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江苏农业科学 2024年第11期52卷 61-67页

作者：孙凡王丽董洪燕吴植谢军卢会鹏王莉黄亚奇朱善元江苏农牧科技职业学院江苏泰州225300 江苏省兽用生物制药高技术研究重点实验室江苏泰州225300 江苏现代畜牧与新兽药工程技术中心江苏泰州225300 江苏省张家港市水产技术指导站江苏张家港211170

氨基糖苷类药物是一种重要的治疗人兽临床上细菌感染的抗菌药物,而16s rrna甲基化酶是近年新发现的氨基糖苷类药物高度耐药的一种耐药机制。对2021—2022年分离自泰州鸡源和鸭源的143株沙门菌进行阿米卡星抗性平板筛选,并通过PCR方法检... 详细信息

氨基糖苷类药物是一种重要的治疗人兽临床上细菌感染的抗菌药物,而16s rrna甲基化酶是近年新发现的氨基糖苷类药物高度耐药的一种耐药机制。对2021—2022年分离自泰州鸡源和鸭源的143株沙门菌进行阿米卡星抗性平板筛选,并通过PCR方法检测耐阿米卡星的菌株是否携带相应的耐药基因。结果显示,沙门菌中armA基因较流行(22/143,15.38%),也有少数菌株携带rmtB基因(1/143,0.70%),其他基因未检测到;不同宿主中,鸡源沙门菌是主要宿主;不同血清型中,印第安纳沙门菌是优势血清型。携带armA基因或rmtB基因的23株阳性菌,阿米卡星的MIC值均高达512μg/mL以上,且表现出多重耐药现象,其中,较为流行的耐药谱是氨苄西林-头孢唑啉-氨曲南-庆大霉素-阿米卡星-萘啶酸-环丙沙星-氯霉素-喹乙醇-复方新诺明-头孢噻肟-链霉素-四环素-氟苯尼考-磷霉素。国内外关于16s rrna甲基化酶基因在沙门菌中的研究相对较少。本研究结果可为生产实践中耐药菌株的快速监测提供参考,也可为动物临床或养殖业中合理使用氨基糖苷类药物提供理论依据。

关键词：鸡源鸭源沙门菌 16s rrna甲基化酶基因耐药性

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阿米卡星耐药鲍曼不动杆菌16s rrna甲基化酶基因的研究

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中国感染与化疗杂志 2013年第1期13卷 72-75页

作者：李玉珍李红玉杨银梅叶惠芬汪云霞薛春玲钟永根广东省河源市人民医院检验科 517000 中山大学孙逸仙纪念医院广州市第一人民医院

目的了解阿米卡星耐药鲍曼不动杆菌中16s rrna甲基化酶基因的分布情况。方法收集2010年1月—2012年4月临床标本中分离的阿米卡星耐药鲍曼不动杆菌54株。5种16 s rrna甲基化酶基因(armA、rmtA、rmtB、rmtC和rmtD)的检测采用聚合酶链反应(... 详细信息

目的了解阿米卡星耐药鲍曼不动杆菌中16s rrna甲基化酶基因的分布情况。方法收集2010年1月—2012年4月临床标本中分离的阿米卡星耐药鲍曼不动杆菌54株。5种16 s rrna甲基化酶基因(armA、rmtA、rmtB、rmtC和rmtD)的检测采用聚合酶链反应(PCR)方法,PCR产物采用琼脂糖凝胶电泳分析并将阳性扩增产物进行测序。抗菌药物的药敏试验采用纸片扩散法进行,WHONET5.5软件进行统计分析。结果 54株阿米卡星耐药鲍曼不动杆菌中40株检出16s rrna甲基化酶基因armA,检出率为74.1%,未检出rmtA、rmtB、rmtC及rmtD基因。54株阿米卡星耐药鲍曼不动杆菌对米诺环素、亚胺培南和美罗培南耐药率分别为38.9%、63.0%和64.8%,对其余14种抗菌药物耐药率均在85.0%以上。结论阿米卡星耐药鲍曼不动杆菌主要携带armA型16s rrna甲基化酶耐药基因,除米诺环素对该菌有较好的抗菌活性外,该菌对其他16种抗菌药物耐药严重。

关键词：鲍曼不动杆菌 16s rrna甲基化酶基因氨基糖苷类

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临床分离黏质沙雷菌质粒编码的16s rrna甲基化酶基因与β-内酰胺酶基因的研究

临床分离黏质沙雷菌质粒编码的16S rRNA甲基化酶基因与β-内酰胺...

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作者：马雪娇安徽医科大学

学位级别：硕士

目的了解201株安徽地区临床分离黏质沙雷菌药敏情况和质粒介导的16s r RNA甲基化酶检出率与基因型,为临床合理选择抗菌药物提供依据。研究临床分离黏质沙雷菌质粒介导的16s r RNA甲基化酶耐药基因与β-内酰胺酶基因的共转移情况。材料... 详细信息

目的了解201株安徽地区临床分离黏质沙雷菌药敏情况和质粒介导的16s r RNA甲基化酶检出率与基因型,为临床合理选择抗菌药物提供依据。研究临床分离黏质沙雷菌质粒介导的16s r RNA甲基化酶耐药基因与β-内酰胺酶基因的共转移情况。材料与方法菌株来源201株黏质沙雷临床分离菌株,来源于安徽省细菌耐药监测中心监测网所属34所医院（由皖南、皖中、皖北不同级别的医院组成）2005年012年每年9月份住院和门诊患者的各类临床标本。药敏实验质控菌株大肠埃希菌ATCC25922,转移接合试验受体菌大肠埃希菌J53 AZR,二者均为安徽省细菌耐药监控中心保存。方法1.采用MH琼脂倍比稀释法测定临床分离黏质沙雷菌株对抗菌药物的敏感性,质控菌采用*** ATCC 25922。2.煮沸法提取细菌的总DNA,碱裂解法提取质粒DNA;用聚合酶链反应（PCR）方法扩增质粒介导16s r RNA甲基化酶基因;PCR产物纯化测序,测序结果在Gen Bank中经Blast程序比对分析,以明确16s r RNA甲基化酶基因的基因型别以及是否突变。3.用16s r RNA甲基化酶基因阳性菌株与大肠埃希菌J53AzR行转移接合试验;对接合子进行生化鉴定并经PCR检测耐药基因,PCR扩增产物DNA测序确认;采用Muller-Hinton琼脂对比稀释法测定大肠埃希菌J53AzR与接合子对抗菌药物的最低抑菌浓度（MIC）。4.以16s r RNA甲基化酶基因阳性临床分离菌株的总DNA为模板,采用PCR方法扩增β-内酰胺酶基因;PCR产物纯化测序,测序结果在Gen Bank中经Blast程序比对,比较分析16s r RNA甲基化酶基因型别与β-内酰胺酶基因型别关系。5.以16s r RNA甲基化酶基因阳性接合子菌株质粒DNA为模板,PCR扩增β-内酰胺酶基因;PCR产物纯化测序,测序结果在Gen Bank中经Blast程序比对,明确基因型。探究16s r RNA甲基化酶基因与β-内酰胺酶基因是否共转移。结果1.201株黏质沙雷菌中,对17种抗菌药物的敏感率及耐药率可以看出,黏质沙雷菌对亚胺培南和美罗培南最敏感,敏感率高达98.51%。相比于其他三代头孢类抗菌药物,酶抑制剂复合制剂如哌拉西林-他唑巴坦和头孢哌酮-舒巴坦以及四代头孢菌素头孢吡肟的敏感性较好,分别可达76.62%、65.63%及74.13%。喹诺酮类抗菌药以加替沙星抗菌药物敏感性最高,为77.11%,其次为左氧氟沙星敏感性达75.12%。本研究中检测出135株对庆大霉素耐药、58株对阿米卡星耐药,二者耐药率分别为:67.16%及28.8%,58株对阿米卡星耐药的菌株同时对庆大霉素耐药。58株阿米卡星耐药菌株中45株来自痰,5株来自尿液,3株来自血液,3株来自分泌物,1株来自胸水,1株来自大便。2.58株同时对阿米卡星和庆大霉素耐药的黏质沙雷菌经PCR检测和DNA测序,7株为16s r RNA甲基化酶基因阳性,其中5株为arm A阳性,2株为rmt B阳性,所有菌株rmt A、rmt C、rmt D和npm A基因检测均为阴性。16s r RNA甲基化酶基因阳性菌株数占总临床分离黏质沙雷菌株数的阳性率为3.5%（7/201）,在耐阿米卡星菌株中的阳性率为12.1%（7/58）。3.7株16s r RNA甲基化酶基因阳性的菌株中有6株转移接合成功,接合子经生化鉴定为大肠埃希菌。经PCR扩增及DNA测序分析证实,5株接合子携带arm A基因;1株接合子携带rmt B基因。药敏结果表明,这6株接合子与受体菌相比,对阿米卡星等五种氨基糖苷类抗生素耐药性明显提高。接合子对第四代头孢菌素以及碳青霉烯类均敏感。4.7株16s r RNA甲基化酶基因阳性的菌株经PCR检测β-内酰胺酶基因显示5株临床分离株检测出β-内酰胺酶基因,最常见的基因型别为CTX-M。且PCR产物经DNA测序表明4株CTX-M基因阳性,均为CTX-M-14型;2株TEM基因阳性,均为TEM-1型;2株OXA基因阳性,均为OXA-1型;1株sHV基因阳性,为sHV-5型。其中有3株菌株检测出二种以上β-内酰胺酶基因。5.对6株携带有16s r RNA甲基化酶基因的转移接合成功接合子,以质粒DNA为模板,经PCR检测出4株β-内酰胺酶基因,其PCR产物经DNA测序证实:3株CTX-M基因阳性,均为CTX-M-14型;2株TEM基因阳性,均为TEM-1型;1株sHV基因阳性,为sHV-5型。结论1.药敏结果显示安徽地区临床分离黏质沙雷菌对多种抗菌药物呈现不同程度耐药,耐氨基糖苷类抗菌药物的菌株呈现多重耐药现象。2.研究报道了安徽地区存在携带有质粒编码的16s r RNA甲基化酶耐药基因的黏质沙雷菌,也是国内第一次在黏质沙雷菌中检出16s r RNA甲基化

关键词：黏质沙雷菌 16s rrna甲基化酶基因质粒耐药性

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四川省畜禽动物源大肠杆菌质粒介导16s rrna甲基化酶耐药基因检测

四川省畜禽动物源大肠杆菌质粒介导16S rRNA甲基化酶耐药基因检测

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作者：邓向东四川农业大学

学位级别：硕士

随着畜禽养殖业的规模化和集约化,各种应激因素增多,导致感染性疾病的发病率和死亡率居高不下。氨基糖苷类药物作为控制畜禽感染性疾病的主要药物,细菌已对该类药物产生了耐药性。近年来研究显示,质粒介导的16s rrna甲基化酶能保护细菌... 详细信息

随着畜禽养殖业的规模化和集约化,各种应激因素增多,导致感染性疾病的发病率和死亡率居高不下。氨基糖苷类药物作为控制畜禽感染性疾病的主要药物,细菌已对该类药物产生了耐药性。近年来研究显示,质粒介导的16s rrna甲基化酶能保护细菌30s核糖体16s rrna,使药物与之不能结合,介导对包括阿贝卡星在内的氨基糖苷类高水平耐药。大肠杆菌作为畜禽肠道重要栖居菌和病原菌,承受着各种药物选择压力,形成了多种耐药基因储库,故对其耐药性进行检测,可以了解耐药性的流行规律,预测耐药性的发展趋势,为评估抗菌药物使用风险,以及临床合理使用抗菌药物提供科学依据。本研究采用了Kirby-Bauer方法和PCR-测序法,检测了519株动物源大肠杆菌(437株共生菌和82株临床菌)对14种抗菌药物的药物敏感性,以及菌株质粒介导16s rrna甲基化酶基因。药敏结果显示,437株共生菌对14种抗菌药物表现出耐药性,其中对3种氨基糖苷类耐药性较低(耐药率2.98%～30.9%);对其余11种非氨基糖苷类药物呈不同耐药水平,其中对美罗培兰敏感(耐药率0.46%),对氨苄西林(69.79%)、复方新诺明耐药严重(68.72%);71.12%菌株呈多重耐药性,以3-5耐菌株所占比例最高(31.58%),耐药谱型宽,有108种耐药谱型。82株临床菌株对14种抗菌药物表现出不同水平耐药性,其中对卡那霉素、庆大霉素和阿米卡星3种氨基糖苷类耐药性较高,分别为100%、89.02%和32.93%;对其余11种非氨基糖苷类药物也呈不同耐药水平,其中除对美罗培兰敏感(耐药率3.66%),其余耐药率高达79.27%以上;100%菌株呈多重耐药性,以10-13耐菌株所占比例最高(84.14%),有23种耐药谱型,优势耐药谱型AMP/A/C/CFZ/CTR/CTX/CN/CHL/DOX/NAL/CIP/sXT/KAN。对耐氨基糖苷类的134株共生菌和82株临床菌株,进行了16s rrna甲基化酶基因(armA、rmtA、rmtB、rmtC、rmtD、rmtE、npmA)的PCR及PCR-测序检测。PCR检测结果显示,134株共生菌株中,5株携带rmtB基因(检出率3.73%),尚未检出armA、rmtA、rmtC、rmtD、rmtE、npmA;82株临床菌中,10株含rmtB基因(12.20%),1株含有rmtA(1.22%),且以rmtB和rmtA共存在。对菌株耐药表型与基因型比较结果显示,菌株携带的基因型与耐药表型不完全一致,如有些菌株携带armA和rmtB基因,却对阿米卡星呈敏感性。以上结果表明,本次检测的动物源大肠杆菌,无论共生菌还是临床菌株对抗菌药物表现不同程度的耐药性,且多重耐药性较严重。养殖业和兽医临床应谨慎使用抗菌药物;耐氨基糖苷类大肠杆菌菌株中主要携带rmtB和armA基因,流行率低;菌株携带16s rrna甲基化酶基因与菌株来源有关,临床菌株携带相关耐药基因比共生菌复杂;菌株携带基因型与耐药表型不完全一致,阳性菌株对抗菌活性高或兽医临床不使用药物耐药性显著高于阴性菌,反之菌株间耐药性无差异。

关键词：大肠杆菌耐药性 16s rrna甲基化酶基因检测

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鲍曼不动杆菌对氨基糖苷类药物双圈耐药现象的研究

鲍曼不动杆菌对氨基糖苷类药物双圈耐药现象的研究

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作者：张晓文南京师范大学

学位级别：硕士

鲍曼不动杆菌是导致医院内感染的一种重要的条件致病菌,尤其是在重症监护病房（ICU）的病人中。引起院内感染的病原菌多数为耐药菌,对包括β-内酰胺类、氨基糖苷类及喹诺酮类在内的多种抗生素均耐药,因此给临床治疗造成极大的困难。 ... 详细信息

鲍曼不动杆菌是导致医院内感染的一种重要的条件致病菌,尤其是在重症监护病房（ICU）的病人中。引起院内感染的病原菌多数为耐药菌,对包括β-内酰胺类、氨基糖苷类及喹诺酮类在内的多种抗生素均耐药,因此给临床治疗造成极大的困难。氨基糖苷类抗生素临床应用广泛,尤其是在治疗革兰阴性菌引起的危重感染时。该抗生素通过与原核生物30s核糖体亚基16s rrna高度保守的A位点结合而阻碍蛋白质的合成,继而导致细菌死亡。耐该类抗生素的机制主要包括产氨基糖苷修饰酶、作用靶位改变、膜通透性降低和外排系统导致的细胞内药物浓度降低等多种因素。本文旨在探讨在K-B法药物敏感试验中对氨基糖苷类抗菌药物双圈耐药的鲍曼不动杆菌耐药基因携带状况、药物诱导对耐药基因mRNA表达量的影响以及全自动微生物鉴定及药敏分析仪VITEK2 Compact检测鲍曼不动杆菌对阿米卡星药物敏感试验的准确性及造成检测误差的原因。我们用PCR扩增法对编码整合子酶的基因和整合子可变区进行扩增,并联合RFLP和DNA测序技术分析可变区耐药基因。同时对4种常见的氨基糖苷修饰酶基因及3种16s rrna甲基化酶基因armA,rmtB及rmtC进行扩增,对扩增结果为阳性的基因利用RT-PCR的方法分析阿米卡星诱导前后耐药基因表达量。结果发现：85.7%（48/56）的双圈耐药菌株检测到Ⅰ类整合子,RFLP分型和DNA测序结果表明,整合子可变区携带的基因盒为aacA4-catB-aadAl, aacCI-orfX-aadAl及dfrA17-aadA5。36株检测出aacA4,10株检测出aacC1,5株检测出aacC2,所有菌株均未检测出aphA6,其中2株同时检出aacA4和aacC2。所有双圈耐药菌株均检测到armA基因,未检测到rmtB及rmtC,敏感菌株和普通耐药菌检测3种甲基化酶基因均为阴性。RT-PCR结果显示经阿米卡星诱导后细菌armA基因mRNA表达量显著上升。VITEK2 Compact检测鲍曼不动杆菌对阿米卡星药物的结果误差主要出现在K-B法表型为双圈耐药的菌株,这些菌几乎均被误判为敏感。由此我们得出的结论：介导鲍曼不动杆菌对氨基糖苷类药物双圈耐药的主要原因并非整合子可变区基因盒而是armA基因,该基因通过诱导表达产生的甲基化酶导致16s rrna甲基化从而阻碍阿米卡星与药物靶位结合。此外,armA基因阳性的双圈耐药菌株在液体培养基中所产生的细菌浊度较低,VITEK2 Compact检测仪进行吸光度扫描时无法判定为细菌生长,误判为细菌生长被抑制,影响了临床报告的准确性。

关键词：鲍曼不动杆菌双圈耐药氨基糖苷类药物整合子 16s rrna甲基化酶基因 VITEK 2 Compact

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