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雷洛昔芬对镉染毒后肾小管上皮细胞存活情况及1-α羟化酶表达的影响

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山东医药 2016年第30期56卷 5-8页

作者：潘罅尹友生李清初李康慧韦家智马文峰冷斌桂林医学院附属医院广西桂林541000

目的观察应用雷洛昔芬对镉染毒的肾小管上皮细胞存活情况及1-α羟化酶表达的影响,探讨雷洛昔芬治疗镉中毒导致肾毒性的机制。方法分离纯化SD大鼠肾小管上皮细胞原代细胞。分别用浓度为2.5、5.0、10.0、20.0、40.0μmol/L的氯化镉对肾小... 详细信息

目的观察应用雷洛昔芬对镉染毒的肾小管上皮细胞存活情况及1-α羟化酶表达的影响,探讨雷洛昔芬治疗镉中毒导致肾毒性的机制。方法分离纯化SD大鼠肾小管上皮细胞原代细胞。分别用浓度为2.5、5.0、10.0、20.0、40.0μmol/L的氯化镉对肾小管上皮细胞染毒24 h,采用MTT法测算肾小管上皮细胞的相对存活率。选取20.0μmol/L的氯化镉剂量作用于肾小管上皮细胞,分别用0.05、0.10、0.50、1.00μmol/L的雷洛昔芬干预24h,采用MTT法测算肾小管上皮细胞的相对存活率。将肾小管上皮细胞分为空白对照组、氯化镉组、雷洛昔芬组,空白对照组培养于DMEM培养基,氯化镉组以20.0μmol/L的氯化镉染毒肾小管上皮细胞,雷洛昔芬组以20.0μmol/L的氯化镉染毒后给予雷洛昔芬0.10μmol/L干预,均干预24 h,在显微镜下观察细胞形态,采用RT-PCR法检测肾小管上皮细胞1-α羟化酶mRNA表达。结果 2.5、5.0、10.0、20.0、40.0μmol/L的氯化镉干预24 h后,肾小管上皮细胞的相对存活率均降低(P均1),且氯化镉浓度较高时细胞相对存活率较低。对镉染毒后的肾小管上皮细胞以0.05、0.10、0.50、1.00μmol/L的雷洛昔芬干预24 h后,肾小管上皮细胞的相对存活率均高于镉染毒细胞(P均1)。空白对照组肾小管上皮细胞形态正常,氯化镉组肾小管上皮细胞形态异常、大量细胞死亡,雷洛昔芬组细胞形态异常较氯化镉组明显减轻。氯化镉组肾小管上皮细胞1-α羟化酶mRNA相对表达量低于空白对照组,雷洛昔芬组1-α羟化酶mRNA相对表达量高于氯化镉组(P均1-α羟化酶mRNA的表达。

关键词：肾小管上皮细胞雷洛昔芬氯化镉镉中毒肾毒性 1-α羟化酶骨质疏松

雷洛昔芬对镉诱导肾损伤致1-α羟化酶变化的干预

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雷洛昔芬对镉诱导肾损伤致1-α羟化酶变化的干预

作者：潘罅桂林医学院

学位级别：硕士

目的:本实验通过提取和体外培养SD大鼠的肾小管上皮细胞并建立氯化镉染毒的细胞模型,检测氯化镉染毒24h后以及雷洛昔芬干预氯化镉染毒24h后的SD大鼠肾小管上皮细胞的增殖情况,以及雷洛昔芬对氯化镉诱导下肾小管上皮细胞损伤致1-α羟化... 详细信息

目的:本实验通过提取和体外培养SD大鼠的肾小管上皮细胞并建立氯化镉染毒的细胞模型,检测氯化镉染毒24h后以及雷洛昔芬干预氯化镉染毒24h后的SD大鼠肾小管上皮细胞的增殖情况,以及雷洛昔芬对氯化镉诱导下肾小管上皮细胞损伤致1-α羟化酶的变化的干预,为临床上干预镉中毒引起的骨质疏松开辟新思路。方法:选取10只新生(出生不足24h)SD大鼠,SD大鼠肾小管上皮细胞原代的提取以及分离纯化采用Percoll密度梯度离心法,用细胞形态学鉴定法对所提取的肾小管上皮细胞进行鉴定。对于原代的培养,培养液所含胎牛血清的浓度需高些(本研究所用浓度为15%);对于传代细胞的培养,本研究使用的的浓度为10%。本研究所包含的全部检测方法均选取第3代肾小管上皮细胞。细胞相对生存率的检测采用MTT法,应用不同剂量(2.5、5、10、20、40μmol/L)的氯化镉对肾小管上皮细胞进行染毒,处理时间为24h;应用不同剂量的雷洛昔芬(0.05、0.1、0.5、1μmol/L)以及固定剂量的氯化镉(20μmol/L)共同处理细胞,处理时间为24h。将肾小管上皮细胞分为:A组(对照组):应用不添加任何试剂的低糖培养基10ml处理细胞;B组(氯化镉组):应用含有20μmol/L氯化镉的低糖培养液10ml处理细胞;C组(雷洛昔芬组):应用含有20μmol/L氯化镉以及0.1μmol/L雷洛昔芬的低糖培养液10ml处理细胞,处理时间为24h。逆转录-聚合酶链反应:1.三组肾小管上皮细胞总RNA的提取:选取Trizol法;2.逆转录:选用天跟逆转录试剂盒逆转录成c DNA;3.目的片段的扩增:选用RT-PCR法;4.1-α羟化酶基因的表达水平的检测。选取SPSS18.0统计软件对本研究数据进行统计学分析,P10cm皿底,培养的传代细胞呈多边鹅卵石铺路石状;本研究RT-PCR结果:A组肾小管上皮细胞与培养皿底贴合紧密,细胞形态正常;B组肾小管上皮细胞与培养皿底贴合不紧密,大部分细胞形态异常,大量细胞死亡;C组与B组的肾小管上皮细胞相比,细胞与培养皿底贴合较为紧密,较少数细胞发生形态改变。MTT实验显示:各镉染毒组细胞增值情况与对照组相比明显下降(P1),细胞增值情况与镉浓度呈反比,20μmol/L Cd Cl2作用24h即可使肾小管上皮细胞增值情况由100.00%下降至51.82%;各雷洛昔芬干预组肾小管上皮细胞增值情况与镉染毒组相比显著升高(P1),0.1μmol/L RAL干预24h后可使肾小管细胞的增值情况升高至168.85%。RT-PCR研究显示:B组1-α羟化酶基因的表达与A组相比显著下降(P﹤0.01);C组肾小管上皮细胞内1-α羟化酶基因的表达与B组相比明显增高(P1-α羟化酶基因的表达,进而调节体内钙磷代谢,从而干预重金属镉中毒导致的骨质疏松,为临床上应用RAL治疗重金属镉中毒导致的骨质疏松奠定基础。

关键词： 1-α羟化酶肾小管上皮细胞雷洛昔芬氯化镉

1-α羟化酶和人成纤维细胞生长因子-23基因修饰小鼠离体股骨及下颌骨X线影像的分形分析研究

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现代生物医学进展 2014年第32期14卷 6229-6232页

作者：杨春艳李书书王姝林梓桐刘澍王超王铁梅南京大学医学院附属口腔医院颌面影像科江苏南京210008 南京医科大学公共卫生学院江苏南京211166 南京医科大学康达学院江苏南京211166

目的:初步分析1-α羟化酶(1-alpha-hydroxylase,1α(OH)ase)、人成纤维细胞生长因子-23(fibroblast growth factor-23,FGF23)基因修饰小鼠离体股骨及下颌骨X线平片的分形维数(fractal dimension,FD),为其在骨质疏松症评价中的运用提供实验依据。方法:以6周龄的1α(OH)ase-/-、FGF23+、1α(OH)ase-/-FGF23+小鼠为模型,以同龄的野生型(Wild-Type,WT)小鼠为对照,采集小鼠的股骨和下颌骨,使用离体X-射线摄影评估骨质疏松状况,利用Image J软件测量各组小鼠股骨和下颌骨X-射线影像兴趣区域的FD值,分析其差异及相关性。结果:1)与WT小鼠相比,1α(OH)ase-/-、FGF23+、1α(OH)ase-/-FGF23+小鼠均出现骨质疏松征象,包括股骨和下颌骨骨长度及体积减少、骨密度明显下降,下颌磨牙、切牙及牙槽骨的射线透光度增高、牙髓腔宽大、根管变薄。2)1α(OH)ase-/-、FGF23+、1α(OH)ase-/-FGF23+小鼠的股骨头和股骨远端干骺端的FD值均较WT小鼠明显增加(P1α(OH)ase-/-、FGF23+、1α(OH)ase-/-FGF23+小鼠中明显增高(P1,P=0.049)。结论:FD值可以较好地反映骨质疏松状况,股骨干骺端、下颌骨升支是较合适的兴趣部位,分形分析可运用于下颌骨影像学的再分析。

关键词：小鼠 1-α羟化酶人成纤维细胞生长因子-23 骨质疏松症 X线影像分形分析

活性维生素D缺乏导致牙齿和下颌骨的发育障碍

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南京医科大学学报（自然科学版） 2009年第5期29卷 618-622页

作者：王骞苗登顺南京医科大学口腔医学院口腔医学研究所江苏南京210029

目的:为了检测活性维生素D缺乏及其母乳成分的改变是否影响小鼠下颌骨以及牙齿的发育。方法:通过采用X线摄影、微CT和组织学等方法比较分析25羟维生素D3的1α羟化酶杂合子[1α(OH)ase+/-]和纯合子[1α(OH)ase-/-]母鼠所喂养的纯合子和... 详细信息

目的:为了检测活性维生素D缺乏及其母乳成分的改变是否影响小鼠下颌骨以及牙齿的发育。方法:通过采用X线摄影、微CT和组织学等方法比较分析25羟维生素D3的1α羟化酶杂合子[1α(OH)ase+/-]和纯合子[1α(OH)ase-/-]母鼠所喂养的纯合子和杂合子小鼠下颌骨以及牙齿的表型差异。结果:母乳中的钙水平在1α(OH)ase-/-母鼠较1α(OH)ase+/-母鼠为低。1α(OH)ase-/-仔鼠的牙量和骨量较同窝1α(OH)ase+/-仔鼠明显下降,而由1α(OH)ase-/-母鼠所喂养仔鼠的牙量和下颌骨骨量比由1α(OH)ase+/-母鼠喂养的仔鼠要低。由1α(OH)ase+/-母鼠所喂养的1α(OH)ase+/-仔鼠牙量和下颌骨量最高,而由1α(OH)ase-/-母鼠所喂养的1α(OH)ase-/-仔鼠牙量和下颌骨量最低。结论:活性维生素D和高乳钙摄入各自具有刺激下颌骨和牙齿矿化和发育的作用,又具有协同作用。

关键词： 1,25(OH)2D3 1-α羟化酶下颌骨牙齿发育

从现代医学角度认识中医“肾主骨”之理论内涵

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内蒙古中医药 2016年第17期35卷 159-159页

作者：杨桂莲陈明成都中医药大学临床医学院四川成都610075 成都中医药大学附属医院.四川省中医院四川成都610075

有关"肾主骨"的论点,出自中医最早的经典著作《黄帝内经》中,认识到肾与人体骨骼的生长发育有着密切关系,并提出"肾藏精""骨者髓之府""肾生骨髓,髓生血"等论述。人体随着年龄的增长,肾精日暂亏虚,肾气不足,从而影响体内骨骼的正常发育,... 详细信息

有关"肾主骨"的论点,出自中医最早的经典著作《黄帝内经》中,认识到肾与人体骨骼的生长发育有着密切关系,并提出"肾藏精""骨者髓之府""肾生骨髓,髓生血"等论述。人体随着年龄的增长,肾精日暂亏虚,肾气不足,从而影响体内骨骼的正常发育,而导致骨质疏松、增生、退化等相关的肾性骨病。因此说明肾对人体的生长、发育,骨骼的健康有其重要的营养、促进、合成等作用。

关键词：肾主骨 1-α羟化酶骨形成蛋白-7 促红细胞生长因子 ldotho 成纤维细胞生长因子-23