组抗原P53能够诱导树突状细胞IDO表达水平的上调,且呈现时间依赖性,可能与旋毛虫逃避宿主的免疫有一定关系。

关键词：旋毛虫重组抗原P53 树突状细胞吲哚胺2 3-双加氧酶

胰腺癌荷瘤鼠吲哚胺2，3-双加氧酶表达和CD4^＋CD25^＋Treg细胞数的变化

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中华实验外科杂志 2009年第11期26卷 1481-1482页

作者：李元栋邹浩军徐钧王春友华中科技大学同济医学院附属协和医院胰腺外科武汉430022 山西省长治市第二人民医院普外科山西省人民医院普外科

目的观察吲哚胺2，3-双加氧酶（IDO）的表达以及调节性T细胞（Treg）数量在胰腺癌荷瘤鼠中的变化，并探讨胰腺肿瘤细胞免疫逃逸的机制。方法建立小鼠胰腺癌模型，荧光定量聚合酶链反应（PCR）、Western blot分析肿瘤组织周围引流淋巴结... 详细信息

目的观察吲哚胺2，3-双加氧酶（IDO）的表达以及调节性T细胞（Treg）数量在胰腺癌荷瘤鼠中的变化，并探讨胰腺肿瘤细胞免疫逃逸的机制。方法建立小鼠胰腺癌模型，荧光定量聚合酶链反应（PCR）、Western blot分析肿瘤组织周围引流淋巴结（TDLNs）IDO表达水平；并利用流式细胞术检测荷瘤鼠TDLNs及脾脏中CD4^＋CD25^＋T细胞占CD4^＋T比例；荧光定量PCR测量Foxp3在TDLNs及脾脏mRNA水平。结果胰腺癌荷瘤鼠TDLNs中IDO在mRNA（1．670±0．099比1．123±0．243），蛋白表达水平（1．401±0．079比0．872±0．193），高于正常对照组。差异均有统计学意义（P〈0．05）；荷瘤鼠和脾细胞中CD4^＋CD25^＋T细胞占CD4^＋T细胞的比例明显高于对照鼠[TDLNs分别为（25．00±2．16）％和（11．02±1．31）％，P〈0．05；脾脏分别为（22．14±2．33）％和（12．11±0．93）％，P〈0．05]；荷瘤鼠Foxp3 mRNA表达水平显著高于对照鼠，荷瘤鼠分别为：TDLNs 3．427±0．164、脾细胞2．098±0．112，而对照鼠分为：0．933±0．253、1．137±0．343（P〈0．05）。结论胰腺癌荷瘤鼠癌组织周围引流淋巴结IDO表达明显增高，且TDLNs及脾脏CD4^＋CD25^＋Treg细胞的数量增加。

关键词：胰腺癌吲哚胺2, 3-双加氧酶 CD4 CD25

一株产胞外邻苯二酚-2,3-双加氧酶菌种的筛选及鉴定

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中国农业科技导报 2017年第12期19卷 34-42页

作者：徐苗晁群芳新疆大学生命科学与技术学院乌鲁木齐830046

为了筛选得到一株产胞外邻苯二酚-2,3-双加氧酶的芘降解菌株,以新疆克拉玛依石油污染土壤为样品源,采用芘平板升华法,筛选具有多环芳烃降解能力的菌株。利用显色反应及酶促反应对菌株所产胞外邻苯二酚-2,3-双加氧酶进行定性定量试验并... 详细信息

为了筛选得到一株产胞外邻苯二酚-2,3-双加氧酶的芘降解菌株,以新疆克拉玛依石油污染土壤为样品源,采用芘平板升华法,筛选具有多环芳烃降解能力的菌株。利用显色反应及酶促反应对菌株所产胞外邻苯二酚-2,3-双加氧酶进行定性定量试验并对其进行形态学观察、BIOLOG GENⅢ微孔板鉴定及16S rRNA序列分析。通过单因子影响试验和正交试验对菌株的生长特性及最佳降解条件进行了初步探讨。结果表明:芘降解菌株W39能分泌胞外邻苯二酚-2,3-双加氧酶,且经芘诱导后,产酶能力提高了3倍;经鉴定,菌株W39为阴沟肠杆菌(Enterobacter cloacae);最适培养条件:35℃,p H 7.0,芘浓度50 mg/L。可见,邻苯二酚-2,3-双加氧酶是降解芘的关键酶之一,可对其进行进一步研究。

关键词：邻苯二酚-2 3-双加氧酶菌种筛选 BIOLOG鉴定系统阴沟肠杆菌

旋毛虫感染对小鼠脾树突状细胞吲哚胺2,3-双加氧酶表达的影响

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中国兽医科学 2021年第3期51卷 331-336页

作者：刘昊杨雪娇李晓云宋铭忻温晴邓江莹韩彩霞东北农业大学动物源性人兽共患病黑龙江省重点实验室黑龙江哈尔滨150030

为探讨小鼠感染旋毛虫后脾来源的树突状细胞在不同时间点吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)的表达情况,将一定量旋毛虫肌幼虫经口感染小鼠,感染剂量为每只300条肌幼虫,并设立对照组。分别在感染后第7、15、25、35、50天处死小鼠取脾,用免疫磁珠分... 详细信息

为探讨小鼠感染旋毛虫后脾来源的树突状细胞在不同时间点吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)的表达情况,将一定量旋毛虫肌幼虫经口感染小鼠,感染剂量为每只300条肌幼虫,并设立对照组。分别在感染后第7、15、25、35、50天处死小鼠取脾,用免疫磁珠分选CD11c+树突状细胞,实时荧光定量PCR检测IDO、IL-10、IFN-γ和TNF-αm RNA的表达水平,Western-blot检测IDO的蛋白表达水平。小鼠感染旋毛虫后用1-甲基色氨酸(1-MT)按照200 mg/kg剂量灌胃,计算旋毛虫减虫率。实时荧光定量PCR结果显示,小鼠感染旋毛虫后IDO及相关因子的表达量均显著增加(*P30%,肌幼虫减虫率为36.09%。结果证实旋毛虫感染后可刺激脾树突状细胞表达IDO,与旋毛虫逃避宿主的免疫有一定关系。

关键词：旋毛虫树突状细胞吲哚胺2 3-双加氧酶免疫耐受

血清吲哚胺2,3-双加氧酶水平对卒中后认知障碍的预测价值

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中国临床研究 2024年第4期37卷 554-559页

作者：叶建新黄艳雪周贺许海珍穆军山福建医科大学福总临床医学院中国人民解放军联勤保障部队第九〇〇医院神经内科福建福州350025

目的探讨脑血流动力学和血清吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)与卒中后认知障碍(PSCI)的相关性,探索IDO对PSCI的预测价值。方法选取2020年7月至2021年6月于联勤保障部队第九医院神经内科明确诊断的发病不超过7 d的50例急性缺血性脑卒中患者作... 详细信息

目的探讨脑血流动力学和血清吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)与卒中后认知障碍(PSCI)的相关性,探索IDO对PSCI的预测价值。方法选取2020年7月至2021年6月于联勤保障部队第九医院神经内科明确诊断的发病不超过7 d的50例急性缺血性脑卒中患者作为病例组,根据是否患有PSCI分为PSCI组(n=30)和无PSCI(PSNCI)组(n=20),并选取同期50例健康体检者作为对照组(n=50)。采用ELISA检测入组人群的血清IDO水平。行经颅彩色多普勒超声(TCCD)屏气试验,并记录相关数据,计算屏气指数(BHI)作为脑血流动力学的评价指标。ROC曲线分析IDO水平对PSCI的诊断效能。结果三组间血清D-二聚体、N末端B型利钠肽前体(NT-proBNP)水平差异有统计学意义(P3±0.05)、(0.25±0.02)和(0.31±0.03)ng/mL,三组间差异有统计学意义(F=41.092,P0.05)。三组间BHI差异无统计学意义(P>0.05)。PSCI组与PSNCI组病灶部位的差异无统计学意义(χ^(2)=15.478,P=0.113)。IDO水平截断值为0.277 ng/mL时对PSCI的预测效能最高,ROC曲线下面积(AUC)为0.938,灵敏度为83.3%,特异度为95.0%。结论血清IDO水平与PSCI有显著相关性,然而血流动力学指标与PSCI发生的关系尚不明确。急性缺血性卒中后早期进行IDO水平的检测有助于PSCI的早期识别与诊治。

关键词：脑血流动力学吲哚胺2 3-双加氧酶缺血性脑卒中卒中后认知障碍屏气指数 D-二聚体 N末端B型利钠肽前体