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中国病原生物学杂志 2012年第1期7卷 26-29页

作者：张慧芳侯玉英岳慧萍赵云鹤赫燕侠刘红丽山西医科大学医学寄生虫学研究所山西太原030001 湖北应城市人民医院病理科湖北应城432400 山西医科大学解剖学教研室山西太原030001

目的通过检测弓形虫感染孕鼠胎盘分泌的胰岛素生长因子-Ⅱ(IGF-Ⅱ)含量和11β-羟基类固醇脱氢酶-2(11β-HSD2)的表达,分析弓形虫感染对孕鼠胎盘激素水平和胎鼠发育的影响。方法腹腔接种弓形虫速殖子0.2ml/只(含50个速殖子)感染孕8d小鼠... 详细信息

目的通过检测弓形虫感染孕鼠胎盘分泌的胰岛素生长因子-Ⅱ(IGF-Ⅱ)含量和11β-羟基类固醇脱氢酶-2(11β-HSD2)的表达,分析弓形虫感染对孕鼠胎盘激素水平和胎鼠发育的影响。方法腹腔接种弓形虫速殖子0.2ml/只(含50个速殖子)感染孕8d小鼠,分别于感染后12、14、16和18d处死,取胎盘组织,用酶联免疫吸附试验检测IGF-Ⅱ含量,用免疫组织化学法检测11β-HSD2的表达。未感染孕鼠做健康对照。结果健康对照组孕鼠胎盘组织IGF-Ⅱ含量随妊娠天数的增加逐渐升高,弓形虫感染组IGF-Ⅱ含量先降低后升高。IGF-Ⅱ含量不同妊娠天数组内比较差异有统计学意义(P11β-HSD2含量,不同妊娠天数健康对照鼠差异有统计学意义(P0.05);妊娠14d、16d、18d组间差异有统计学意义(P11β-HSD2表达降低,可能影响胎盘血管形成及糖原合成与转运及进入胎儿体内糖皮质激素的含量,从而导致胎儿发育异常。

关键词：弓形虫胰岛素生长因子-Ⅱ 11β-羟基类固醇脱氢酶-2

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不同剂量1,25(OH)2D3对哮喘小鼠肺树突状细胞表型和功能及MKP-1/p38MAPK/11βHSD2信号通路的影响

不同剂量1,25(OH)2D3对哮喘小鼠肺树突状细胞表型和功能及MKP-1/p...

引用

作者：查干武汉大学

学位级别：硕士

目的:(1)观察不同剂量1,25(OH)2D3对哮喘小鼠气道炎症和气道高反应性(ARH)的影响。(2)探讨不同剂量1,25(OH)2D3对哮喘小鼠肺树突状细胞(LDC)表型和功能及TH2和Th17炎症反应的影响。(3)探讨不同剂量1,25(OH)2D3对哮喘小鼠肺组织MKP1/p38M... 详细信息

目的:(1)观察不同剂量1,25(OH)2D3对哮喘小鼠气道炎症和气道高反应性(ARH)的影响。(2)探讨不同剂量1,25(OH)2D3对哮喘小鼠肺树突状细胞(LDC)表型和功能及TH2和Th17炎症反应的影响。(3)探讨不同剂量1,25(OH)2D3对哮喘小鼠肺组织MKP1/p38MAPK/11βHSD2信号通路的影响。方法:(1)参考文献建立相应的动物模型[1]:30只野生型C57BL/6小鼠在SPF级室内环境适应性饲养7天后,随机分为对照组(Control)、哮喘组(PBS/asthma)、低剂量组(LVD/asthma)、中剂量组(MVD/asthma)和高剂量组(HVD/asthma),每组6只。在第 1、8、15 天将 PBS/asthma、LVD/asthma、MVD/asthma 和 HVD/asthma组小鼠腹腔内注射200ul致敏液,Control组给以200uLPBS腹腔注射;第22天开始,将PBS/asthma和1,25(OH)2D3组小鼠置于自制的透明密闭容器内,1%OVA在雾化机的作用下每天1次雾化吸入激发,每次激发连续30min,到第35天停止。LVD/asthma、MVD/asthma和HVD/asthma激发前分别给每只小鼠腹腔注射1、4、10μg/kg 的 1,25(OH)2D3 混合液 20ul(包括 1,25(OH)2D3 0.02μg、无水乙醇 0.5μL 和 PBS 20ul)、80ul(1,25(OH)2D3 0.08μg、无水乙醇 2.0μL和 PBS 80ul)、200ul(1,25(OH)2D3 0.2μg、无水乙醇 5.0μL 和 PBS 200ul);PBS/asthma 组每次雾化激发前给以腹腔注射200ulPBS,Control组致敏和雾化激发均用PBS替代。在第35天激发24小时后采用小动物体肺功能仪(BUXCO)测定各小组的气道阻力和动态肺顺应性。在完成气道高反应测定后,紧接着取外周血,随后进行支气管肺泡灌洗液(BALF)和剪取肺组织。苏木精-伊红(HE)和过碘酸-雪夫染色(PAS)分别检测支气管周围及肺组织炎性细胞的浸润和支气管上皮杯状细胞的增生程度。支气管肺胞灌洗液离心后沉淀的细胞经瑞氏-吉姆萨(Wright-Giemsa)染色后进行分类计数;离心后的上清液经ELISA法检测Th1(IFN-λ)、Th2(IL-4、IL-5、IL-13)、Th17(IL-17A)和 Treg(IL-10)等细胞相关因子水平;并且用ELISA法检测血清中总免疫球蛋白E(IgE)和OVA特异性免疫球蛋白E(OVA-IgE)含量;(2)同前建立不同剂量1,25(OH)2D3干预的哮喘小鼠模型,用流式细胞术检测各小组肺树突状状细胞的数量和表面共刺激分子(CD40、CD80、CD86及MHCⅡ)表达及肺组织中Th1、Th2、Th17和Treg等细胞百分比,并且运用实时定量 PCR(qPCR)检测肺组织 Th1(T-bet)、Th2(GATA-3)、Th17(RORγt)和Treg(Foxp3)等细胞相关转录因子表达水平。(3)同前建立不同剂量1,25(OH)2D3干预的哮喘动物模型,运用Western blot和实时定量PCR(qPCR)检测各小组肺组织MKP1、p38MAPK及11βHSD2的蛋白质及mRNA的表达。结果:(1)与PBS/asthma组相比较,LVD/asthma和MVD/asthma组小鼠肺顺应性(Cdyn)增加及气道阻力降低,气道及肺实质炎性细胞浸润减轻,气道上皮杯状细胞数量及粘液分泌减少。BALF中的总细胞数、淋巴细胞数和嗜酸性粒细胞的数量减少,血清总IgE和特异性IgE(OVA-IgE)含量减少,BALF中IL-4、IL-5、IL-13和IL-17A的水平降低,IL-10及IFN-γ的升高,然而正好相反,与PBS/asthma组相比较,HVD/asthma组的气道阻力升高,气道及肺实质炎性细胞浸润加重,气道上皮杯状细胞数量及粘液分泌增加,BALF中的总细胞数、淋巴细胞数和嗜酸性粒细胞的数量增加;血清总IgE和特异性IgE(OVA-IgE)含量增加,BALF中IL-4、IL-5、IL-13和IL-17A的水平升高,IL-10及IFN-γ的水平降低。(2)与PBS/asthma组相比较,LVD/asthma和MVD/asthma组肺组织中LDCs数量及表面共刺激分子(CD40、CD80、CD86及MHCⅡ),Th2和Th17细胞的百分比及对应转录因子(GATA-3和RORyt)的表达明显减少;然而,HVD/asthma组肺组织中LDCs数量及表面共刺激分子(CD40、CD80、CD86及MHCⅡ),Th2和Th17细胞的百分比及对应转录因子(GATA-3和RORγt

关键词：支气管哮喘 1,25二羟维生素-D3 丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶-1 p38丝裂原活化蛋白激酶 11β-羟基类固醇脱氢酶-2

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