检索结果-南通市图书馆

河北工业大学学报 2016年第6期45卷 91-97页

作者：李贞景郭敏杨明冠武淑芬路来风王昌禄天津科技大学食品工程与生物技术学院天津300457 天津科技大学食品营养与安全教育部重点实验室天津300457

为建立具有较高产率和立体选择性的白地霉不对称还原1-萘乙酮体系,研究了不同底物浓度、反应体系pH、温度、菌丝体添加量、表面活性剂以及辅助底物对产率和对映体过量值(e.e.)的影响,优化了白地霉不对称还原1-萘乙酮的反应参数.结果表明... 详细信息

为建立具有较高产率和立体选择性的白地霉不对称还原1-萘乙酮体系,研究了不同底物浓度、反应体系pH、温度、菌丝体添加量、表面活性剂以及辅助底物对产率和对映体过量值(e.e.)的影响,优化了白地霉不对称还原1-萘乙酮的反应参数.结果表明,最优反应条件为:底物浓度1 mmol/L,反应体系pH=4,反应温度30℃,菌悬液浓度60 mg/mL,辅助底物20 g/L异丙醇,该体系下白地霉不对称还原1-萘乙酮的产率达84.24%,较优化前(62.80%)提高34.14%,e.e.值>99%.该结果可为生产中利用白地霉不对称合成S-1-萘基-1-乙醇提供参考.

关键词：白地霉不对称还原 1-萘乙酮 (S)-1-萘基-1-乙醇

来源：

维普期刊数据库

同方期刊数据库评论

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

随机-半理性组合突变改造ω-转氨酶催化合成(R)-1-(1-萘基)乙胺

引用

生物工程学报 2020年第9期36卷 1828-1837页

作者：曹旭东韩瑞枝方红辉倪晔江南大学生物工程学院江苏无锡214122 江南大学工业生物技术教育部重点实验室江苏无锡214122

(R)-1-(1-萘基)乙胺是合成拟钙剂药物盐酸西那卡塞的关键手性中间体,利用ω-转氨酶不对称还原1-萘乙酮合成(R)-1-(1-萘基)乙胺具有较好的应用前景。文中针对节杆菌属Arthrobacter sp.来源的ω-转氨酶,采用随机突变和半理性设计相结合的... 详细信息

(R)-1-(1-萘基)乙胺是合成拟钙剂药物盐酸西那卡塞的关键手性中间体,利用ω-转氨酶不对称还原1-萘乙酮合成(R)-1-(1-萘基)乙胺具有较好的应用前景。文中针对节杆菌属Arthrobacter sp.来源的ω-转氨酶,采用随机突变和半理性设计相结合的策略,获得了催化效率和热稳定性提高的突变酶F225M、C281I和F225M/C281I。与WT相比,双突变体F225M/C281I的kcat提高85%,Km下降56%,催化效率kcat/Km提高3.42倍。此外,F225M/C281I催化10mmol/L1-萘乙酮反应24h的转化率提高了22%。分子对接和分子动力学模拟结果表明,F225M/C281I相比于WT增加了与底物1-萘乙酮之间的Pi-Pi相互作用力,导致其催化效率的提高;而且突变酶F225M/C281I的134–139位点残基的均方根波动(RMSF)相比WT明显降低,与半衰期的略微提高相关。

关键词： ω-转氨酶随机突变半理性设计 1-萘乙酮 (R)-1-(1-萘基)乙胺

来源：

维普期刊数据库

同方期刊数据库评论

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

ω-转氨酶ArATA分子改造及合成手性萘乙胺的研究

ω-转氨酶ArATA分子改造及合成手性萘乙胺的研究

引用

作者：曹旭东江南大学

学位级别：硕士

(R)-1-(1-萘基)乙胺是合成拟钙剂药物盐酸西那卡塞的关键手性中间体,生物合成(R)-1-(1-萘基)乙胺的方法更加绿色环保,因而受到越来越多的关注。其中,ω-转氨酶(ω-transaminase)不对称还原前手性酮制备手性胺具有很多优势。本研究发现... 详细信息

(R)-1-(1-萘基)乙胺是合成拟钙剂药物盐酸西那卡塞的关键手性中间体,生物合成(R)-1-(1-萘基)乙胺的方法更加绿色环保,因而受到越来越多的关注。其中,ω-转氨酶(ω-transaminase)不对称还原前手性酮制备手性胺具有很多优势。本研究发现节杆菌属(Arthrobacter sp.KNK168)来源的ω-转氨酶ArATA可以不对称还原1-萘乙酮合成(R)-1-(1-萘基)乙胺,且具有良好的立体选择性(99%,R),但其催化活力较低,难以实现工业化应用。因此,通过分子改造提高ArATA对1-萘乙酮的催化活力,主要研究内容和结果如下:采用随机突变和半理性设计相结合的策略。一方面,通过易错PCR构建随机突变文库,同时建立适用于1-萘乙酮为底物的ω-转氨酶高通量筛选方法,筛选到活力提升的突变体F225M、G136I、C281I和T282S;另一方面,根据晶体结构(PDB:3WWI)进行底物对接分析,通过对底物结合口袋中16个位点进行保守性分析,发现V69、W156、W192、G224和A284高度保守。对剩余11个位点进行丙氨酸扫描并对G136、V199和S223点进行定点饱和突变,得到了活力提高的突变体G136I、V199W和S223P。将活力提高的以上6个突变位点进行组合突变,获得了三个优良突变体V199W/S223P、G136I/V199W/S223P和F225M/C281I。通过动力学参数测定,发现V199W/S223P、G136I/V199W/S223P和F225M/C281I的k/K分别为WT的9.9、9.3和4.4倍。G136I/V199W/S223P的热稳定性提高,半衰期提高了9%。底物谱测定发现V199W/S223P对所选酮底物活力均提高。将突变体应用于催化20 mM 1-萘乙酮还原胺化合成光学纯(R)-1-(1-萘基)乙胺,反应24小时后,V199W/S223P、G136I/V199W/S223P和F225M/C281I实现了转化率81.78±0.14%、73.45±0.82%和70.74±3.30%,较ArATA WT分别提高了29.34%、16.17%和11.87%。基于分子对接和分子动力学模拟分析,V199W/S223P、G136I/V199W/S223P和F225M/C281I的催化效率提高,可归因于活性中心口袋残基与底物1-萘乙酮的Pi-Pi T形相互作用的增强,以及与底物之间有相互作用的氨基酸残基数量的增加。通过分子动力学模拟计算验证了G136I/V199W/S223P热稳定性的提高可归因于Ile136引起Loop130～139的RMSF值的下降。此外,预反应状态分子动力学模拟显示V199W/S223P比WT更有利于反应的进行。上述结果表明,ArATA是一个具有应用开发潜力的生物催化剂,通过对其进行分子改造获得的突变体具有潜在的催化还原胺化1-萘乙酮制备光学纯(R)-1-(1-萘基)乙胺的应用潜力。

关键词： ω-转氨酶随机突变半理性设计 1-萘乙酮 (R)-1-(1-萘基)乙胺

来源：

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

欢迎您,

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

在线全文

在线全文

在线全文

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：

通借通还

欢迎您,

建议与咨询 留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

在线全文

在线全文

在线全文

请选择保存的检索档案： 新增检索档案 确定 取消

请选择收藏分类： 新增自定义分类 确定 取消

通借通还

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：