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MicroRNA Expression Profiles and MiR-10a Target in Anti-benzo[a] pyrene-7,8-diol-9,10-epoxide-transformed Human 16hbe Cells

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Biomedical and Environmental Sciences 2009年第1期22卷 14-21页

作者： YUE-LAN SHEN YI-Guo JIANG ANNE R. GREENLEE LAN-LAN ZHOU LIN-HUA LIU lnstitute for Chemical Carcinogenesis Guangzhou Medical College Guangzhou 510182 Guangdong China Stem Cell and Primary Cell Group The Jackson Laboratory Bar Harbor ME 04609 USA

Objective To screen miRNA profiles of malignantly transformed human bronchial epithelial cells, 16hbe-T, induced by anti-benzo[a]pyrene-trans-7,8-diol-9,10-epoxide （anti-BPDE）, and to analyze putative miR-10a targets in 16hbe-T. Methods A novel microarray platform was employed to screen miRNA profiles of 16hbe-T cells transformed by anti-BPDE. Microarray data for miR-10a and miR-320 were validated using quantitative real time polymerase chain reaction （QRT-PCR）. The expression of a putative target for miR-10a, HOXA1, was analyzed by reverse transcription polymerase chain reaction （RT-PCR） and QRT-PCR. Results In comparison with the vehicle-treated cells （16hbe-N）, 16hbe-T exhibited differential expression of 54 miRNAs, in which, 45 were over-expressed and 9 were down-regulated. The five most highly expressed miRNAs were miR-494, miR-320, miR-498, miR-129, and miR-106a. The lowest expressed miRNAs were miR-10a, miR-493-5p, and miR-363＊. Three members of miR-17-92 cluster, miR-17-5p, miR-20a, and miR-92, showed significantly higher abundance in 16BHE-T as miR-21, miR-141, miR-27a, miR-27b, miR-16 and miRNAs of the let-7 family. The putative target for miR-10a, HOXA1 mRNA was up-regulated 3-9-fold in 16hbe-T, as compared with 16hbe-N. Conclusion The findings of the study provide information on differentially expressed miRNA in malignant 16hbe-T, and also suggest a potential role of these miRNAs in cell transformation induced by anti-BPDE. HOXA1 is similarly up-regulated, suggesting that miR-10a is associated with the process of HOXA 1-mediated transformation.

关键词： MicroRNA Anti-BPDE Malignant transformation 16hbe

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香烟烟雾提取物诱导16hbe细胞MUC5AC上调的机制

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实用医学杂志 2022年第18期38卷 2309-2317页

作者：田晨刘志辉孟繁荣李华何湘蓉胡锦兴广州医科大学研究生院广州510120 广州市胸科医院肺研所广州510120

目的本实验旨在利用转录组测序技术探索参与香烟烟雾提取物(CSE)诱导16hbe细胞MUC5AC上调的信号通路及其分子机制,为寻找新的慢性阻塞性肺疾病(COPD)黏液高分泌药物作用靶点提供理论依据。方法利用转录组测序技术检测CSE引起16hbe细胞... 详细信息

目的本实验旨在利用转录组测序技术探索参与香烟烟雾提取物(CSE)诱导16hbe细胞MUC5AC上调的信号通路及其分子机制,为寻找新的慢性阻塞性肺疾病(COPD)黏液高分泌药物作用靶点提供理论依据。方法利用转录组测序技术检测CSE引起16hbe细胞差异表达的基因(DEGs),通过生物信息学分析挖掘出可能参与CSE诱导16hbe细胞MUC5AC上调的信号通路及相关基因。利用RT⁃qPCR技术验证所筛选的信号通路中相关基因转录水平;利用信号通路激动剂及siRNA干扰技术分别验证该信号通路及相关基因是否参与CSE诱导的16hbe细胞MUC5AC上调过程。结果转录组测序共检测到2567个DEGs,生物信息学分析结果显示16hbe细胞中MAPK信号通路、WNT信号通路、PI3K⁃Akt等信号通路在受到CSE刺激后表达异常。RT⁃qPCR结果显示CSE刺激16hbe后WNT4、WNT5B、WNT6、WNT10A基因的转录水平较对照组分别下调了0.885、0.893、0.705、0.618倍(P16hbe细胞MUC5AC转录水平较对照组上调3.197倍(P=0.0313)。而在小分子干扰实验中,WNT5B siRNA组+CSE组MUC5AC mRNA较阴性对照+CSE组上调2.092倍(P=0.0162)。结论非经典WNT信号通路中的WNT5B在CSE刺激16hbe细胞后下调,并参与CSE诱导的MUC5AC的表达上调。

关键词：慢性阻塞性肺疾病香烟烟雾提取物 16hbe 黏液高分泌 WNT信号通路转录组测序

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硫酸铍致16hbe细胞上皮-间质转化中JAK-STAT通路的作用及其调控机制研究

硫酸铍致16HBE细胞上皮-间质转化中JAK-STAT通路的作用及其调控机...

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作者：孙站兵南华大学

学位级别：硕士

目的:通过干预JAK-STAT通路信号传导及敲低其上游信号分子白血病抑制因子(Leukemia inhibitory factor,LIF),探讨JAK-STAT通路在硫酸铍致16hbe细胞上皮-间质转化(Epithelial-mesenchymal transition,EMT)中的作用及其调控机制,结合前期研究,进一步阐明硫酸铍的毒作用机制。方法:1.用0、100、150、200、250、300μmol/L的硫酸铍处理16hbe细胞48h,蛋白免疫印迹法(WB)检测LIF及JAK-STAT通路蛋白(JAK1、STAT3、p-JAK1、p-STAT3)的表达水平。使用2.5μmol/L的氯硝柳胺(JAK-STAT通路抑制剂)预处理16hbe细胞8h后,再用150μmol/L的硫酸铍处理16hbe细胞48h,WB检测炎症相关蛋白(i NOS、COX2)与EMT相关蛋白(Collagen Type I、α-SMA、Snail、E-Cadherin)的表达水平。2.用LIF-si RNA处理16hbe细胞6h后,再用150μmol/L的硫酸铍处理16hbe细胞48h,WB检测JAK-STAT通路蛋白以及EMT相关蛋白的表达水平。3.结合前期研究推测LIF可能受mi R-663b调控。使用Target Scan网站预测LIF与mi R-663b结合位点,并构建含野生型(WT)与突变型(MUT)序列的双荧光素酶报告质粒载体(pmi R-RB-Report),将质粒载体与mi R-663b mimics共转染,双荧光素酶报告实验检测LIF与mi R-663b的结合关系。结果:1、与对照组比较,硫酸铍处理16hbe细胞后JAK-STAT通路中JAK1和STAT3蛋白表达水平无明显改变;SOCS3蛋白表达水平显著降低,p-JAK1、p-STAT3的水平显著升高(P16hbe细胞中p-STAT3的表达水平(P16hbe细胞中i NOS、COX2、Collagen Type I、α-SMA、Snail蛋白表达水平上升,E-Cadherin蛋白表达水平下降(P16hbe细胞中i NOS、COX2、Collagen Type I、α-SMA、Snail蛋白表达水平下降,E-Cadherin蛋白表达水平上升(P16hbe细胞后,各组细胞中LIF表达水平均上升(P16hbe细胞内p-JAK1、p-STAT3、Collagen Type I、α-SMA、Snail蛋白表达水平下降,E-Cadherin蛋白表达水平上升(P16hbe细胞炎症反应与EMT过程。2、硫酸铍通过增加细胞中LIF的表达,激活JAK-STAT通路诱导16hbe细胞发生EMT过程。

关键词：硫酸铍 16hbe JAK-STAT通路 LIF

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自噬与NLRP3炎性小体对PM2.5诱导16hbe细胞上皮间质转化的影响机制

自噬与NLRP3炎性小体对PM2.5诱导16HBE细胞上皮间质转化的影响机制

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作者：林青青西南医科大学

学位级别：硕士

目的:空气污染是重要的、全球性的公共威胁。细颗粒物(fine particulate matter,PM)作为首要污染物的大气环境问题十分严峻,严重危害人类健康,其中最为直接的是呼吸系统损伤。上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)不仅... 详细信息

目的:空气污染是重要的、全球性的公共威胁。细颗粒物(fine particulate matter,PM)作为首要污染物的大气环境问题十分严峻,严重危害人类健康,其中最为直接的是呼吸系统损伤。上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)不仅参与器官纤维化,还与肿瘤的侵袭转移相关。自噬是通过将受损细胞器和蛋白降解,用以维持细胞内平衡的方式,对疾病有重要的调节作用。本课题通过PM体外染毒支气管上皮细胞(16hbe)的方式,探讨PM诱导16hbe细胞上皮间质转化的机制,以及自噬与Nod样受体蛋白3(Nod-like receptor protein 3,NLRP3)在对EMT的调控作用和机制,以进一步了解PM的致病机理并提供毒理学依据,为大气环境疾病提出理论依据,以探索预防PM相关疾病的方法和治疗方向。方法:(1)PM样本来自四川省绵阳市;使用X射线衍射光谱仪检测样本的主要矿物颗粒;激光粒度分析仪检测样本粒径大小的分布情况。(2)用不同浓度的PM浓度体外染毒16hbe细胞,12h、24h、48h后,使用CCK-8试剂检测细胞存活率,评估PM对16hbe细胞的毒性作用。(3)PM染毒16hbe细胞24h后,倒置显微镜直接镜检和瑞氏-吉姆萨复合染色的方式观察细胞形态变化;荧光色素单丹磺酰尸胺(MDC)法染色检测自噬活性;Western blot法检测LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、NLRP3、caspase-1、α-SMA、E-cadherin蛋白表达;DCFH-DA染色后,荧光显微镜观察ROS情况,并用流式细胞术检测16hbe细胞的ROS荧光水平。(4)200μg/m L PM联合自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA)处理16hbe细胞后,Western blot法检测LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、NLRP3、caspase-1、α-SMA、E-cadherin蛋白表达,DCFH-DA染色结合流式细胞术检测分析胞内ROS的荧光强度,探讨3-MA对NLRP3炎性小体、EMT、ROS的影响。(5)200μg/m L PM联合NLRP3抑制剂MCC950处理16hbe细胞后,使用Western blot法检测NLRP3、caspase-1、α-SMA、E-cadherin蛋白表达,DCFH-DA染色结合流式细胞术检测ROS水平情况,探讨MCC950对PM诱导16hbe细胞EMT和ROS的影响。结果:(1)PM样本主要的矿物颗粒为石英;样本中95%的颗粒粒径小于等于2.00μm。(2)PM染毒可降低16hbe细胞存活率,随着PM浓度和染毒时间的增加,细胞存活率亦逐渐降低,呈一定的剂量和时间依赖性。(3)PM染毒16hbe之后,部分细胞失去原有形态逐渐伸长呈梭形,细胞间隙增宽,排列紊乱,出现间质细胞特性;经MDC染色并用荧光显微镜观察发现细胞荧光强度增强,自噬活性增强,同时自噬蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、NLRP3、caspase-1、α-SMA蛋白表达增加,E-cadherin降低,ROS水平增加。(4)200μg/m L PM联合自噬抑制剂3-MA处理16hbe细胞后,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、NLRP3、caspase-1、α-SMA蛋白表达降低,E-cadherin升高,并使ROS水平的下降。(5)MCC950可下调LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、NLRP3、caspase-1、α-SMA,上调E-cadherin蛋白表达,并伴随着胞内ROS水平的降低。结论:(1)短期的PM暴露可促进16hbe细胞自噬的发生、NLRP3炎性小体的活化,并诱导EMT形态的改变和相关蛋白的表达。(2)自噬抑制剂3-MA在抑制自噬的同时,可以抑制NLRP3炎性小体和PM诱导16hbe发生的EMT,并降低胞内ROS的荧光强度。(3)NLRP3炎性小体抑制剂MCC950可抑制EMT,并伴随着ROS的降低。

关键词： PM2.5 自噬 NLRP3 上皮间质转化 16hbe

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pEGFP-C2-hTim-3真核表达载体的构建和hTim-3质粒稳定转染16hbe细胞株的建立

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中国病原生物学杂志 2014年第10期9卷 888-893,945页

作者：刘嵘李一荣胡丽华长江大学医学院病原生物学部湖北荆州434000 华中科技大学同济医学院附属协和医院检验科湖北武汉430022

目的筛选表达Tim-3的人呼吸道相关细胞株,为进一步阐明Tim-3可能与人呼吸道疾病相关奠定基础;构建pEGFP-C2-hTim-3真核表达载体,以期用于hTim-3的功能研究。将测序正确的重组质粒pEGFP-C2-hTim-3转染入人支气管上皮细胞株16hbe中,筛选... 详细信息

目的筛选表达Tim-3的人呼吸道相关细胞株,为进一步阐明Tim-3可能与人呼吸道疾病相关奠定基础;构建pEGFP-C2-hTim-3真核表达载体,以期用于hTim-3的功能研究。将测序正确的重组质粒pEGFP-C2-hTim-3转染入人支气管上皮细胞株16hbe中,筛选出阳性细胞克隆,为后续实验提供理论基础。方法用含10%胎牛血清的高糖DMEM培养基于37℃5%CO2饱和湿度培养箱中体外培养人呼吸道相关细胞株16hbe、A549和GLC-82,调整细胞到最佳状态,对数生长期时收集细胞,抽提总RNA,逆转录为cDNA。参照人GenBank中Tim-3基因的全长序列,使用Primer5.0设计并合成其引物,采用PCR检测以上3种细胞Tim-3的mRNA。将健康人外周血Tim-3基因全长cDNA片段克隆入真核表达载体pEGFP-C2,经菌落PCR、双酶切及测序鉴定,构建包含目的基因Tim-3的重组质粒pEGFPC2-hTim-3。利用脂质体介导pEGFP-C2-hTim-3质粒和pEGFP-C2质粒分别转染16hbe细胞,荧光显微镜下观察16hbe细胞的瞬时转染效率,并采用含G418的培养基筛选以获得整合pEGFP-C2-hTim-3和pEGFP-C2的阳性细胞克隆,用荧光显微镜观察pEGFP-C2-hTim-3和pEGFP-C2在16hbe细胞上的定位表达。结果 1)PCR显示人呼吸道相关细胞株16hbe、A549和GLC-82均表达Tim-3 mRNA;2)构建了具有筛选特征和能够稳定表达的pEGFP-C2-hTim-3质粒载体,测序结果与预期设计完全一致;3)瞬时转染后经荧光显微镜检查可见表达pEGFP-C2-hTim-3绿色荧光蛋白的16hbe细胞不足8%,表达pEGFP-C2绿色荧光蛋白的16hbe细胞不足15%。采用G418筛选后获得表达野生型hTim-3和外源性pEGFP-C2-hTim-3的16hbe细胞及转染pEGFP-C2空质粒的16hbe细胞,经荧光显微镜观察前者定位在胞膜上,后者定位于胞质中。结论人呼吸道相关细胞株16hbe、A549和GLC-82均表达Tim-3mRNA,Tim-3可能与人类呼吸道疾病的发生和发展相关。成功构建了真核表达载体pEGFP-C2-hTim-3并获得了高表达pEGFP-C2-hTim-3的16hbe阳性克隆细胞,可供后续研究使用。

关键词： 16hbe hTim-3 PCR 克隆转染筛选

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香烟烟雾冷凝物急性染毒对16hbe细胞Rap2B基因表达的影响

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毒理学杂志 2012年第3期26卷 191-194页

作者：周明龚春梅杨淋清霍俊章庄志雄夏菠吴德生刘建军徐新云张巧郑州大学公共卫生学院毒理学教研室河南郑州450001 深圳市疾病预防控制中心现代毒理学重点实验室

目的观察CSC急性染毒对人支气管上皮细胞的毒性特征及Rap2B基因表达的影响,推测Rap2B基因在急性染毒阶段的作用,为后续研究提供实验依据。方法 16hbe细胞暴露香烟烟雾冷凝物(CSC)24 h,于倒置显微镜下观察细胞形态变化,CCK-8法确定染毒剂... 详细信息

目的观察CSC急性染毒对人支气管上皮细胞的毒性特征及Rap2B基因表达的影响,推测Rap2B基因在急性染毒阶段的作用,为后续研究提供实验依据。方法 16hbe细胞暴露香烟烟雾冷凝物(CSC)24 h,于倒置显微镜下观察细胞形态变化,CCK-8法确定染毒剂量,荧光定量PCR检测该基因mRNA表达水平,Western Blot检测其蛋白表达水平。结果 CSC对16hbe细胞有毒性作用,半数抑制浓度(IC50)为(0.08±0.006)mg/ml;CSC染毒16hbe细胞24 h后,细胞形态发生一定改变,高剂量组细胞出现明显形态学改变;与对照组比较,1/8 IC50剂量组mRNA和蛋白表达水平上调较高(P<0.05),随剂量组浓度增高mRNA和蛋白表达下调至最低(IC50组,P<0.05)。结论 Rap2B基因的表达在一定范围随着染毒浓度的改变呈现先升高后下降的趋势,提示Rap2B基因可能作为CSC靶基因在其急性染毒过程中发挥一定的作用。

关键词：香烟烟雾冷凝物 16hbe Rap2B基因

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二羟环氧苯并芘诱导16hbe细胞转化最佳实验方案

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环境与健康杂志 2001年第3期18卷 137-139,178页

作者：蒋义国陈家堃陈学敏广州医学院化学致癌研究所 510182 华中科技大学同济医学院环境卫生学教研室

目的　采用客观又简单的软琼脂细胞集落形成率的指标来探索二羟环氧苯并芘诱导 16 hbe细胞转化的理想实验方案 ,构建恶性转化的细胞模型。方法　根据细胞存活率试验及克隆形成率试验确定诱导的剂量 ,以不同剂量二羟环氧苯并芘 1次或多... 详细信息

目的　采用客观又简单的软琼脂细胞集落形成率的指标来探索二羟环氧苯并芘诱导 16 hbe细胞转化的理想实验方案 ,构建恶性转化的细胞模型。方法　根据细胞存活率试验及克隆形成率试验确定诱导的剂量 ,以不同剂量二羟环氧苯并芘 1次或多次处理细胞 ,观察培养的不同阶段转化灶出现情况 ,用软琼脂培养鉴定其锚着依存性生长的恶性特征 ,比较各组转化细胞的集落形成率。结果　以 0 .1、0 .5、1.0、2 .0 μmol/ L的剂量 ,对细胞多次间断染毒 ,传代 15次 ,是二羟环氧苯并芘诱导 16 hbe细胞恶性转化的理想方案 ,其集落形成率分别为 2 .0‰、5 .5‰、7.0‰、10 .5‰ ,剂量 -反应关系呈现良好的直线相关 ,r=0 .9741,P16 hbe转化。

关键词：二羟环氧苯并芘恶性转化支气管上皮细胞 16hbe 细胞转化诱导环境污染物化学污染物

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LPS对16hbe细胞AQP1、AQP5表达的影响及作用机制

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免疫学杂志 2015年第2期31卷 111-115页

作者：丁伟伟童佳兵杨程徐增梅李泽庚安徽中医药大学研究生院合肥230031 安徽中医药大学第一附属医院呼吸内科合肥230038

目的探讨LPS对16hbe细胞AQP1、AQP5表达的影响及作用机制。方法用1、10、100、500、1 000 ng/ml的LPS干预16hbe细胞24 h,real-time PCR检测AQP1、AQP5 m RNA的表达;用100 ng/ml的LPS分别干预16hbe细胞0、3、6、12、24、48 h,real-time PCR检测AQP1、AQP5 m RNA的表达;以100 ng/ml的LPS分别干预16hbe细胞0、5、15、30、60 min,Western blot检测p38 MAPK信号通路的变化;LPS单独或联合p38 MAPK特异性阻断剂SB203580干预16hbe细胞24 h,real-time PCR和Western blot分别检测AQP1、AQP5的变化及p38 MAPK信号通路的变化。结果与对照组相比,10、100、500、1 000 ng/ml的LPS均可显著抑制AQP1和AQP5的表达(P16hbe细胞3 h后,AQP1和AQP5 m RNA的表达即发生下降,并于24 h降到最低;LPS能够显著激活p38 MAPK信号通路,其磷酸化水平于30 min达到高峰;与LPS单独干预组相比,LPS+SB203580组AQP1和AQP5的表达水平发生明显上升(P16hbe细胞AQP1和AQP5的表达。

关键词：脂多糖 16hbe 水通道蛋白1 水通道蛋白5 p38 MAPK

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高迁移率族蛋白B1对16hbe细胞血管内皮生长因子表达和分泌的影响

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郑州大学学报（医学版） 2015年第1期50卷 91-94页

作者：侯长春梁悦邬丽红罗劲刘丽华陈一强广西医科大学第一附属医院呼吸疾病研究所南宁530021

目的:探讨高迁移率族蛋白B1(HMGB1)对人支气管上皮细胞(16hbe)血管内皮生长因子(VEGF)表达和分泌的影响及可能调控机制。方法:16hbe按以下方法分组。1HMGB1不同质量浓度组:0、100、500、2 000μg/L HMGB1刺激16hbe 24 h。2HMGB1不同作... 详细信息

目的:探讨高迁移率族蛋白B1(HMGB1)对人支气管上皮细胞(16hbe)血管内皮生长因子(VEGF)表达和分泌的影响及可能调控机制。方法:16hbe按以下方法分组。1HMGB1不同质量浓度组:0、100、500、2 000μg/L HMGB1刺激16hbe 24 h。2HMGB1不同作用时间组:对照组,2 000μg/L HMGB1分别刺激16hbe 6、12、24h组。MTT检测上述各组干预后16hbe的细胞活力,实时荧光定量PCR检测16hbe VEGF mRNA表达水平的变化,ELISA检测细胞培养上清中VEGF水平。应用P38 MAPK通路特异性抑制剂SB-202190观察其对HMGB1诱导VEGF表达和分泌的影响。结果:随HMGB1作用浓度的增加和作用时间的延长,VEGF的表达和分泌呈上升趋势(P均0.05)。HMGB1刺激增加了16hbe细胞VEGF的表达和分泌,SB-202190几乎完全抑制了HMGB1诱导的VEGF的表达和分泌(P均<0.05)。结论:HMGB1可能通过P38 MAPK通路介导支气管上皮细胞VEGF的表达和分泌。

关键词：支气管哮喘高迁移率族蛋白B1 16hbe 血管内皮生长因子

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雅安城区PM2.5对人支气管上皮细胞(16hbe)的毒性作用和氧化应激反应

雅安城区PM2.5对人支气管上皮细胞(16HBE)的毒性作用和氧化应激反...

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作者：杨莉琳四川农业大学

学位级别：硕士

近几年来,雾霾天气愈发频繁,严重影响人们的健康,已成为许多学者关注的热点。雾霾的主要成分是PM(空气动力学直径≤2.5μm的大气悬浮颗粒物)。PM可直接被吸入肺部,导致机体产生氧化应激反应和炎症反应,也可引起血压升高、动脉粥样硬化... 详细信息

近几年来,雾霾天气愈发频繁,严重影响人们的健康,已成为许多学者关注的热点。雾霾的主要成分是PM(空气动力学直径≤2.5μm的大气悬浮颗粒物)。PM可直接被吸入肺部,导致机体产生氧化应激反应和炎症反应,也可引起血压升高、动脉粥样硬化形成、凝血和抗凝系统失衡及自主神经系统功能改变等疾病。每年全球约有320万人因PM而导致死亡,PM成为全球健康的第6号杀手。雅安市位于四川盆地西部边缘,由于城市工业化进程不断加快,同时成都等周边城市的雾霾会飘入雅安,使得雅安出现雾霾天气增多,对人体健康构成严重的威胁。因此,本研究采集雅安市雨城区PM,研究其对人支气管上皮细胞(16hbe)毒性及氧化应激的影响,为PM生物学功能,及其相关疾病的预防和治疗提供科学的理论依据。本试验用TE-6070-2.5型大流量采样器和长方形石英纤维滤膜(QFF)从雅安城区收集PM,并进行成分分析。通过有机试剂(甲醇:二氯甲烷=1:1)超声提取有机成分,并用去离子水超声提取水溶性离子成分,最后将其混合作为试验用PM样品,用1640完全培养基配制不同浓度的PM悬液(12.5、25,、50和100 μg/mL)作为剂量组,用1640完全培养基配作为空白对照组,在5%CO、37 ℃饱和湿度下处理人支气管上皮细胞(16hbe)24h后,胰酶消化收集细胞;采用MTT法检测细胞毒性,PI染色法检测细胞周期分布情况,以及Hoechst3328染色法镜下观察细胞核的凋亡形态;利用流式细胞术和分光光度法,分别检测ROS水平,MDA含量和SOD活性。结果显示,PM中的OC浓度为19.8 ± 11.9 μg/m3,EC浓度为1.26 ± 0.76μg/m3,各离子浓度分布趋势为SO,>NO>NH>K>Cl>Na>Ca>Mg。各金属元素浓度分布情况为 A1>Fe>Zn>Mn>Pb>Ba>Cu>Cr>Ti>Sr>As>Cd>Ni>Mo>V。在细胞试验中,16hbe细胞经25～100μg/mLPM处理后,细胞的生长受到不同程度的抑制,抑制率分别为11.39%、35.44%、73.38%。利用流式细胞仪分析细胞周期发现,100μg/mL的PM可使16hbe细胞阻滞于G2/M期,导致细胞有丝分裂受阻,但PM浓度较低时无显著性影响。在Hoechst33258染色试验中,16hbe细胞核形态随着PM浓度的增加而出现更严重的变形,导致细胞凋亡。与PM共孵育后的16hbe细胞,ROS水平明显增加,尤其是PM浓度为50～100μg/mL时,与对照组相比,差异极显著(p16hbe细胞有明显毒性作用,并诱导其产生较强的氧化应激反应。这些数据说明雅安城区PM对人体健康构成了潜在的威胁,有助于人们提高环境保护意识。

关键词： PM2.5 16hbe 细胞毒性氧化应激

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