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KK-42对日本沼虾蜕皮激素及其受体表达的影响

KK-42对日本沼虾蜕皮激素及其受体表达的影响

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作者：刘方河南师范大学

学位级别：硕士

日本沼虾（Macrobrachium nipponense）是我国重要的淡水经济虾类。前期研究已经证明，KK-42处理日本沼虾幼虾，可以显著促进其生长，但是对于KK-42促进日本沼虾生长的机理仍不了解。鉴于蜕皮激素受体（ecdysteroid receptor, EcR）和... 详细信息

日本沼虾（Macrobrachium nipponense）是我国重要的淡水经济虾类。前期研究已经证明，KK-42处理日本沼虾幼虾，可以显著促进其生长，但是对于KK-42促进日本沼虾生长的机理仍不了解。鉴于蜕皮激素受体（ecdysteroid receptor, EcR）和维甲酸X受体（retinoid-X-receptor, RXR）在甲壳动物生长和发育中的重要作用，以日本沼虾为材料，研究了上述两种基因的表达与蜕皮周期的相关性，并研究了KK-42对上述两种基因表达的影响，结合测定血淋巴中20-羟蜕皮酮（20-hydroxyecdysone,20E）滴度，旨在从分子水平探讨KK-42促生长的机制。将体长4.5±0.5cm的日本沼虾随机分成2组：实验组和对照组，其中，实验组用1.95×10-4mol/L的KK-42溶液浸泡处理1min，对照组用不含KK-42的溶液做相同的处理。于KK-42处理后不同时间解剖肝胰腺，用Real-time PCR方法测定EcR mRNA和RXR mRNA的表达水平;于KK-42处理后不同时间抽取血淋巴，采用反相高效液相色谱（reverse-phase high-performance liquid chromatography, HPLC）检测血淋巴中20E的滴度。结果如下：HPLC结果显示，KK-42处理可显著提高血淋巴中20E滴度，在处理后3h和6h比对照组分别增加了121.71%（P＜0.05）、268.96%（P＜0.01）。Real-time PCR结果表明，EcR在肝胰腺、肌肉、表皮和眼柄等组织均有表达，其中肝胰腺和表皮表达量最高;肝胰腺EcR基因的表达量在蜕皮前期（D2-3）最高，蜕皮后期（A）较低。KK-42处理可显著诱导处于蜕皮间期的日本沼虾肝胰腺EcR mRNA的水平，且在处理后第6h和第12h分别比对照组提高了233.56%（P＜0.01）和110.73%（P＜0.05）。Real-time PCR结果表明，RXR在肝胰腺、肌肉、表皮和眼柄等组织均有表达，其中肝胰腺表达量最高;肝胰腺RXR基因的表达量在蜕皮前期（D2-3）最高，蜕皮后期（B）较低。KK-42处理可显著诱导处于蜕皮间期的日本沼虾肝胰腺RXR mRNA的水平，且在处理后第3h和第12h分别比对照组提高了195.53%（P＜0.01）和80.83%（P＜0.05）结论：EcR基因和RXR基因的表达与蜕皮周期具有一定的相关性，咪唑类物质KK-42能够显著提高日本沼虾血淋巴中20E滴度，诱导肝胰腺中EcR基因和RXR基因的表达。

关键词： KK-42 日本沼虾 20-羟蜕皮酮 EcR RXR

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