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葛根通过转录因子EB促进溶酶体生物发生抵抗病毒感染

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中草药 2024年第16期55卷 5503-5513页

作者：董秋童李敏张美琦成翠芹罗政李俊良刘哲周义翔王遥贾鑫北京中医药大学中药学院北京100029 北京中医药大学生命科学学院北京100029 北京中医药大学北京中医药研究院北京100029

目的研究葛根Pueraria lobata水提物的体内外抗病毒作用,基于溶酶体生物发生探究其抗病毒作用的细胞学机制。方法CCK-8检测葛根水提物对非小细胞肺癌A549细胞活力的影响。利用表达绿色荧光蛋白的水疱性口炎病毒(vesicular stomatitis vi... 详细信息

目的研究葛根Pueraria lobata水提物的体内外抗病毒作用,基于溶酶体生物发生探究其抗病毒作用的细胞学机制。方法CCK-8检测葛根水提物对非小细胞肺癌A549细胞活力的影响。利用表达绿色荧光蛋白的水疱性口炎病毒(vesicular stomatitis virus expressing green fluorescent protein,VSV-GFP)感染A549细胞,荧光显微镜和流式细胞术检测葛根水提物对GFP阳性细胞比例的影响;Western blotting检测葛根水提物对VSV病毒G蛋白表达的影响;qRT-PCR检测葛根水提物对甲型流感病毒(influenza A virus,H1N1)、脑心肌炎病毒(encephalomyocarditis virus,EMCV)、单纯疱疹病毒1型(herpes simplex virus type 1,HSV-1)病毒复制的影响。葛根水提物(0.8、1.6 g/kg)治疗H1N1病毒滴鼻感染小鼠,观察记录其对小鼠的生存曲线、体质量变化和肺指数的影响,利用小动物CT、肺组织苏木素-伊红(HE)染色观察药物治疗对肺组织病理变化的影响;qRT-PCR检测肺组织病毒载量、白细胞介素-6(interleukin-6,Il6)和肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factorα,Tnfα)的基因表达。葛根水提物处理MEF胚胎成纤维细胞并进行转录组测序分析,qRT-PCR检测溶酶体相关基因表达。流式细胞术检测葛根水提物在转录因子EB(transcription factor EB,TFEB)敲除的鼠永生化骨髓源性巨噬细胞(Tfeb-/-iBMDM)中对GFP阳性细胞比例的影响。结果葛根水提物显著抑制细胞内VSV-GFP病毒复制和VSV病毒G蛋白表达(P葛根水提物能够提升H1N1感染小鼠的存活率,降低肺部病毒载量,改善小鼠肺部病变情况。生物信息学分析表明葛根水提物上调溶酶体相关基因表达,并证明葛根水提物通过TFEB促进溶酶体生物发生抵抗VSV病毒感染(P葛根水提物通过TFEB促进溶酶体生物发生,从而在体内外抑制病毒感染。

关键词：葛根抗病毒溶酶体转录因子TFEB 葛根素 3′-羟基葛根素 3′-甲氧基葛根素大豆苷

基于多组分含量测定和化学计量学的风寒感冒颗粒整体质量评价研究

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中草药 2020年第14期51卷 3670-3678页

作者：许莉黄晓婧高鹏赵小勤文永盛谭鹏成都市食品药品检验研究院国家药品监督管理局中药材质量监测评价重点实验室四川成都610045 四川省中医药科学院国家中医药管理局中药质量生物评价重点研究室四川成都610041

目的建立一种超高效液相色谱(UHPLC-UV)波长切换法同时测定风寒感冒颗粒中D-苦杏仁苷、葛根素、橙皮苷等14种化学成分的含量,结合化学计量学分析不同来源样品的质量差异。方法色谱柱为AgilentPoroshell120EC-C18(150 mm×2.1 mm,2.7μm)... 详细信息

目的建立一种超高效液相色谱(UHPLC-UV)波长切换法同时测定风寒感冒颗粒中D-苦杏仁苷、葛根素、橙皮苷等14种化学成分的含量,结合化学计量学分析不同来源样品的质量差异。方法色谱柱为AgilentPoroshell120EC-C18(150 mm×2.1 mm,2.7μm),以乙腈-0.1%磷酸水溶液为流动相梯度洗脱,切换波长(210、254、310 nm)对5家生产企业68批样品中14种化学成分含量进行测定;并使用雷达图分析、相似度评价、热图聚类分析和主成分分析法对数据进行统计分析。结果 68批样品中各成分质量分数分别为D-苦杏仁苷0.063~3.885 mg/g、3′-羟基葛根素0.012~1.540 mg/g、葛根素0.036~4.017 mg/g、3′-甲氧基葛根素0.016~1.837 mg/g、葛根素-6″-O-木糖苷0.004~0.449 mg/g、芹糖葛根素苷0.021~2.076mg/g、大豆苷0.010~1.527 mg/g、升麻素苷0.007~0.471 mg/g、5-O-甲基维斯阿米醇苷0.062~1.029 mg/g、橙皮苷0.210~8.453 mg/g、迷迭香酸0.001~0.237 mg/g、水合氧化前胡素0.007~0.204 mg/g、甘草酸0.056~1.311 mg/g、氧化前胡素0.002~0.042 mg/g。化学计量学分析表明,同一厂家不同批次样品的整体质量一致性较好,但不同厂家之间样品的整体质量一致性存在较大差异。结论建立的基于UHPLC波长切换法的多组分含量测定方法简便、重复性好、专属性强,可为风寒感冒颗粒的整体质量评控提供方法参考。

关键词：风寒感冒颗粒整体质量评价超高效液相色谱波长切换法雷达图分析相似度评价热图聚类分析主成分分析 D-苦杏仁苷 3′-羟基葛根素葛根素 3′-甲氧基葛根素葛根素-6″-O-木糖苷芹糖葛根素苷大豆苷升麻素苷 5-O-甲基维斯阿米醇苷橙皮苷迷迭香酸水合氧化前胡素甘草酸氧化前胡素

口服葛根总黄酮纳米混悬液冻干粉的制备及其4种有效成分溶出度考察

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中草药 2014年第5期45卷 635-641页

作者：王治平周群樊化王一飞广东药学院药科学院广东广州510006 华中科技大学同济药学院湖北武汉430030 暨南大学生物医药研究院广东广州510632

目的制备葛根总黄酮纳米混悬液冻干粉,并考察其主要有效成分(3′-羟基葛根素、葛根素、大豆苷和大豆苷元)的溶出度。方法采用高压均质法制备葛根总黄酮纳米混悬液,以甘露醇为冻干保护剂制备冻干粉,以人工胃液(pH 1.2)为溶出介质,考察葛... 详细信息

目的制备葛根总黄酮纳米混悬液冻干粉,并考察其主要有效成分(3′-羟基葛根素、葛根素、大豆苷和大豆苷元)的溶出度。方法采用高压均质法制备葛根总黄酮纳米混悬液,以甘露醇为冻干保护剂制备冻干粉,以人工胃液(pH 1.2)为溶出介质,考察葛根总黄酮纳米混悬液冻干粉及其物理混合物中葛根素、3′-羟基葛根素、大豆苷和大豆苷元的溶出度。结果单因素试验并验证制备葛根总黄酮纳米混悬液冻干粉,其粒径、多分散指数及Zeta电位分别为(479.7±14.7)nm、0.524±0.220及(29.68±3.97)mV。葛根总黄酮纳米混悬液冻干粉4种有效成分的溶出速率显著高于其物理混合物。结论葛根总黄酮纳米混悬液冻干粉制备方法简便,能显著提高主要有效成分的溶出速率,有望成为葛根总黄酮的新型纳米给药系统。

关键词：葛根总黄酮纳米混悬液有效成分溶出度冻干粉 3′-羟基葛根素葛根素大豆苷大豆苷元

基于指纹图谱和网络药理学对经典名方竹茹汤中葛根的质量标志物(Q-Marker)预测分析

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中草药 2021年第20期52卷 6197-6207页

作者：王璐张礼欣贾奥蒙毛春芹李林侯金才郭勇陆兔林申屠银洪南京中医药大学药学院江苏南京210023 神威药业集团有限公司河北石家庄051430 浙江桐君堂中药饮片有限公司浙江桐庐311500

目的基于指纹图谱和网络药理学分析预测经典名方竹茹汤(Zhuru Decoction,ZRD)中葛根的质量标志物(QMarker)。方法建立葛根药材和饮片的水煎液及竹茹汤的指纹图谱,利用中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件(2012年版)进行分析;采用网络药... 详细信息

目的基于指纹图谱和网络药理学分析预测经典名方竹茹汤(Zhuru Decoction,ZRD)中葛根的质量标志物(QMarker)。方法建立葛根药材和饮片的水煎液及竹茹汤的指纹图谱,利用中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件(2012年版)进行分析;采用网络药理学筛选和分析竹茹汤中葛根相关成分的作用靶点和通路,构建成分-靶点-通路网络,预测竹茹汤中葛根发挥治疗胃热呕吐功效潜在的Q-Marker。结果分别建立了15批葛根药材水煎液、葛根饮片水煎液和18批竹茹汤的指纹图谱,相似度均>0.95,并指认出6个共有成分,分别为4号峰3′-羟基葛根素、6号峰葛根素、7号峰3′-甲氧基葛根素、9号峰葛根芹菜糖苷、11号峰大豆苷、23号峰大豆苷元;从网络药理学数据库中筛选分析得到6个化合物的14个核心靶点,包括转录因子p65(transcription factor p65,RELA)、RAC-α丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(RAC-αserine/threonine-protein kinase,AKT1)、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)、信号转导和转录激活因子1-α/β(signal transducer and activator of transcription 1-α/β,STAT1)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、丝裂原活化蛋白激酶14(mitogen-activated protein kinase14,MAPK14)、STAT3、转录因子AP-1(transcription factor AP-1,JUN)、细胞肿瘤抗原p53(cellular tumor antigen p53,TP53)等和20条关键通路,包括IL-6、TNF信号通路、NOD样受体(NOD-like receptor)信号通路、Toll样受体(Toll-like receptor)信号通路等构建成分-靶点-通路图;基于"Q-Marker五原则"分析预测大豆苷元、葛根素、大豆苷为竹茹汤中葛根潜在的Q-Marker。结论通过指纹图谱和网络药理学分析预测竹茹汤中葛根的Q-Marker,为全面控制竹茹汤的质量提供依据,为进一步研究竹茹汤的作用机制提供参考,同时为经典名方中复方及单味药的Q-Marker的关联性研究提供示范。

关键词：葛根经典名方竹茹汤指纹图谱网络药理学质量标志物靶点通路胃热 3′-羟基葛根素葛根素 3′-甲氧基葛根素葛根芹菜糖苷大豆苷大豆苷元

口服葛根总黄酮固体脂质纳米粒冻干粉的制备及其4种成分释放度考察

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中草药 2014年第17期45卷 2467-2474页

作者：孟祥平周群王治平樊化王一飞河南科技大学医学技术与工程学院河南洛阳471003 华中科技大学同济药学院湖北武汉430030 广东药学院药科学院广东广州510006 暨南大学生物医药研究院广东广州510632

目的制备口服葛根总黄酮固体脂质纳米粒冻干粉并考察其主要有效成分3′-羟基葛根素、葛根素、大豆苷和大豆苷元的释放度。方法采用高压均质法制备葛根总黄酮固体脂质纳米粒混悬液,以甘露醇为冻干保护剂制备冻干粉,以人工胃液(pH 1.2)为... 详细信息

目的制备口服葛根总黄酮固体脂质纳米粒冻干粉并考察其主要有效成分3′-羟基葛根素、葛根素、大豆苷和大豆苷元的释放度。方法采用高压均质法制备葛根总黄酮固体脂质纳米粒混悬液,以甘露醇为冻干保护剂制备冻干粉,以人工胃液(pH 1.2)为溶出介质,考察葛根总黄酮固体脂质纳米粒冻干粉中4种有效成分的释放度。结果正交试验优选制备工艺:脂质-表面活性剂比例及用量为2∶1及2.0%、葛根总黄酮用量2.5%、150 MPa均质15次,并制备葛根总黄酮固体脂质纳米粒冻干粉,其粒径、多分散指数及Zeta电位分别为(517.1±10.3)nm、0.484±0.210及(-21.91±2.03)mV。葛根总黄酮固体脂质纳米粒冻干粉中4种有效成分的释放速率显著低于其物理混合物,具有明显的缓释特征。结论葛根总黄酮固体脂质纳米粒冻干粉制备方法简便,能显著延缓主要有效成分的释放速率,有望成为葛根总黄酮的新型纳米给药系统。

关键词：葛根总黄酮固体脂质纳米粒有效成分释放度冻干粉 3′-羟基葛根素葛根素大豆苷大豆苷元

基于一测多评法含量测定及薄层鉴别的经典名方竹茹汤颗粒剂的质量评价研究

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中草药 2023年第14期54卷 4511-4519页

作者：何天雨梅茜王晓丽毛靖谢辉郭勇侯金才陆兔林毛春芹南京中医药大学药学院江苏南京210023 神威药业集团有限公司河北石家庄051430

目的建立经典名方竹茹汤颗粒(Zhuru Decoction Granules,ZDG)特征图谱及一测多评(quantitative analysis multicomponents by single marker,QAMS)法测定其主要成分,优化薄层色谱条件,建立同时鉴别葛根素和甘草苷的方法。方法优化并确... 详细信息

目的建立经典名方竹茹汤颗粒(Zhuru Decoction Granules,ZDG)特征图谱及一测多评(quantitative analysis multicomponents by single marker,QAMS)法测定其主要成分,优化薄层色谱条件,建立同时鉴别葛根素和甘草苷的方法。方法优化并确定HPLC最佳色谱条件并建立特征图谱,以葛根素作为参照物,建立葛根素、3′-羟基葛根素、3′-甲氧基葛根素、葛根素芹菜糖苷、大豆苷、甘草苷、甘草酸的QAMS法,建立主要药效成分葛根素及甘草苷同时鉴别的薄层条件。结果得到15批样品特征图谱与其对照图谱的相似度均大于0.95;15批制剂运用QAMS法和外标法得到的各成分含量无显著性差异,7种成分相对误差均低于5%;通过稳定性考察证明薄层检测条件稳定可行。结论该方法科学可行,稳定可控,有助于经典名方ZDG质量控制方法的完善和提高,为经典名方的质量控制评价提供参考。

关键词：经典名方竹茹汤特征图谱一测多评法薄层鉴别葛根素甘草苷 3′-羟基葛根素 3′-甲氧基葛根素葛根素芹菜糖苷大豆苷甘草酸

响应面法优选葛根超微粉的制备工艺及活性成分测定研究

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中草药 2018年第13期49卷 2993-3000页

作者：孔馨逸刘妍如唐志书王梅吕杨张遥遥董娇宋忠兴钱大玮陕西中医药大学陕西省中药资源产业化协同创新中心陕西省创新药物研究中心陕西咸阳712083 陕西中医药大学附属医院陕西咸阳712000 南京中医药大学药学院江苏省方剂高技术研究重点实验室江苏省中药资源产业化过程协同创新中心江苏南京210023

目的建立葛根中8种主要黄酮类成分UPLC同时测定法,研究超微粉碎技术对葛根黄酮类成分含量的影响,确定葛根超微粉的生产工艺。方法采用响应面设计方法对葛根粉碎技术中的粉碎时间、投药量和初始粒度3个因素进行考察,以粒径分布(D90、D50)... 详细信息

目的建立葛根中8种主要黄酮类成分UPLC同时测定法,研究超微粉碎技术对葛根黄酮类成分含量的影响,确定葛根超微粉的生产工艺。方法采用响应面设计方法对葛根粉碎技术中的粉碎时间、投药量和初始粒度3个因素进行考察,以粒径分布(D90、D50)和UPLC法测定的不同粒径葛根粉(10~40、40~65、300目)中8个黄酮类活性成分(3′-羟基葛根素、葛根素、3′-甲氧基葛根素、大豆苷、染料木苷、大豆苷元、染料木素和芒柄花素)的含量数据,共10个指标作为响应因子进行葛根超微粉碎技术评价研究。结果葛根中8种黄酮类化合物分别在75.8~242.7、205.6~658.0、147.3~417.3、10.2~163.3、11.3~182.0、1.2~18.8、0.25~4.00、0.35~5.37μg/mL与色谱峰峰面积呈良好的线性关系,平均回收率为98.86%、99.25%、99.90%、100.17%、100.21%、101.40%、100.73%、101.42%,RSD均小于3.0%,UPLC同时测定结果显示,相较其他粒径葛根粉,葛根超微粉(300目)黄酮类含量更高。响应面法优选结果显示超微粉的最佳工艺参数条件为在粒径为80目[(180.0±7.6)μm],通过5号筛时,投药量为247 g,粉碎时间为26 min。结论响应面法优选的葛根超微粉碎工艺简便,准确度较高,得到的超微粉黄酮含量更高。该工艺可以为葛根超微粉碎技术提供参考。

关键词：葛根超微粉 3′-羟基葛根素葛根素 3′-甲氧基葛根素大豆苷染料木苷大豆苷元染料木素芒柄花素响应面法超高效液相色谱法

基于斑马鱼模型和分子对接技术的心可舒片促血管生成活性成分研究

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中草药 2022年第5期53卷 1418-1433页

作者：柳晴张云刘可春王西新张长青周洪雷夏青山东中医药大学药学院山东济南250355 齐鲁工业大学(山东省科学院) 山东省科学院生物研究所山东济南250103

目的基于斑马鱼模型和分子对接技术研究心可舒片的促血管生成活性成分。方法以人脐静脉内皮细胞HUVECs为模型,采用CCK-8与EdU-488细胞增殖检测试剂盒检测细胞活性与增殖能力,采用划痕实验与Transwell实验评价细胞迁移能力,采用成管实验... 详细信息

目的基于斑马鱼模型和分子对接技术研究心可舒片的促血管生成活性成分。方法以人脐静脉内皮细胞HUVECs为模型,采用CCK-8与EdU-488细胞增殖检测试剂盒检测细胞活性与增殖能力,采用划痕实验与Transwell实验评价细胞迁移能力,采用成管实验检测各组细胞成管腔能力,评价心可舒片对HUVECs的促血管生成活性。以斑马鱼为模型,采用血管内皮细胞生长因子受体抑制剂PTK787建立斑马鱼节间血管损伤模型,根据各组节间血管长度,评价心可舒片对斑马鱼的促血管生成活性。心可舒片29个成分与表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)、血管内皮生长因子受体1(vascular endothelial growth factor receptor 1,VEGFR1)、蛋白激酶B(protein kinase B,AKT)和VEGFR2的7个晶体结构进行分子对接,通过打分值与对接能筛选潜在活性成分,采用斑马鱼模型评价潜在活性成分的促血管生成活性。结果心可舒片可显著提高细胞增殖能力(P葛根素、3′-甲氧基葛根素、3′-羟基葛根素、大豆苷、紫草酸、迷迭香酸和考迈斯托醇可显著恢复PTK787诱导的斑马鱼节间血管损伤(P<0.05、0.01、0.001)。结论采用分子对接技术与斑马鱼模型从心可舒片中筛选得到10个具有促血管生成作用的活性成分。

关键词：心可舒片促血管生成人脐静脉内皮细胞斑马鱼丹酚酸A 丹酚酸B 丹酚酸D 葛根素 3′-甲氧基葛根素 3′-羟基葛根素大豆苷紫草酸迷迭香酸考迈斯托醇

六经头痛片HPLC指纹图谱建立及多指标成分定量测定研究

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中草药 2017年第20期48卷 4167-4173页

作者：王月红游飞祥王磊许浚袁雪海龚苏晓朱晓丹韩彦琪张洪兵张铁军陈常青天津医科大学天津300070 天津中医药大学天津300193 天津中新药业集团股份有限公司隆顺榕制药厂天津300457 天津药物研究院天津300193

目的建立六经头痛片(LTT)HPLC指纹图谱,并采用波长切换技术同时定量测定3′-羟基葛根素、葛根素、大豆苷、特女贞苷和大豆苷元,为评价LTT质量提供依据。方法采用HPLC法,以Diamonsil C_(18)(250 mm×4.6 mm,5μm)为色谱柱,乙腈-0.1%磷酸... 详细信息

目的建立六经头痛片(LTT)HPLC指纹图谱,并采用波长切换技术同时定量测定3′-羟基葛根素、葛根素、大豆苷、特女贞苷和大豆苷元,为评价LTT质量提供依据。方法采用HPLC法,以Diamonsil C_(18)(250 mm×4.6 mm,5μm)为色谱柱,乙腈-0.1%磷酸水为流动相,分别建立LTT高极性和低极性部分指纹图谱,并采用波长切换技术同时测定LTT中3′-羟基葛根素、葛根素、大豆苷、特女贞苷和大豆苷元5种指标性成分量。结果分别建立了11批LTT高、低极性部分指纹图谱,其相似度均大于0.90;低极性指纹谱确定了16个共有峰,对其中12个共有峰进行了归属,11、12、13号峰来源于白芷,1、2、3、7号峰来源于葛根,8号峰来源于女贞子,5、6号峰来源于川芎,15号峰来源于藁本,4号峰为川芎和藁本的共有峰,对其中7个共有峰经对照品指认,分别为葛根素(1号峰)、3′-甲氧基葛根素(2号峰)、大豆苷(3号峰)、阿魏酸(4号峰)、大豆苷元(7号峰)、欧前胡素(11号峰)和异欧前胡素(13号峰);高极性指纹图谱确定了10个共有峰,其中2~9号峰来源于葛根,1、10号峰来源于女贞子,对其中5个共有峰经对照品指认,分别为3′-羟基葛根素(2号峰)、葛根素(3号峰)、3′-甲氧基葛根素(4号峰)、大豆苷(7号峰)和特女贞苷(10号峰)。多成分定量测定中,3′-羟基葛根素在71.60~716.00 ng(r=0.999 1)、葛根素在407.78~4 077.80 ng(r=0.999 4)、大豆苷在90.72~907.20 ng(r=0.999 9)、特女贞苷在95.80~958.00 ng(r=0.999 1)、大豆苷元在21.98~219.80 ng(r=0.999 9)线性关系良好,平均加样回收率和相应的RSD分别为101.1%、1.38%,97.8%、0.72%,99.1%、0.75%,97.8%、2.75%,98.7%、0.70%;10批样品中3′-羟基葛根素量为3.08~3.84 mg/m L、葛根素17.71~21.24 mg/m L、大豆苷3.51~4.71 mg/m L、特女贞苷1.40~5.69 mg/m L、大豆苷元0.66~0.86 mg/m L。结论该法稳定可靠、重复性好,通过HPLC指纹图谱结合多指标定量测定方法较全面地反映了LTT内在质量,为其质量控制提供了可靠的科学依据。

关键词：六经头痛片 HPLC 指纹图谱 3′-羟基葛根素葛根素大豆苷特女贞苷大豆苷元白芷葛根女贞子川芎藁本