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健康与患布鲁菌病奶牛血清蛋白2-de的建立和初步分析

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中国兽医学报 2013年第8期33卷 1237-1240页

作者：陶金忠蒯淑霞杨学文武乾明王剑锋宁夏大学农学院宁夏银川750021 宁夏吴忠市动物疾病预防控制中心宁夏吴忠751100 宁夏吴忠市利通区马莲渠乡兽医站宁夏吴忠751100 宁夏吴忠市利通区扁担沟镇兽医站宁夏吴忠751100 兰州生物制品研究所甘肃兰州730046

采用商业化试剂盒Albumin&IgG depletion Spintrap处理奶牛血清样品,比较处理前后对2-de图谱的影响,结果发现处理后奶牛血清2-de图谱中高丰度蛋白明显减少,但低丰度蛋白也有损失。采用不去除高丰度蛋白的方法比较健康奶牛与感染布鲁杆... 详细信息

采用商业化试剂盒Albumin&IgG depletion Spintrap处理奶牛血清样品,比较处理前后对2-de图谱的影响,结果发现处理后奶牛血清2-de图谱中高丰度蛋白明显减少,但低丰度蛋白也有损失。采用不去除高丰度蛋白的方法比较健康奶牛与感染布鲁杆菌病奶牛的血清2-de图谱,发现了11个明显差异的蛋白点,其中3个在正常奶牛血清中高表达,1个只在正常奶牛血清中表达;6个在患布鲁菌病奶牛血清中高表达,1个只在患布鲁菌病奶牛血清中表达。这些差异蛋白点的发现为将来质谱分析奠定基础。

关键词：奶牛布鲁菌病血浆蛋白 2-de

纳米铜对大鼠肝脏毒性的蛋白质组2-de图谱分析

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中国畜牧兽医 2012年第11期39卷 22-26页

作者：高昭辉董书伟薛慧文申小云荔霞中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所农业部兽用药物创制重点实验/甘肃省中兽药工程技术中心甘肃兰州730050 甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070 甘肃省牦牛繁育工程重点实验室甘肃兰州730050 贵州省毕节学院贵州毕节551700

为获取纳米铜对大鼠肝脏毒性的蛋白质组表达图谱,试验通过构建大鼠纳米铜中毒模型,采用双向凝胶电泳技术获取了大鼠纳米铜中毒组和对照组肝脏的蛋白质2-de图谱,结合PDQuest 8.0软件分析发现200mg/kg纳米铜组大鼠肝脏2-de图谱中有27个蛋... 详细信息

为获取纳米铜对大鼠肝脏毒性的蛋白质组表达图谱,试验通过构建大鼠纳米铜中毒模型,采用双向凝胶电泳技术获取了大鼠纳米铜中毒组和对照组肝脏的蛋白质2-de图谱,结合PDQuest 8.0软件分析发现200mg/kg纳米铜组大鼠肝脏2-de图谱中有27个蛋白质斑点表达上调,16个蛋白质斑点表达下调,共有43个差异蛋白质点。试验利用蛋白质组学技术研究大鼠纳米铜肝脏蛋白质组学,为在蛋白质水平阐明纳米铜的毒性作用机制奠定基础。

关键词：蛋白质组学 2-de 纳米铜大鼠

喉鳞状细胞癌组织2-de/MS的差异蛋白质组学研究

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喉鳞状细胞癌组织2-DE/MS的差异蛋白质组学研究

作者：陶冶安徽医科大学

学位级别：硕士

背景:喉癌是头颈部最常见的恶性肿瘤。虽早期喉癌的预后较好,五年生存率可达80%以上,但很多声门上及声门下型喉癌经常在较晚期才被发现,五年生存率降至70%,如出现颈淋巴结转移,则降至50%左右,且多数病人不能保留喉功能,生活质量降低。... 详细信息

背景:喉癌是头颈部最常见的恶性肿瘤。虽早期喉癌的预后较好,五年生存率可达80%以上,但很多声门上及声门下型喉癌经常在较晚期才被发现,五年生存率降至70%,如出现颈淋巴结转移,则降至50%左右,且多数病人不能保留喉功能,生活质量降低。因此早期发现和治疗是提高此病治愈率的关键。识别和鉴定喉癌相关的标志蛋白,不仅有助于喉癌的早期诊断,而且有助于阐明喉癌发生发展的机制和进一步治疗。目的:应用蛋白质组学寻找与喉癌发生发展关系密切的的标志蛋白,探讨该标志蛋白在喉癌的发展机制中的作用及与喉癌预后的关系,以便对喉癌的早期诊断和进一步治疗提供一定的依据。方法:应用蛋白质组学2-de和基质辅助的激光解吸/离子化飞行时间质谱寻找与喉癌发生发展关系密切的的标志蛋白,比较分析了4例喉癌组织和其正常组织蛋白表达谱,得到一组差异表达的蛋白质,选取其中之一经MALDI-TOF-MS鉴定为IL-12beta2;再通过RT-PCR和Western blot的方法验证IL-12R beta 2基因和蛋白在喉癌组织和其配对的正常组织中的表达差异。结果:1.用2-de技术比较分析了喉癌配对组织(4例),共发现了23个在喉癌和其配对的正常喉粘膜上皮间差异显著表达的蛋白质/肽点。经数据分析和去除全部个体差异后,经MALDI-TOF-MS鉴定分别为:nebulette;adlican;C-myc promotorbinding protein Cell prolifation of antigen Ki-67;Casein kinase 1,deltaisoform 2;vimentin;FactorⅧ;Zinc finger protein 19;Fatty acid bindingprotein 3;Mitochondrial ribosomal protein L55;Tyrosine kinase;Interleukin12 receptor,beta 2:KIAA1200:KIAA1319:KIAA0216 splice variant 1:KIAA0216splice variant 2;KIAA0196;KIAA0368;Mitogen-actirated protein kinasekinase kinase 3,isoform 1。***-PCR分析:IL-12R beta 2基因在喉癌组织中表达下调。*** blot分析:IL-12R beta 2蛋白在喉鳞癌组织中下调。结论:2-de/MS技术是快速认识喉癌异常表达蛋白质组的有效手段。IL-12R beta2在喉癌组织中通常为低表达,此结果可能提示:IL-12R beta2是一种新发现的喉鳞癌组织标志蛋白,与喉鳞癌的发生发展关系密切。

关键词：喉癌 IL-12R beta 2 肿瘤蛋白标志物 2-de MALDI-TOF-MS

2-de、CDFI、CDPI和PW对移植肾的动态观察

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中华临床医学杂志 2006年第2期7卷 6-8页

作者：王怀禄刘俊娥兰州军区兰州总医院超声诊断科 730050

目的探讨4种方法对移植肾动态观察的价值。方法对移植肾应用4种方法联合观察，对其所获资料，综合分析，明确诊断。结果（1）18例19次肾移植术后发生BARl例，AR4例，HAR和AR手术切除移植肾各1例，病理诊断分别符合HAR和AR。移植肾无... 详细信息

目的探讨4种方法对移植肾动态观察的价值。方法对移植肾应用4种方法联合观察，对其所获资料，综合分析，明确诊断。结果（1）18例19次肾移植术后发生BARl例，AR4例，HAR和AR手术切除移植肾各1例，病理诊断分别符合HAR和AR。移植肾无功能3例；（2）目前存活15～56个月17例（94．4％），死亡1例（5．6％）；（3）并发症主要有移植肾自发性破裂，消化道出血，肾周积液，肾静脉血栓，输尿管扩张、肾盂积水。结论（1）移植肾术后早期超声检查多呈弥漫性病变样改变，此后正常者逐渐代偿性增大，失功者逐渐缩小，血供明显减少；（2）AR主要显示为移植肾体积增大，实质增厚，锥体增大，肾窦变小，肾内血管变细，血流灌注减少，高流速高阻力，RI〉0．8；（3）超声检查安全无创，简便快捷，可重复，获取信息量多，进行动态观察，综合分析，为诊治、评估疗效及预后提供客观依据。

关键词：移植肾 2-de CDFI CDPI PW 动态观察

2-de、CDFI、PW和CDPI诊断原发性肝癌

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西北国防医学杂志 2003年第3期24卷 208-210页

作者：王怀禄刘俊娥常虹程瑞萍王惠吕建红雷亮兰州军区兰州总医院超声诊断科甘肃兰州730050 甘肃渭远县医院甘肃渭远748200

目的 :观察分析CDFI和CDPI对HCC血供的特点以及PW探测肿瘤血流动力学改变。方法 :对 1 39例HCC的 1 94个瘤体进行CDFI和CDPI观察 ,应用PW对每例最大瘤体 6种血流参数进行控测 ,对V1 、RI进行分析。结果 :CDFI对肿瘤血流显示率为 94.3 % ... 详细信息

目的 :观察分析CDFI和CDPI对HCC血供的特点以及PW探测肿瘤血流动力学改变。方法 :对 1 39例HCC的 1 94个瘤体进行CDFI和CDPI观察 ,应用PW对每例最大瘤体 6种血流参数进行控测 ,对V1 、RI进行分析。结果 :CDFI对肿瘤血流显示率为 94.3 % ;CDPI为 97.4 % ;PW检出搏动性血流频谱为 93 .5 % ,Vmax为 1 4 5cm·s- 1 ,最小为 1 2cm·s- 1 (78.3± 8.4) ;最大RI0 .83 ,最小 0 .2 3(0 .61± 0 .1 3) ,其中RI>7.0占 71 .5 % ,搏动性与持续性水纹状血流频谱同时检出率为 48.2 %。结论 :①对HCC瘤体观察所获血流信息CDPI较CDFI敏感 ,PW探及搏动性血流频谱的检出具有确诊意义 ;②瘤体的血供以动脉为主 ,部分为动脉与静脉双重血供 ;③血流动力学改变绝大多数为高速高阻型 ,亦有低速低阻型。

关键词：原发性肝癌超声波诊断 2-de CDFI PW CDPI

利用2-de和MALDI-TOP-MS在人大肠癌高低转移潜能细胞株中筛选转移相关蛋白

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福州总医院学报 2008年第B12期15卷 365-368,364页

作者：曲利娟丁彦青梁莉余英豪南京军区福州总医院病理科南方医科大学病理学教研窒

目的:分析比较人大肠癌不同转移潜能细胞株的差异表达蛋白质图谱,筛选并探讨肿瘤转移相关蛋白与大肠癌发生发展转移的关系。方法:利用双向凝胶电泳(2-de)联合基质辅助激光解析离子化-飞行时间-质谱(MALDI- TOF-MS)技术,分析人大肠癌高... 详细信息

目的:分析比较人大肠癌不同转移潜能细胞株的差异表达蛋白质图谱,筛选并探讨肿瘤转移相关蛋白与大肠癌发生发展转移的关系。方法:利用双向凝胶电泳(2-de)联合基质辅助激光解析离子化-飞行时间-质谱(MALDI- TOF-MS)技术,分析人大肠癌高转移性细胞株SW620和低转移性细胞株SW480差异表达蛋白质图谱,查询数据库筛选可能的大肠癌转移相关蛋白质并进行免疫组化和Western免疫印迹验证。结果:MalenieⅢ软件分析结果显示2-de图谱重复性、匹配性较好。两种细胞株有25个蛋白点差异表达(SW620 14个,SW480 11个),经质谱分析及数据库查询鉴定有9个蛋白可能与转移相关。其中AnnexinⅠ、β-半乳糖苷结合蛋白1、钙调蛋白、主要组织相容性复合物Ⅱ类抗原、cofilin、超氧化物歧化酶和Rab相关GTP结合蛋白仅在SW480中表达,可能对大肠癌转移起抑制作用;而人硫氧还蛋白、泛素偶联酶仅在SW620中表达,可能对大肠癌转移起促进作用。选择其中感兴趣的AnnexinⅠ进行验证,其在细胞株的表达结果与2-de一致。AnnexinⅠ在大肠正常组织不表达,在大肠癌无转移组和转移组中表达上调,三组表达差异具有显著性(H=19.801,P =0.000)。表达与大肠癌淋巴结转移呈正相关性(Z=-2.554,P=0.011),但表达与大肠癌不同组织学类型(H=0.678,P =0.839)和不同病理分级(H=0.470,P=0.747)均无相关性。大肠癌转移组中原发癌和淋巴结转移癌表达差异无显著性(Z=0.737,P=0.461)。结论:大肠癌转移是多种蛋白质功能共同作用的结果,不同转移潜能细胞株SW620和SW480蛋白质图谱明显差异表达。其中AnnexinⅠ蛋白可作为反映大肠癌生物学行为和判断预后的重要指征。

关键词：大肠肿瘤 SW620 SW480 2-de MALDI-TOF-MS 蛋白质组学

食品过敏原指纹图谱快速检测研究(三)——花生总蛋白 2- de 指纹图谱和蛋白点 MALDI- TOF/MS分析

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热带医学杂志 2006年第3期6卷 271-273,292页

作者：吴海强余晓刘志刚深圳大学生命科学学院深圳518060

目的建立一种简捷、准确、快速检测食品过敏原的方法。分析花生总蛋白2-de(2-dimensionelectrophoresis)指纹图谱与蛋白点MALDI-TOF/MS分析联用的可行性。方法新鲜生花生去皮搅碎后丙酮去脂,PBS抽提总蛋白,冻干得初提样品,试剂盒精提,... 详细信息

目的建立一种简捷、准确、快速检测食品过敏原的方法。分析花生总蛋白2-de(2-dimensionelectrophoresis)指纹图谱与蛋白点MALDI-TOF/MS分析联用的可行性。方法新鲜生花生去皮搅碎后丙酮去脂,PBS抽提总蛋白,冻干得初提样品,试剂盒精提,双向电泳IEF选择11cm非线性胶条(pH=3-10)溶胀上样,平衡后转移胶条在电泳槽中进行第二向SDS-PAGE垂直电泳(10%),考染后扫描图像进行计算机分析处理,同时在胶上任意选择两个蛋白点切胶、脱色、消化后进行MALDI-TOF/MS分析。结果2-de指纹谱图显示花生总蛋白的分布范围较窄,主要是一些中、小分子量的中性、弱酸和弱碱性蛋白,用PDQuest2-DAnalysis分析软件对此2-de图谱分析可以发现其中共有178个特征性蛋白点。以花生总蛋白2-de指纹图谱为基础,进一步对单个蛋白点进行MALDI-TOF/MS指纹图谱分析,结果显示每一个蛋白点都具有自己特征的分子量峰和图谱形状,无需进行肽片段混合物的分析、检索亦可完全区分不同的蛋白点,从而可以对食品过敏原进行更深入、更准确的指纹图谱检测。结论食品过敏原总蛋白2-de指纹图谱与蛋白点MALDI-TOF/MS指纹图谱分析联用可以更好的进行食品过敏原指纹图谱快速检测研究。

关键词：食品过敏原指纹图谱 2-de MALDI—TOF/MS 快速检测

食品过敏原指纹图谱快速检测研究(一)——鲫鱼、鲢鱼总蛋白2-de指纹图谱分析

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热带医学杂志 2006年第1期6卷 10-12页

作者：吴海强余晓刘志刚深圳大学生命科学学院深圳518060

目的建立一种简捷、准确、快速检测食品过敏原的方法。分析鲫鱼和鲢鱼总蛋白2-de(2- dimension electrophoresis)指纹图谱,确定食品过敏原指纹图谱快速检测的可行性。方法取新鲜鲫鱼和鲢鱼,去内脏和鱼鳞,在预冷的丙酮中搅碎,用丙酮去脂,... 详细信息

目的建立一种简捷、准确、快速检测食品过敏原的方法。分析鲫鱼和鲢鱼总蛋白2-de(2- dimension electrophoresis)指纹图谱,确定食品过敏原指纹图谱快速检测的可行性。方法取新鲜鲫鱼和鲢鱼,去内脏和鱼鳞,在预冷的丙酮中搅碎,用丙酮去脂,PBS抽提总蛋白,PBS透析,冻干得初提样品。用Clean—up Kit 试剂盒对两种鱼的总蛋白初提样品进行精提。双向电泳第一向IEF选择13 cm非线性胶条(pH=3-10),采用溶胀方法上样,达到平衡后转移胶条进行第二向SDS-PAGE垂直电泳(10％),银染,脱色后扫描图像进行计算机分析处理。结果 2-de图像显示鲫鱼和鲢鱼总蛋白主要是中等分子量蛋白,呈弱酸性和弱碱性,其蛋白点既有相同点也有差异点。结论通过2-de指纹图谱分析完全可以区分这两种不同的鱼类,对于差异性蛋白点可以给出明确的判定。

关键词：食品过敏原指纹图谱 2-de 快速检测

无症状冠心病与冠心病心绞痛时2—de测定心功能结果分析

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河北医学 2000年第5期6卷 385-387页

作者：马其民吴丽君安徽省蚌埠市第二人民医院安徽蚌埠233000

目的 :用 2— de测定无症状性冠心病及冠心病伴有心绞痛时心功能情况。方法 :用美国HP SONOS10 0 0多谱勒超声诊断显像仪分别测定两组 SV、CO、CI、SVI、L VEF,测定两组伴有心力衰竭时 SV、CO、CI、SVI、L VEF参数值。结果 :46例无症状... 详细信息

目的 :用 2— de测定无症状性冠心病及冠心病伴有心绞痛时心功能情况。方法 :用美国HP SONOS10 0 0多谱勒超声诊断显像仪分别测定两组 SV、CO、CI、SVI、L VEF,测定两组伴有心力衰竭时 SV、CO、CI、SVI、L VEF参数值。结果 :46例无症状组 CO2 L / min2 0例 (43.5 % ) ,5 0例伴有心绞痛组 CO2 L / min34例 (6 8.0 % ) ,X2 =5 .85 4,P0 .0 5 ,46例无症状组并发心力衰竭 6例 (13.0 4% ) ,SV 2例 (33.3% ) ,CO2 L / min2例 (33.3% ) ,CI2 L/ min/ m2、SVI2各 4例 (6 6 .6 7% ) ;EF全部 >42 %。心绞痛组发生心力衰竭 18例 (36 % ) :SV2 L/ min、CI2 L/ min/ m2、SVI2各 16例(88.89% )、EF2 % 6例 (33.33% ) P<0 .0 1。结论 :无症状冠心病及冠心病伴有心绞痛时心功能两组除 CO有较显著差异外 ,其余多项心功能参数值损伤情况基本相同 ,冠心病伴有心绞痛时。

关键词：冠心病无症状心绞痛 2-de 心功能